Publication: Caracterización cinética y molecular de nicotin desaminasas y aldolasas mediante enzimas acopladas = Kinetic and molecular characterization of nicotin deamidases and aldolases using couple enzymes.
Authors
Sánchez Carrón, Guiomar
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Facultad de Biología
item.page.director
Sánchez Ferrer, Álvaro ; García Carmona, Francisco
Publisher
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DOI
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info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Description
Abstract
El objetivo de esta tesis fue la búsqueda de nuevas aldolasas y nicotin desaminasas
bacterianas con características mejoradas para la producción de compuestos con interés
farmacéutico y biotecnológico. En primer lugar, se clonó y caracterizó una ácido Nacetilneuramínico
aldolasa de Lactobacillus plantarum, que se utilizó como molde para
la creación de librerías de evolución dirigida. Se desarrollo un método de ensayo de alto
rendimiento para esta librería de evolución dirigida, utilizando una L-lactato
deshidrogenasa de Bacillus halodurans como enzima acoplada. 2 nuevas enzimas
involucradas en el metabolismo del NAD se clonaron y caracterizaron: una
nicotinaminidasa y una nicotinamida mononucleótido (NMN) desaminasa, ambas
obtenidas del extremófilo Oceanobacillus iheyensis HTE831. Se desarrollo también un
método de cribado de alto rendimiento para nicotinaminidasas, basado en el uso de una
glutamato deshidrogenasa clonada de Bacillus halodurans. Además, se describió por
primera vez un método de medida espectrofotométrico para la NMN desaminasa.
Resumen en Inglés:
The main objective was the search for new bacterial aldolases and nicotin deamidases
with improved characteristics for the production of compounds with pharmaceutical and
biotechnological interest. In first instance, the cloning and characterization of the novel
N-acetylneuraminic acid aldolase from Lactobacillus plantarum was achieved and it
was used as template for directed evolution experiments. A high-throughput screening
method for this directed evolution library was developed using a novel L-lactate
dehydrogenase from Bacillus halodurans as coupling enzyme. Two novel enzymes
involved in the NAD+ metabolism were also cloned and characterized: a nicotinamidase
and a nicotin mononucleotide (NMN) deamidase, both from the extremophile
Oceanobacillus iheyensis HTE831. A high-throughput screening method for
nicotinamidases was also developed, based on the use of a cloned glutamate
dehygrogenase from Bacillus halodurans. Furthermore, a novel spectrophotometric
screening method was described for the first time for the enzyme nicotinamide
mononucleotide deamidase.
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