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    Diseño de un protocolo para el aislamiento de células cebadas del exudado peritoneal de Sparus aurata para la identificación de receptores de estrógenos
    (2020-04-13) Gómez-González, Nuria Esther; García-García, Érick; García Ayala, Alfonsa; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Facultades, Departamentos, Servicios y Escuelas::Departamentos de la UMU::Biología Celular e Histología
    RESUMEN. La contaminación de las aguas por disruptores endocrinos, y en concreto de estrógenos sintéticos, crece diariamente pudiendo cambios en el sistema inmunitario en los animales que en ellas habitan al presentar en las células que lo componen receptores de estrógenos. La inflamación es la primera respuesta de los animales frente a una infección o daño en el tejido. La histamina tiene un papel muy importante en la regulación de la inflamación en vertebrados capaces de almacenarla en células especializadas inmunitarias llamadas células cebadas. Sparus aurata presenta histamina en las células cebadas de tejidos mucosos. El exudado peritoneal de S. aurata está enriquecido en células cebadas. Hemos identificado que el exudado peritoneal de dorada está compuesto por linfocitos, granulocitos acidófilos, macrófagos y células cebadas. Hemos diseñado un protocolo de separación de las células cebadas de exudado peritoneal de S. aurata consiguiendo purezas superiores al 95% cuando se mide por citometría. Estos datos fueron confirmados mediante microscopía electrónica. Este protocolo de separación servirá como un paso hacia adelante para realizar estudios in vivo e in vitro orientándonos en la evolución de los mecanismos inflamatorio de vertebrados. También hemos demostrado por citometría de flujo y western-blot utilizando los anticuerpos adecuados que las células cebadas de esta especie presentan el receptor de estrógenos acoplado a la proteína G (GPER). Además, con la idea de poder estudiar en investigaciones futuras el efecto que altas concentraciones de estrógenos causan en el sistema inmune de S. aurata intentamos estudiar la capacidad de liberación de histamina en células cebadas tras su estimulación con diferentes PAMPs (patrones moleculares asociados a patógenos) lipopolisacáridos (LPS), Poly I:C (análogo sintético de la doble cadena de ARN (dsRNA)) y AND genómico de Vibrio angillarum (VaDNA), aunque ninguno era capaz de inducir la liberación de histamina en estas células.