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Embargo
Coupling of chromatographic techniques and mass spectrometry and ion mobility spectrometry : targeted and untargeted studies
(Universidad de Murcia, 2025-02-05) Giménez Campillo, Claudia; Campillo Seva, Natalia; Viñas López-Pelegrín, María Pilar; Escuela Internacional de Doctorado
Esta Tesis Doctoral se centra en el desarrollo y validación de métodos analíticos innovadores, que combinan la cromatografía de gases (GC) o la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detectores como la espectrometría de masas (MS), la espectrometría de movilidad iónica (IMS), detección mediante fila de diodos (DAD) y fluorescencia (FD) para la determinación de distintos tipos de analitos, como nitrosaminas (NAs), protoporfirinas, pteridinas y compuestos orgánicos volátiles (COV), en muestras alimentarias y biológicas, utilizando para ello dos estrategias diferentes que varían según el tipo de información que se busca obtener del estudio: el enfoque dirigido y enfoque no dirigido. Para llevar a cabo estas investigaciones, se han empleado las disciplinas emergentes foodómica y volatilómica. En la primera Sección de esta Tesis Doctoral se han desarrollado cinco métodos analíticos para la determinación de tres grupos específicos de compuestos analíticos. En el Capítulo I de esta Tesis Doctoral se han determinado y cuantificado NAs carcinogénicas en productos cárnicos mediante GC-MS, examinando específicamente si los envoltorios de goma elástica pueden incrementar sus niveles. En el Capítulo II, se ha desarrollado y validado un método analítico para la determinación de 15 NAs en muestras de heces y se ha estudiado cómo influye la dieta en la concentración de estos compuestos cancerígenos empleando un modelo animal de ratas en las que se ha inducido carcinogénesis. En el Capítulo III, se ha explorado la composición de protoporfirinas en jamones cocidos, elaborados tanto con nitritos como sin ellos. En el Capítulo IV, se ha investigado el potencial de las protoporfirinas en muestras de orina como biomarcadores de anemia en pacientes con la enfermedad inflamatoria intestinal, ya que los marcadores convencionales para monitorizar la anemia pueden ser ineficaces debido a la influencia de la inflamación. En el Capítulo V, se han monitorizado pteridinas en muestras de orina utilizando como método de preparación de la muestra una técnica conocida como diluir y disparar (dilute-and-shoot) que implica una mínima manipulación de la muestra. Este estudio exploró la correlación entre la presencia de pteridinas y diversas enfermedades, evaluando su potencial como biomarcadores prometedores. En la segunda Sección de esta Tesis Doctoral se han desarrollado cinco métodos analíticos empleando el enfoque no dirigido. Concretamente, aplicando la volatilómica se han analizado las huellas espectrales características de diversas matrices, permitiendo la detección de los compuestos volátiles presentes. El Capítulo VI recoge una revisión bibliográfica de los trabajos realizados hasta la fecha sobre el uso de la instrumentación IMS para la detección de COVs en el ámbito clínico. En el Capítulo VII, se investigó cómo el reemplazo de nitritos por polifenoles en la dieta de jamón cocido afecta la peroxidación lipídica luminal y la formación de focos desprovistos de mucina y aldehídos fecales genotóxicos en un modelo de cáncer de colon en ratas. En los Capítulos VIII, IX y X, se han realizado estudios para clasificar melocotones y peras de acuerdo con su origen geográfico, con el fin de validar la denominación de origen protegida otorgada recientemente a varias variedades en la Región de Murcia, cuyos perfiles de COVs no habían sido previamente examinados. Además, se han realizado estudios para predecir el estado óptimo de maduración de estas frutas, garantizando la calidad de la fruta y evitando pérdidas económicas. Finalmente, en el Capítulo XI se han desarrollado dos métodos analíticos basados en el volatiloma para asegurar la calidad del zumo de limón, ofreciendo una alternativa al método aplicado en la industria alimentaria basado en el uso de parámetros químicos de referencia o en el empleo de la técnica espectroscopia de infrarrojo cercano (NIR).
Open Access
Estrategias analíticas basadas en técnicas espectrométricas y enfoques quimiométricos para garantizar la seguridad alimentaria
(Universidad de Murcia, 2024-12-02) Castell Martínez, Ana; Viñas López-Pelegrín, Pilar; Arroyo Manzanares, Natalia; Escuela Internacional de Doctorado
Esta Tesis Doctoral tiene como objetivo el desarrollo de métodos analíticos que permitan la monitorización de contaminantes y compuestos de interés, así como la aplicación de estrategias analíticas que permitan dar una respuesta decisiva sobre la calidad y seguridad de distintos alimentos. De esta manera, en esta Tesis Doctoral se distinguen dos secciones: la primera sección se centra en el estudio de la exposición y acumulación de micotoxinas en el organismo, mientras que la segunda sección aborda diferentes estrategias para el control de calidad de diversos alimentos. Las micotoxinas son metabolitos secundarios producidos por hongos filamentosos de varias especies; principalmente Aspergillus, Penicillium, Fusarium y Alternaria. Estos contaminantes pueden producirse de manera natural en cereales, café, frutos secos, especias, y frutas y verduras susceptibles de contaminación fúngica, pudiendo causar efectos adversos en la salud humana y animal, ya que pueden acumularse en distintos órganos y tejidos. En consecuencia, la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA) establece contenidos máximos permitidos para varias micotoxinas en alimentos con objeto de garantizar la calidad y seguridad del producto. El método más común para evaluar la exposición de micotoxinas se basa en la combinación de datos de contaminación con datos de consumo; sin embargo, este enfoque presenta ciertas limitaciones, ya que no tiene en cuenta diversos factores como la variabilidad de los niveles de contaminación en los alimentos, el comportamiento de las micotoxinas frente al procesado de alimentos, el consumo individual y la toxicocinética y toxicodinámica de cada micotoxina. En esta Tesis Doctoral se desarrollan métodos analíticos para la detección y cuantificación de estos contaminantes en distintos tejidos biológicos con el objetivo de estudiar la ocurrencia y acumulación de las micotoxinas en el organismo. Además, se estudia el uso de biomarcadores para evaluar la exposición a las micotoxinas mediante la monitorización de estos contaminantes y sus metabolitos derivados. Se proponen tratamientos de muestra miniaturizados para el control de micotoxinas que permitan la preconcentración de estos contaminantes, debido a las bajas concentraciones esperadas principalmente en las muestras biológicas. Para su identificación y cuantificación se han aplicado estrategias de análisis dirigidas y no dirigidas mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas en tándem (MS/MS) y de alta resolución (HRMS). Por otro lado, se ha empleado la cromatografía de gases acoplada a distintos detectores como MS y espectrometría de movilidad iónica (IMS) con inyección por espacio de cabeza (HS) para la monitorización de compuestos de interés y la caracterización de alimentos aplicando estrategias analíticas dirigidas y no dirigidas. Los compuestos orgánicos volátiles (VOCs) presentes en los alimentos se consideran parámetros relevantes para evaluar su calidad y atributos sensoriales debido a su contribución en el desarrollo del aroma. La obtención del perfil de VOCs mediante estas técnicas analíticas ha permitido el control microbiano del zumo de granada y la caracterización de miel de distintos orígenes botánicos. También se ha empleado la espectroscopía de infrarrojo cercano (NIR) como técnica de análisis rápida y no destructiva para la caracterización de pimentón con Denominación de Origen Protegida (DOP), con el objetivo de garantizar su autenticidad y evitar posibles adulteraciones. Como resultado, las técnicas analíticas generan una gran cantidad de datos complejos que requieren de un procesamiento para obtener información químicamente relevante. La quimiometría se define como el conjunto de metodologías estadísticas y matemáticas que permiten extraer dicha información reduciendo la dimensionalidad de los datos. Estas herramientas se han aplicado al análisis de alimentos y muestras biológicas para el desarrollo de análisis univariantes y multivariantes con fines exploratorios, discriminativos y predictivos, así como la identificación de compuestos desconocidos.
Embargo
Innovaciones en plataformas analíticas empleando estrategias metabolómicas para la determinación de micotoxinas y otros contaminantes en muestras biológicas y alimentos
(Universidad de Murcia, 2024-02-07) García Nicolás, María; Viñas López-Pelegrín, Pilar; Arroyo Manzanares, Natalia; Escuela Internacional de Doctorado
La metabolómica consiste en un análisis exhaustivo y cuantitativo de todos los metabolitos de un sistema, siendo los metabolitos aquellas moléculas que presentan una masa molecular inferior a 1500 Da. Las aplicaciones de la metabolómica al análisis de alimentos se conocen como “foodómica”, una ciencia que permite monitorizar los cambios de la composición de los alimentos en términos de análisis composicional, seguridad alimentaria, clasificación de alimentos y trazabilidad. El desarrollo de métodos eficientes que permitan una evaluación fiable de las sustancias o componentes peligrosos que pueden poner en peligro la seguridad y la calidad de los alimentos ha constituido recientemente un importante reto en el ámbito de la Química Analítica. En este sentido, la foodómica se ha consolidado como una disciplina reconocida para elevar y asegurar los estándares de seguridad alimentaria, destacando sus aplicaciones en el control de micotoxinas en alimentos. Las micotoxinas son compuestos tóxicos resultantes del metabolismo secundario de varios hongos filamentosos, principalmente las especies Fusarium, Aspergillus, Penicillium y Alternaria. Estos compuestos pueden aparecer de forma natural en cereales, frutos secos, especias, cacao, café, frutas y verduras susceptibles de contaminación fúngica, afectando a la salud de los humanos y de los animales. Por tanto, sus niveles en alimentos están estrictamente restringidos por la legislación europea. Sin embargo, existe un grupo de micotoxinas denominadas emergentes, sobre las cuales no hay legislación establecida, siendo de gran importancia aportar estudios de ocurrencia sobre ellas para facilitar su futura legislación. Considerando los bajos niveles de concentración a los que se encuentran estas toxinas y el efecto matriz debido a las muestras, es fundamental desarrollar nuevos métodos analíticos de gran sensibilidad y selectividad. El tratamiento de la muestra es una etapa trascendental en el desarrollo de un método analítico. Por este motivo, la investigación en el campo de la Química Analítica en los últimos tiempos se ha centrado en el desarrollo de técnicas miniaturizadas de preparación de muestras. Estas técnicas tienen como objetivo conjunto lograr la preconcentración de los analitos de interés y simplificar la matriz, lo cual va en consonancia con los principios de la Química Analítica Verde. Las técnicas de microextracción surgen al desarrollar técnicas miniaturizadas que permitan la extracción y preconcentración de los analitos. En ellas, las cantidades utilizadas de fase extractante son del orden de microgramos o microlitros, según tengan lugar en fase sólida o líquida. En esta Tesis Doctoral se han desarrollado tratamientos de muestras miniaturizados para el control de micotoxinas, principalmente micotoxinas emergentes, en muestras poco exploradas hasta la fecha, incluyendo pimentón, paté y muestras para alimentación animal. Otro objetivo significativo dentro del ámbito de la metabolómica y foodómica es la exploración de compuestos bioactivos. Por ello, en esta Tesis Doctoral las estrategias dirigidas y no dirigidas han permitido evaluar la metabolización del propil propano tiosulfonato (PTSO), y el comportamiento de otros compuestos bioactivos presentes en cítricos y aguacate. Finalmente, la foodómica se emplea como herramienta para establecer similitudes y diferencias entre productos alimentarios, proporcionando de esta manera información primordial sobre las propiedades sensoriales y nutricionales de los alimentos, así como para determinar la huella espectral y autenticidad de los mismos. En este sentido, en los últimos Capítulos de esta Tesis, se han aplicado estrategias de foodómica para la monitorización de compuestos orgánicos volátiles que permitan estudiar y establecer la calidad de ciertos alimentos como el aceite de oliva o la miel. Para ello se han acoplado detectores como MS o la espectrometría de movilidad iónica (IMS) a la GC empleando inyección en espacio de cabeza (HS) para minimizar el tratamiento de muestra, permitiendo la caracterización del perfil de compuestos orgánicos volátiles con gran selectividad y sensibilidad.
Open Access
Microextracción dispersiva con nanopartículas magnéticas y en fase líquida acoplada a técnicas cromatográficas
(Universidad de Murcia, 2020-07-29) Oller Ruiz, Ainhoa; Campillo Seva, Natalia; Viñas López-Pelegrín, Pilar; Escuela Internacional de Doctorado
En los últimos años las técnicas miniaturizadas han centrado una parte muy importante de las investigaciones en el área de Química Analítica y, en particular, en la etapa de preparación de la muestra. Los métodos analíticos desarrollados en la presente Tesis Doctoral no son ajenos a esta tendencia, habiéndose desarrollado procedimientos basados en microextracción en fase líquida (LPME) y en fase sólida magnética (MSPE), que han permitido mejorar la sensibilidad de los procedimientos analíticos, ya que los compuestos de interés son aislados de la muestra y preconcentrados en un microvolumen de extractante que puede encontrarse en fase líquida o sólida. Además, de forma simultánea, se produce un efecto de limpieza en la muestra, que redunda en una mejora de la selectividad de los métodos. De entre las diferentes variantes de LPME, la microextracción dispersiva líquido-líquido (DLLME) ha demostrado marcadas ventajas sobre el resto, siendo la técnica LPME seleccionada en esta Tesis. Además de aplicar DLLME en su versión clásica usando disolventes extractantes más densos que el agua, algunas modificaciones han supuesto un paso más hacia la minimización del uso de disolventes orgánicos tóxicos: las fases extractantes más ligeras que el agua y compatibles con la fase móvil empleada en cromatografía líquida (LC) en fase reversa, la generación in situ de líquidos iónicos y la posibilidad de omitir el uso de dispersantes en determinadas muestras. Aunque el análisis de los extractos obtenidos en la etapa de microextracción puede abordarse a través de distintos sistemas instrumentales, los métodos cromatográficos permiten separar compuestos estrechamente relacionados. La combinación de los procedimientos de microextracción con LC y cromatografía de gases (GC) ha permitido en esta Tesis el desarrollo de métodos selectivos, sensibles y precisos, que además, pueden ser englobados en el marco de la Química Analítica Verde, ya que el consumo de disolventes orgánicos tóxicos es nulo o muy bajo, así como el de muestra, generando por tanto cantidades muy pequeñas de residuos. Un inconveniente de la combinación de la microextracción con las técnicas cromatográficas reside en la posible incompatibilidad entre el extracto enriquecido con los analitos y el sistema de separación. La evaporación del disolvente extractante y la reconstitución del residuo seco en una fase compatible con la modalidad de LC seleccionada o el uso de sistemas de desorción térmica para análisis GC de líquidos iónicos conteniendo los analitos, han sido las soluciones aplicadas en esta Tesis Doctoral. La detección de los compuestos separados se ha llevado a cabo usando espectrometría de masas. Para GC, la ionización de los analitos se produce mediante una fuente de impacto electrónico y el analizador es un cuadrupolo simple, mientras que para LC, la fuente de electrospray posibilita el acoplamiento de dos sistemas incompatibles, siendo el analizador empleado un triple cuadrupolo, que permite identificaciones inequívocas siguiendo los patrones de fragmentación. La selección de las condiciones óptimas en microextracción se ha llevado a cabo aplicando métodos estadísticos multivariantes, ya que existen variables directamente interrelacionadas. La aplicación de diseños Taguchi y de tipo central compuesto resultaron muy buenas herramientas para la selección de las condiciones experimentales que proporcionaban la mejor eficiencia de preconcentración. En esta Tesis se presentan seis métodos analíticos que demuestran la aplicabilidad de la combinación de las técnicas de microextracción con las separaciones cromatográficas para la resolución de temas de interés en distintos ámbitos. Así, dentro del campo del análisis de alimentos se ha propuesto la determinación de terpenos en bebidas alcohólicas y uva, diferenciando entre las formas libres y glicosiladas a través de hidrólisis enzimática (Capítulos I y II). Más concretamente en relación a seguridad alimentaria, la determinación de inhibidores de la enzima fosfodiesterasa tipo 5 (PDE-5) se ha abordado en bebidas energéticas y en suplementos dietéticos, pudiendo detectar fraudes por presencia de compuestos no declarados en la composición de los productos comerciales (Capítulo V). La determinación de inhibidores de PDE-5 en pelo humano puede resultar una aportación de interés en el ámbito forense. Procedimientos analíticos para control ambiental han sido propuestos en los Capítulos III, IV y VI para la determinación de clorobencenos, toxinas marinas lipofílicas y herbicidas tipo ácido clorofenoxi en suelos y aguas de distinta procedencia. Todos los métodos desarrollados han sido validados, de acuerdo con las guías internacionales, a través de las características analíticas más relevantes (intervalos de linealidad, exactitud, precisión y sensibilidad) y aplicados al análisis de muestras reales de muy diferente naturaleza.
Open Access
Nuevas metodologías de análisis basadas en E-Nose para detectar el deterioro microbiológico en emulsiones de alimentos conservados naturalmente
(Universidad de Murcia, 2022-01-12) Hernández Cánovas, Juan de Dios; Marín Iniesta, Fulgencio; Guillén López, Isidro; Escuela Internacional de Doctorado
Los objetivos de esta tesis doctoral son: A.- Estudiar la capacidad antimicrobiana de nuevos ingredientes naturales de origen vegetal, ricos en polifenoles y obtenidos sin procesos intensivos de concentración de componentes particulares (Natural Food Compound NFC), frente a levaduras alterantes y/o potencialmente patógenas en salsas y otras emulsiones alimentarias. B.- Aplicar una nueva tecnología de nariz electrónica (E-Nose) para lograr la detección temprana de levaduras alterantes y/o potencialmente patógenas en salsas. Para ello se investiga el modelado por nariz electrónica del crecimiento microbiano en diferentes emulsiones alimentarias para obtener una novedosa tecnología de determinación temprana de alteraciones microbiológicas que permita mejorar la seguridad alimentaria y también la rápida evaluación de nuevas formulaciones naturales, basadas en polifenoles vegetales, para prolongar la vida útil de las salsas y emulsiones alimentarias en general. La metodología empleada en esta tesis doctoral ha sido el análisis del espacio de cabeza de las muestras por cromatografía de gases con detector de masas (HS-GC-MS) junto con tratamiento estadístico de los datos por análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales ortogonales (OPLS-DA) en comparación con los datos obtenidos en microbiología clásica. Las conclusiones obtenidas son: A) La mezcla antimicrobiana estudiada (NFC), que contiene flavonoides obtenidos de extractos de Citrus y eneldo, cuyos componentes principales fueron naringenina, hesperetina, tangeritina, luteolina, apigenina y kaempferol en concentraciones entre 0.7 y 3.2%, presentó propiedades antifúngicas relevantes para C. metapsilosis en salsa ranchera. B) Los conservantes naturales (NFC) permiten reemplazar los conservantes químicos tradicionales como el sorbato y el benzoato para el control de levaduras con las ventajas de poder ser utilizados en emulsiones alimentarias de etiqueta limpia, sin alterar significativamente las propiedades fisicoquímicas y sensoriales de los productos C) Se ha demostrado que el análisis HS-GC-MS junto al tratamiento estadístico de los datos por OPLS-DA es una alternativa viable a los métodos clásicos de recuento microbiano para la identificación y cuantificación de levaduras en emulsiones alimentarias, lo que reduce el tiempo y los costes significativamente.
Open Access
Nuevos retos de la microextracción en fase líquida acoplada a cromatografía líquida para determinación de compuestos orgánicos
(Universidad de Murcia, 2020-09-10) Marín García, Javier; Campillo Seva, Natalia; Viñas López-Pelegrín, Pilar; Escuela Internacional de Doctorado
En el desarrollo de un método analítico, una de las etapas más complejas es la preparación de la muestra. Por ello, una parte importante de la investigación en Química Analítica se focaliza en el desarrollo de nuevos procedimientos para simplificar el tratamiento de la muestra. La miniaturización y automatización son tendencias clave en la mejora de diferentes aspectos prácticos para la determinación de los compuestos de interés en la muestra utilizando métodos instrumentales. Las técnicas de microextracción se dividen en dos grandes grupos, las que aíslan los analitos en una fase sólida, microextracción en fase sólida (SPME), y las que los extraen en una fase líquida, microextracción en fase líquida (LPME). Las investigaciones en esta Tesis Doctoral se han centrado en el desarrollo de procedimientos basados en LPME, concretamente microextracción dispersiva líquido-líquido (DLLME), microextracción líquido-líquido (LLME) y extracción en punto de nube (CPE). Las técnicas cromatográficas resultan muy adecuadas para el análisis de los extractos obtenidos a través de las técnicas miniaturizadas de tratamiento de muestra, ya que permiten la separación de compuestos de estructuras moleculares muy similares, que no podrían ser diferenciados de otra forma. En esta Tesis Doctoral, todos los métodos analíticos desarrollados implican separaciones mediante cromatografía líquida (LC), por resultar la mejor opción para los compuestos orgánicos estudiados. Por otra parte, las técnicas seleccionadas para la monitorización de los compuestos separados por LC han sido la detección fluorimétrica (FLD) y espectrometría de masas (MS), teniendo en cuenta las elevadas sensibilidad y selectividad proporcionadas por estos sistemas de detección. En esta Tesis se ha empleado MS en tándem (MS/MS), mediante el uso de un triple cuadrupolo (QqQ) como analizador de masas, que ha permitido la identificación de los analitos sin posibilidad de duda, gracias a los patrones de fragmentación característicos bajo las condiciones seleccionadas. La presente Tesis Doctoral se centra en el análisis de muestras de muy diferente naturaleza implicando problemas que en una u otra medida preocupan a la sociedad. Así, las muestras objeto de análisis han sido alimentos vegetales, aguas y suelos de distinta procedencia, así como orina humana. Los compuestos determinados han sido tres formas de la vitamina K (filoquinona, menaquinona y menadiona), herbicidas (glifosato, glufosinato y ácido aminometilfosfónico (AMPA)), inhibidores de la enzima fosfodiesterasa-5 (sildenafil, tadalafil, vardenafil y N-desmetilsildenafil) y biomarcadores (glioxal y metilglioxal). La presentación del trabajo desarrollado se ha estructurado en cinco capítulos: Capítulo I. Determinación de los biomarcadores glioxal y metilglioxal, previamente derivatizados por reacción con 2,3-diaminonaftaleno para formar las correspondientes α-quinoxalinas, que son preconcentradas en 1-undecanol mediante DLLME asistida por el surfactante Tritón X-114. El análisis de los extractos obtenidos a partir de orina se lleva a cabo mediante LC-FLD. Capítulo II. Determinación de cuatro inhibidores de la fosfodiesterasa-5 en aguas y orina humana. Los analitos son preconcentrados mediante DLLME y el extracto enriquecido se analiza mediante LC-ESI-QqQ-MS/MS. Capítulo III. Aplicación de CPE asistida por microondas, usando Tritón X-114, para la preconcentración de tres formas de la vitamina K, previamente extraídos de las muestras vegetales mediante extracción asistida por ultrasonidos. Se empleó la combinación LC-ESI-QqQ-MS/MS para la medida instrumental. Capítulo IV. Determinación de glifosato y su metabolito AMPA en aguas y vegetales mediante LC-FLD. Los herbicidas fueron derivatizados con cloroformiato de 9-fluorenilmetilo y preconcentrados en metil isobutil cetona en forma de pares iónicos mediante LLME. Capítulo V. Determinación de glifosato, glufosinato y AMPA en aguas, vegetales y suelos, empleando la metodología de derivatización y preconcentración desarrollada en el capítulo IV y llevando a cabo el análisis mediante LC-ESI-QqQ-MS/MS. Los cinco métodos de análisis presentados en esta Memoria han sido validados siguiendo las Guías Internacionales de validación de métodos analíticos.
Open Access
Obtención y cromatografía gas-líquido de aldosulosas (Osónos)
(Murcia : Universidad de Murcia, Sevicio de Publicaciones, 1978) Soler Andrés, Antonio; Cartagena Travesedo, Inmaculada; García Ruiz, Pedro; Departamentos y Servicios::Departamentos de la UMU::Química Orgánica
The aldosuloses of D-xilose, D-glucose, D-galactose, L-sorbose, D-lactose and D-maltose are obtained. Melting point, elemental analysis, I.R. and U.V. espectra, and retention distances by gas-liquid chromatography, in two colums, have been calculated.
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Validación de métodos analíticos por cromatografía líquida alta resolución (HPLC) para la cuantificación de cefuroxima, delafloxacino y tilvalosina en muestras biológicas
(Universidad de Murcia, 2022-07-28) Hernandis Belenguer, Verónica; Escudero Pastor, Elisa; Marín Carrillo, Pedro; Escuela Internacional de Doctorado
El uso de antibióticos tanto en medicina humana como en medicina veterinaria se está restringiendo en la actualidad debido a la elevada resistencia que ofrecen los microorganismos. Los estudios farmacocinéticos constituyen una herramienta muy valiosa a la hora de evaluar la concentración de fármaco en el organismo y establecer posologías adecuadas que aseguren el éxito clínico y minimicen el riesgo de aparición de resistencias bacterianas. Para poder realizar dichos estudios en muestras biológicas, tanto de humanos como de animales, es necesario previamente desarrollar y validar un método analítico para cuantificar las concentraciones del fármaco en la muestra de forma adecuada. En general, los métodos analíticos más usados en los estudios farmacocinéticos para la cuantificación del fármaco son los métodos cromatográficos. En este caso, el objetivo general de la presente tesis doctoral fue la validación de tres métodos analíticos para la cuantificación de tres antibióticos (cefuroxima, delafloxacino, tilvalosina) que permita la obtención de la concentración exacta del fármaco en diferentes matrices biológicas y de este modo utilizarlos para realizar los estudios farmacocinéticos pertinentes. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de la cefuroxima se realizó en plasma humano mediante HPLC/UV. La extracción se realizó mediante precipitación de proteínas con metanol/TFA (ácido trifluoroacético). Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron satisfactorios obteniendo una elevada recuperación (93.52 %,), alta selectividad y especificidad, con un valor en el error de la exactitud por debajo del 10 %. De igual forma, para el cálculo de la precisión se obtuvo un valor ˂ 10 % en el coeficiente de variación. Los límites de detección y cuantificación se establecieron en 0.1 y 0.25 µg/mL, respectivamente. Por lo que el método analítico propuesto es adecuado para ser aplicado en estudios clínicos, análisis de rutina y estudios farmacocinéticos. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de delafloxacino se realizó en plasma humano mediante HPLC/FL. El proceso de extracción consistió en una extracción líquido-líquido con ácido fórmico al 50% y acetato de etilo. También se evaluó la estabilidad de dicho antibiótico en diferentes matrices y a diferentes temperaturas. Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron satisfactorios obteniendo una elevada recuperación (98.3 %), alta selectividad y especificidad, un límite de detección de 0.05 µg/mL y un límite de cuantificación de 0.1 µg/mL. Los valores obtenidos en la precisión, expresados como coeficiente de variación, fueron ˂ 11%. De igual forma, los valores obtenidos para el error en la exactitud fueron ˂ 11%. Los resultados obtenidos en los estudios de estabilidad mostraron inestabilidad tanto en las muestras de plasma como en las disoluciones madre a partir de los quince días de almacenamiento a -40ºC. De ahí que se propongan nuevos estudios con el fin de asegurar la estabilidad del delafloxacino en diferentes condiciones de almacenamiento. El desarrollo, optimización y validación de un método analítico para la cuantificación de la tilvalosina se realizó en plasma de cerdo mediante HPLC/UV. La extracción se realizó mediante precipitación de proteínas con una solución al 0.1 % de ácido fórmico en acetonitrilo. También se evaluó la estabilidad de dicho antibiótico en diferentes matrices y a diferentes temperaturas. Los resultados obtenidos en los parámetros de validación fueron excelentes, obteniendo un rango en el valor de recuperación entre 89.66-96.92 %. Los límites de detección y cuantificación fueron de 0.05 μg/mL y 0.1 μg/mL, respectivamente. Con lo que respecta a los valores obtenidos para la precisión y el error en la exactitud, éstos fueron ˂ 13.0 % en ambos parámetros. Hay que destacar la buena selectividad y especificidad del método analítico. Finalmente, los resultados obtenidos en los estudios de estabilidad a -40ºC fueron también satisfactorios demostrando la estabilidad a corto y largo plazo. Por lo que se puede concluir que este método puede ser aplicado en estudios clínicos, monitorización de niveles eficaces y estudios farmacocinético.

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