Publication: Estudio de la función del gen DOCK10, inducible por IL-4 en linfocitos B, como factor de intercambio de nucleótidos de guanina y de los perfiles de expresión génica y microRNA en leucemias linfocíticas crónicas tratadas con IL-4 in vitro
Authors
Ruiz Lafuente, Natalia
item.page.secondaryauthor
Facultad de Medicina
item.page.director
Parrado González, Antonio
Publisher
Universidad de Murcia
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DOI
item.page.type
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Description
Abstract
En estudios previos, nuestro grupo identificó a DOCK10 como un gen cuya expresión se
induce por IL-4 en linfocitos B normales (LBN) y en leucemias linfocíticas crónicas (LLC). Dada
su pertenencia a la familia de proteínas DOCK, se sugiere un posible papel como regulador de
las GTPasas Rho. En la publicación 1 tratamos de responder algunas preguntas esenciales
sobre la función de DOCK10, tales como: (1) su especificidad para interaccionar con las
GTPasas Rho “clásicas”, que abordamos mediante la realización de ensayos “pulldown” tras
transfección transitoria en la línea celular 293T; (2) su papel potencial como GEF activador de
estas proteínas, que también abordamos mediante ensayos “pulldown” pero realizados en
este caso en un sistema de clones con expresión estable e inducible generado en la línea
celular HeLa; y (3) su papel en la morfología celular, dinámica del citoesqueleto de actina y
protrusiones de membrana mediante microscopía de fluorescencia en este mismo sistema.
Pudimos demostrar que las isoformas de primer exón mutuamente excluyente DOCK10.1 y
DOCK10.2 interaccionan in vitro de forma específica con las GTPasas Cdc42 y Rac1 en
condición libre de carga de nucleótido y que DOCK10.1 incrementa los niveles de activación de
ambas GTPasas. DOCK10.1 induce la transición desde una forma elongada y poligonal, hasta
una forma más redondeada, no poligonal, con incremento de filopodios y ondulaciones de
membrana, cambios compatibles con la activación de dichas GTPasasLa patogenia de la LLC es poco conocida, y la IL-4, como factor de crecimiento de los
linfocitos B, podría jugar un papel. La IL-4 ejerce un papel anti-apoptótico en la LLC, y algunos
estudios sugieren la hipótesis de que podría jugar un papel oncogénico. Puesto que una parte
importante de la acción de la IL-4 es muy probablemente ejercida a través de cambios
inducidos en la expresión génica, y ésta no ha sido suficientemente estudiada en LBN y LLC,
planteamos un análisis mediante microarrays en ambos tipos celulares (publicación 2). La IL-4
regula la expresión de al menos 229 genes, 189 en LLC y 123 en LBN, siendo 89 comunes, la
mayoría inducidos, y con mayor diferencia que los genes reprimidos, y también mayor
intensidad en LLC, sugiriendo que esta ruta es muy activa en esta patología. La mayoría de
estos genes no eran dianas conocidas de la IL-4. Además la respuesta génica a la IL-4 es
diferente en función de la expresión del factor pronóstico ZAP-70, a través de un mecanismo
que implica al factor de transcripción NFκB. También identificamos genes que se correlacionan
con la protección anti-apoptótica, tales como HOMER2 y BCL6.
En la publicación 3 estudiamos mediante microarrays la respuesta a la IL-4 de un tipo
de genes no convencionales denominados miRNAs, importantes en la regulación de laexpresión proteica. Identificamos 8 miRNAs maduros, miR-21 (5p y 3p), miR-362 (3p y 5p),
miR-500a-3p, miR-502-3p, y miR-532 (3p y 5p), que se inducen por la IL-4 en LLC, y esto ocurre
probablemente por un mecanismo “pasivo”, siendo miR-21 intragénico a VMP1, el resto de
miRNAs intragénicos a CLCN5, y ambos genes inducidos por la IL-4, de modo que los miRNAs se
inducirían incrustados dentro de los tránscritos primarios de ambos. Puesto que la IL-4 juega
un papel crucial en la evasión de la apoptosis y la resistencia a quimioterapia, la identificación
de los genes y miRNAs regulados por la IL-4 contribuiría a un mayor esclarecimiento de los
mecanismos moleculares de la señalización por la IL-4, lo que podría aprovecharse para buscar
alternativas terapéuticas mediante la manipulación de esta vía, con inhibidores específicos o
con nuevos abordajes más experimentales como el empleo de miRNAs.
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