Browsing by Subject "Reproducción de animales"

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    Advances in swine embryo production and transfer
    (Universidad de Murcia, 2021-09-08) Cambra Bort, Josep Miquel; Gil Corbalán, María Antonia; Cuello Medina, Cristina; Escuela Internacional de Doctorado
    OBJETIVOS: El objetivo de la Tesis consiste en la mejora de dos biotecnologías de la reproducción porcina, la producción in vitro de embriones (PIV) y la transferencia embrionaria (TE). La mejora de la PIV se ha centrado en la modificación de los protocolos actuales, tratando de reducir el problema de la polispermia durante la fecundación in vitro modificando los protocolos de criopreservación espermática, en mejorar las condiciones de cultivo mediante el uso de antioxidantes como la coenzima Q-10 o la N-(2-mercaptopropionil)-glicina (NMPG) y finalmente en el desarrollo de un medio de cultivo químicamente definido para la producción de embriones porcinos. Respecto a la TE, las investigaciones se han centrado en el papel de la hembra receptora, estudiando por un lado el ambiente inmunitario a nivel uterino mediante la evaluación de diferentes citoquinas en diferentes periodos de la gestación. Por otro lado, también se han evaluado los efectos de las infusiones de plasma seminal previas a la inseminación y su impacto sobre la gestación, valorando su posible uso en los programas de TE. METODOLOGÍA: Para abordar los objetivos planteados se han llevado a cabo diferentes procedimientos experimentales. Entre las técnicas utilizadas se incluye el proceso completo de PIV, dividido en sus tres etapas esenciales de maduración in vitro de los ovocitos, fecundación in vitro de los mismos y su posterior cultivo in vitro hasta alcanzar el estadio preimplantacional adecuado; así como la técnica para la obtención de embriones a partir de cerdas donantes mediante procedimientos quirúrgicos. Mediante estas dos técnicas se han obtenido tanto embriones producidos in vitro como embriones derivados in vivo, cuya calidad ha sido analizada posteriormente mediante diferentes técnicas analíticas, como la tinción diferencial de blastocistos, la medición de los niveles de radicales libres y glutatión o mediante análisis del transcriptoma con técnicas como la q-PCR o los microarrays. Este tipo de técnicas también han sido empleadas para analizar el endometrio de cerdas donantes y receptoras, obteniendo las muestras mediante histerectomías. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Los resultados de los diferentes experimentos llevados a cabo han sido recogidos y publicados en un total de nueve artículos. Las conclusiones alcanzadas son las siguientes: -Una alta dilución de los espermatozoides antes de la congelación aumenta la monospermia sin afectar a las tasas de penetración, aumentando así la eficiencia de la PIV porcina. -La suplementación exógena de la Coenzima Q10 en los medios de maduración y cultivo in vitro no mejorara los resultados de la producción de embriones in vitro, sin embargo, la suplementación del medio cultivo in vitro con el antioxidante NMPG si aumenta la producción de blastocistos. -El medio químicamente definido basado en la suplementación con el factor plaquetario 4 puede sustituir eficazmente al tradicional medio de cultivo indefinido suplementado con albúmina sérica bovina con una producción de blastocistos y un perfil transcriptómico similar entre ambos. -Los niveles de citoquinas expresados en el endometrio de las cerdas portadoras de embriones muestran un entorno inmune uterino desviado hacia un perfil antiinflamatorio en comparación con las cerdas receptoras 6 días después del inicio del celo. -Los bajos niveles endometriales del factor inhibidor de la leucemia durante el periodo de implantación en las gestaciones alogénicas pueden conducir a un entorno desfavorable para la supervivencia embrionaria. -Las infusiones de plasma seminal modifican el transcriptoma a nivel endometrial y embrionario y promueven el desarrollo y la calidad de los embriones mediante la expresión de genes relacionados con el desarrollo embrionario, la implantación y/o la inmunidad materna, entre otros; lo que hace de estas infusiones una herramienta prometedora para su uso en la industria porcina tanto en programas de inseminación artificial como de TE.
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    Determinación de la Presencia de Actinobacillus Pleuropneumoniae y su Relación con las Medidas de Bioseguridad en el Control de Signos Clínicos de la Enfermedad en Explotaciones Porcinas Brasileñas
    (Universidad de Murcia, 2020-01-09) Torres Simoes Lisboa, María Nazaré; Muñoz Luna, Antonio; Ramis Vidal, Manuel Guillermo; Escuela Internacional de Doctorado
    Se han seleccionado 20 granjas en las principales zonas productoras de porcino de Brasil. El criterio fue que tuvieran una serología positiva frente a ApxIV. Se determinó la presencia de síntomas compatibles con pleuroneumonía, se tomaron muestras para aislar el patógeno y se serotipo mediante PCR. Además, se hizo una auditoría de bioseguridad, basada en un sistema semáforo evaluando la bioseguridad externa, interna y de contención. Se tomaron los parámetros reproductivos y productivos en transición y cebo y además se seleccionó una granja modelo para hacer un seguimiento de los serotipos presentes y de las lesiones al sacrificio compatibles con pleuroneumonía. Se encontraron síntomas en un 40% de las granjas incluidas en el estudio. Las granjas sin síntomas tuvieron mejores rendimientos reproductivos y productivos en transición y cebo, lo que propició una reducción del coste de producción de entre 3-11 euros/cerdo sacrificado en las granjas asintomáticas. Se encontró la bacteria en un 78% de las muestras cuando se tiparon por serogrupo. Cuando se tiparon individualmente, el serotipo predominante fue el 7 (51%), seguido del 15 (22%) y el 4 y 5 (11%). Las cepas aisladas mostraron resistencias frete a penicilina, tetraciclina, oxitetraciclina y amoxicilina, principalmente, llegando a haber hasta 4 resistencias simultáneamente. En la granja G se encontraron el serotipo 7, 4 y 12 en el periodo 2017-2019, y hubo alguna diferencia en el número de resistencias en las cepas; en el año 2019 todas tenían al menos tres resistencias. Se encontraron lesiones de pleuritis compatibles con actinobacilosis en el 0,09-6,24%, con una estacionalidad evidente, siendo más prevalente en marzo y el periodo noviembreenero. Al evaluar la bioseguridad se encontraron diferencias significativas en la puntuación obtenida por las granjas con y sin síntomas. El perfil obtenido para las granjas sintomáticas fue: una granja que introduce cerdas de reposición de más de un origen, donde los lechones enfermos recuperados vuelven al flujo, no se usa ni guantes ni botas ni ropa específica que no salga de la granja, no se hace todo dentro todo fuera por local, la limpieza es deficiente, tiene baja reposición y censo envejecido. Como consecuencia de la enfermedad, estas granjas tendrán una alta mortalidad en cebo, un índice de transformación alto y más de 4 dólares de medicación por cerdo; y además contarán con hospital. Con respecto a la bioseguridad interna, la granja tipo con sintomatología es una granja sin vallado perimetral y que por tanto permite el acceso a caminos y conductores a sus instalaciones, que no usa baños para las cerdas al moverlas de un local a otro, que no tiene un tratamiento adecuado de cadáveres y que tiene granjas con otras especies en proximidad
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    Optimization of vitrification protocols for embryos and oocytes in the porcine species
    (Universidad de Murcia, 2024-11-25) González Plaza, Alejandro; Cuello Medina, Cristina; Martínez García, Emilio Arsenio; Escuela Internacional de Doctorado
    Objetivos: el objetivo principal de esta Tesis fue optimizar el protocolo de vitrificación de embriones porcinos mediante la modificación del sistema Cryotop (Cryotopm) para la vitrificación simultánea de un elevado número de embriones y ovocitos, y analizar su impacto en el transcriptoma embrionario. Para este fin, los objetivos específicos contenidos en esta Tesis fueron: 1) evaluar el sistema Cryotopm en su forma abierta y cerrada para la vitrificación de mórulas y blastocistos producidos in vivo, y su calidad tras el calentamiento; 2) investigar los efectos de la vitrificación simultánea de un elevado número de blastocistos sobre la expresión génica y el transcriptoma de microARNs (miARNs); 3) evaluar la viabilidad de blastocistos producidos in vitro tras la vitrificación con el sistema Cryotopm; 4) estudiar el impacto del tiempo de equilibrado con crioprotectores y la suplementación con melatonina en el medio de maduración in vitro en la viabilidad y calidad de los ovocitos vitrificados y calentados con el sistema Cryotopm. Metodología: En la metodología general incluida en esta Tesis se describen los procesos de obtención de embriones in vivo y de producción de embriones in vitro, la vitrificación y el calentamiento (V-C) de embriones y ovocitos y la evaluación de la viabilidad tras la V-C. La metodología específica del Artículo 1 describe técnicas de evaluación de la calidad de los embriones V-C. En la metodología de los Artículos 2 y 3 se describen los procesos de extracción de ARN de los blastocistos y preparación de las muestras para los estudios de expresión génica y de transcriptoma de miARNs, respectivamente. La metodología del Artículo 4 incluye la evaluación de la calidad de los embriones producidos in vitro tras la V-C. Por último, la metodología específica del Artículo 5 describe las técnicas empleadas para la evaluación de la viabilidad y la calidad de los ovocitos tras la V-C. En cada artículo se incluyen además los análisis estadísticos realizados, así como un breve diseño experimental. Conclusiones: Las principales conclusiones de esta Tesis Doctoral son: 1) El sistema Cryotopm abierto (CA) permite la vitrificación de 20 embriones porcinos obtenidos in vivo en los estadios de mórula, blastocisto temprano y blastocisto, proporcionando unos parámetros de viabilidad y calidad post-calentamiento similares a la de los embriones frescos; 2) La vitrificación con los sistemas CA y SOPS tiene un efecto moderado sobre la expresión génica de los blastocistos porcinos. En embriones vitrificados con el sistema CA, se modifica la expresión de más genes relacionados con la proliferación celular y se alteran menos genes relacionados con la apoptosis;3) La vitrificación con los sistemas CA y SOPS modifica la expresión de miARNs en los blastocistos porcinos, habiendo mínimas diferencias entre ambos sistemas, alterando la expresión de miARNs relacionados con la proliferación celular, la apoptosis y la respuesta celular al estrés; 4) La vitrificación simultánea de 20 blastocistos porcinos producidos in vitro con el sistema CA proporciona mejores resultados de viabilidad y parámetros de apoptosis que la vitrificación empleando el sistema SOPS; 5) La viabilidad de los ovocitos maduros de cerdo vitrificados con el sistema CA aumenta con el incremento del tiempo de equilibrado con los crioprotectores, alcanzando su máximo a los 60 minutos y presentando estos ovocitos una morfología de la placa metafásica similar a la de los ovocitos sin vitrificar; 6) La suplementación con 10-9 M de melatonina en el medio de maduración no tiene efecto en la viabilidad ni la morfología de la placa metafásica de los ovocitos maduros de cerdo vitrificados con el sistema CA.