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    Biopsia selectiva del ganglio centinela (BSGC) en melanoma. Comparación de dos métodos de procedimiento histológico
    (2014-03-18) Martínez Menchón, Teresa; Torre Minguela, Carlos de; Martínez Escribano, Jorge; Sánchez-Pedreño Guillén, Paloma; Departamento de Dermatología, Estomatología, Radiología y Medicina Física
    El melanoma es un tumor de estirpe melanocítica con un elevado potencial metastático y una incidencia en aumento. La técnica de la Biopsia Selectiva del Ganglio Centinela (BSGC) se acepta como la forma más específica, sensible y con menor morbilidad para realizar la estadificación patológica ganglionar. Objetivos:1) Analizar la capacidad de detección de un protocolo extenso, frente a un método simple de procesamiento del ganglio centinela comparando dos cohortes de pacientes; 2) buscar relación entre el resultado de la técnica de BSGC y otras variables con valor pronóstico establecido, tanto clínicas como histológicas; 3) realizar un estudio de supervivencia y de falsos negativos; 4) estudiar subgrupos de pacientes (melanomas ≥1 mm de Breslow, <1 mm de Breslow y melanomas en extremidades);y 5) comparar ambas técnicas desde el punto de vista económico. Metodología: Realizamos un estudio de cohortes con un diseño observacional analítico longitudinal. Se seleccionaron a los pacientes sometidos a la técnica desde el año 1998 hasta el 2010. La muestra a su vez se subdividió en dos series: la serie correspondiente a los años 1998-2004 y, la serie 2007-2010. En la primera de ellas se realizó un procesamiento simple (sección única de hematoxilina-eosina) mientras que en la segunda se realizó un estudio extenso (protocolo transhiliar bivalvo con secciones seriadas cada 250 µm y múltiples tinciones inmunohistoquímicas (HMB 45, Melan A y S100)). Conclusiones: El protocolo histopatológico extenso de análisis ganglionar ha demostrado mejorar la capacidad de detección de la técnica en nuestro medio. No hay diferencias en la tasa de falsos negativos, pero eliminando el factor de confusión correspondiente a los drenajes múltiples, la tasa disminuye a la mitad. El procesamiento por niveles al menos duplica el coste económico de la serie anterior. El porcentaje de pacientes sometidos a la técnica con melanomas delgados (índice de Breslow menor a 1 mm) es cada vez mayor (40%), aunque el rango de positividad es bajo (2%). La aparición de nuevas opciones de tratamiento en el melanoma metastásico obliga a optimizar la técnica con objeto de identificar el subgrupo de pacientes que podrían beneficiarse de estas nuevas terapias. Palabras clave: Melanoma, ganglio centinela. Melanoma is a melanocytic lineage tumor with high metastatic potential and increasing incidence. Sentinel lymph node biopsy (SLNB) is accepted as the most specific, sensitive and with less morbidity technique for pathologic nodal staging. Objectives: 1) To analyze the detection capability of an extensive protocol, versus a simple method of lymph node processing, comparing two cohorts of patients; 2) To seek a relationship between the outcome of the SLNB technique and other variables with established prognostic value, both clinical and histological; 3) To conduct a survival and false negatives study; 4) To study subgroups of patients (melanomas with Breslow thickness of 1 mm or more, <1 mm Breslow melanomas and extremity melanomas) and 5) To compare both lymph node processing methods from the economic point of view. Methods: Cohort study with a longitudinal observational analytic design was conducted. Patients undergoing SLNB in our institution from 1998 to 2010 were selected. The sample was divided into two cohorts, patients treated from 1998 to 2004 and those from 2007 to 2010. In the first subgroup, a simple method of processing was performed (single hematoxylin-eosin slide), while in the second, an extensive protocol (transhiliar bivalving 250µm serial sectioning with multiple immunohistochemical stains (HMB 45, Melan A and S100)) was carried out. Conclusions: Extensive histopathologic protocol for assessing sentinel node has shown an improved detection capability of the technique in our institution. No differences in false negatives rate were detected, but removing multiple drains confusion factor, this rate decreases by half. Extensive histopathologic protocol at least double the economic cost of the previous method. Percentage of patients undergoing SLNB technique with thin melanomas (less than 1 mm of Breslow thickness) is growing (40%), although positivity range is low (2%). New emerging treatment options in metastatic melanoma force to optimize the technique in order to identify the subgroup of patients who might benefit from these new therapies. Keywords: Melanoma, sentinel node.
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    Efectos "in vitro" de tres extractos del capullo del gusano de la seda frente a la radiación ultravioleta B
    (2015-07-15) Vicente-Ortega Sánchez, Raquel; Sánchez-Pedreño Guillén, Paloma; Gómez García, Francisco José; Vicente Ortega, Vicente; Departamento de Oftalmología, Optometría, Otorrinolaringología y Anatomía Patológica
    Durante las últimas décadas la exposición solar ha sufrido un aumento considerable, sobre todo la recreativa o intermitente, por lo que el fotoenvejecimiento afecta también a jóvenes que se exponen al sol sin protección o a fuentes ultravioleta artificiales para el bronceado rápido (Camacho, 2001), de ahí, la inversión millonaria que se realiza en Occidente en investigación de sustancias que eviten o retrasen los efectos del fotoenvejecimiento, tanto por estética como por el coste económico del tratamiento de las lesiones. En los últimos años, los aceites esenciales han suscitado gran interés debido a su capacidad antioxidante, que podría interferir en los mecanismos del fotoenvejecimiento, evitando la formación de radicales libres y potenciando el subsistema inmunológico cutáneo (Siegel, 2012). En nuestro trabajo hemos ensayado tres extractos procedentes del capullo del gusano de la seda: fibroína, sericina e hidrolizado para conocer sus efectos “in vitro”: a) Citotóxicos (viabilidad y proliferación celular) sobre las líneas celulares: Vero, TRAMP-C1 y HaCaT. b) Genotóxico y genoprotector sobre sangre total humana. c) Sobre la migración celular y protección frente a la radiación ultravioleta B en la línea celular HaCaT. En los ensayos de CITOTOXICIDAD sobre las células Vero, ni la fibroína ni el hidrolizado de seda fueron citotóxicos, mientras que la sericina provocó una disminución de la viabilidad celular dosis-respuesta significativa, moderadamente citotóxica. Las células TRAMP-C1 mostraron valores de viabilidad celular a las 24 y 48 horas muy próximos a los controles (casi del 100%) por lo qué ninguno de los extractos: fibroína, sericina e hidrolizado de seda presentaron acción anticancerosa sobre la línea celular TRAMP-C1 a las concentraciones estudiadas.El objetivo del ensayo de citotoxicidad para las células HaCaT fue ajustar las dosis de los extractos para poder utilizar la máxima concentración que admitiera el cultivo sin que afectara a su viabilidad y poder llegar hasta ese punto con el ensayo de fotoprotección y migración. La fibroína no fue citotóxica hasta 0,1%, a partir del cual mostró cierto efecto citotóxico estadísticamente significativo dependiente de la dosis. La sericina resultó más citotóxica como también constatamos sobre la línea Vero. Este efecto comenzó a hacerse evidente con las concentraciones más bajas (0,05 y 0,1), alcanzando la IC 50 de forma temprana en 0,22% a las 24 horas y 0,16% a las 48 horas. El efecto negativo dosis-respuesta sobre el cultivo fue estadísticamente significativo a partir del 0,05%. El hidrolizado de seda mostró mejor comportamiento respecto a la viabilidad de estas células, con valores próximos e incluso superiores al 100% (control) en todas las concentraciones estudiadas a 24 y 48 horas. Por lo que el hidrolizado de seda no afecta a la viabilidad celular de esta línea. En el ensayo de GENOTOXICIDAD, no existían diferencias estadísticamente significativas en el número de micronúcleos por 500 CB en las muestras tratadas con los tres extractos respecto a las controles. En el ensayo de GENOPROTECCIÓN, observamos disminución de MN/500 CB cuando se administraban los tratamientos (fibroína, sericina e hidrolizado de seda) previamente a la irradiación aunque ninguno mostró disminución estadísticamente significativa respecto al control irradiado. Por lo que parece existir tendencia a la protección frente al daño producido por la radiación X. En cuanto a la MIGRACIÓN CELULAR, el hidrolizado de seda no mostró diferencias estadísticamente significativas a las concentraciones estudiadas (0’01 y 0’1 %) en relación a la migración de las células HaCaT. El estudio de FOTOPROTECCIÓN presentó resultados significativos (p < 0’001) para el hidrolizado y la fibroína, resaltando el importante incremento de la viabilidad celular a las 24 y 48 horas causado por el hidrolizado de seda a las concentraciones 0,001; 0,01; 0,05 y 0,1, y la mínima intensidad de radiación ultravioleta (0,08 J/cm2), lo que consideramos de gran relevancia clínica por la facilidad de incorporación de una dosis tan baja de hidrolizado de seda a un producto fotoprotector. I. SUMMARY In the last decades the sun exposition, specially recreative or intermitent, has led to a tremendous increase in skin cancer. Photo-aging also affects young people who have exposed to the sun or artificial UV sources without protection (Camacho, 2001). For that reason, the Occidental Countries have made a millonair inversion in research studies on substancies to avoid or delay the photo-aging effects. During the last years, the esential oils have aroused great interest because of their antioxidant capacity, which could affect on photodamage mecanism, avoiding the free radycals formation and enhancing the cutaneous inmune subsystem (Siegel, 2012). II. OBJETIVES General Objective The main objective of this thesis was to compare three extracts from silkworm: fibroin, sericin and silk hidrolyzate in order to know their “in vitro” effects: a) Cytotoxic (viability and celular proliferation) on celular lines: Vero, TRAMP-C1 and HaCaT. b) Genotoxic and genoprotective on total human blood. c) Celular migration and protecction against ultravioleta B radiaton on celular line HaCaT. Specific Objectives 1º. To evaluate the cocoon of silkworm efectts: fibroin, sericin and silk hidrolyzate upon proliferation and citotoxicity of celular lines: TRAMP-C1 y HaCaT. 2º. To study the genotoxic and genoprotective silkworm extracts over total human blood. 3º. To identify the activity of silkworm extracts upon celular migration in HaCaT line. 4º. To analyze, in HaCaT line, the silkworm extracts protective effects against ultraviolet B radiation. III. RESULTS Neither fibroin or silk hydrolyzate were citotoxic upon Vero celular line trial, while sericine caused a significant disminution celular dose-response, moderately citotoxic. Fibroin was not citotoxic until 0,1%, after that concentration it showed a light dose-dependent citotoxic effect statistically significant. Sericine was more citotoxic over Vero celular line. This effect was more evident with lower concentrations (0.05 y 0.1), with sooner IC 50 on 0.22% at 24h and 0.16% at 48h. The negative dose-response effect over the cultive was estatistically significant from 0,05%. The silk hydrolyzate showed a better response respect these cells viability, with values closer or higher to 100% (control) in all the studied concentrations within 24 and 48 hours. So the silk hydrolyzate does not affect this celular line’s viability. The TRAMP-C1 cells showed celular viability values within 24 and 48 hours closer to control (near 100%) so no one of the extracts: fibroin, sericin and silk hydrolyzate showed anticancer action over TRAMP-C1 celular line in studied concentrations. In the GENOTOXICITY trial, did not exist statistically significant differences in the number of MN/500 CB in the samples treated with the three agents respect to the control. In the GENOPROTECTION trial, a disminution of MN/500 CB was observed when treatments (fibroin, sericin and silk hidrolyzate) were administrated previously to the irradiation although no one showed a statistically significant disminution respect the irradiated control. So there seems to be a protection against X radiation. As regard the CELULAR MIGRATION, the sylk hydrolyzate did not show statistically significant differences in studied concentrations (0.01 y 0.1 %) related with migration of celular line HaCaT. The PHOTOPROTECTION study showed significant results (p < 0.001) for the silk hydrolyzate and fibroin, with an important cellular viability increase within 24 y 48 hours caused by the hydrolyzate 0.001, 0.01, 0.05 and 0.1 concentrations and the ultraviolet minimun intensity radiation (0.08 J/cm2). Silk hydrolyzate should be considered as a photoprotective agent with a high clinic relevance, due to its activity in very low doses.
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    Efectos de la astaxantina en el fotoenvejecimiento cutáneo inducido en ratones SKH1/CRL por radiación UV
    (2014-09-22) Ruiz Sánchez, Virtudes; Martínez Díaz, F.; Departamento de Oftalmología, Optometría, Otorrinolaringología y Anatomía Patológica
    El fotoenvejecimiento es un tema de enorme interés socio-sanitario (Kawada, 2011) al ser un proceso patológico común Su manejo clínico y terapéutico implica un alto presupuesto sanitario (Yaar, 2007; Jemal, 2011; Siegel, 2012). Los países desarrollados invierten sumas millonarias en la investigación de sustancias que eviten o retrasen sus efectos (Gil Ortega,2014). De ahí el interés del desarrollo de modelos experimentales para su estudio, así como el de nuevas medidas de fotoprotección. El primer objetivo de nuestro trabajo correspondió al establecimiento de un modelo de fotoenvejecimiento cutáneo en ratones SKH-1 mediante exposición crónica a RUV; el segundo fue evaluar los posibles efectos protectores de la Astaxantina. Utilizamos 60 ratones SKH1/CRL, expuestos a RUV (98,6% UVA y 1,4% UVB) / 60 minutos / sesión / 3 veces a la semana / 80 sesiones, con un total de 1.688 J/cm2 por animal. Los ratones se dividieron en dos grupos (N= 30): El Control sólo recibió RUV y el segundo, RUV más Astaxantina / oral / 0,05 mg / animal / dia. Dado que en la mayoría de los animales de este grupo no se originaron lesiones neoplásicas al final del experimento (80 sesiones), seguimos aplicando hasta un total de 113 sesiones (2.384,3 J/cm2) a 10 ratones,. Los animales expuestos exclusivamente a RUV Grupo Control presentaron las alteraciones características descritas en el fotoenvejecimiento (100% de carcinomas escamosos), por lo que lo consideramos un modelo experimental idóneo para el estudio de estas patologías. No obstante, encontramos diferencias entre las lesiones de los animales tratados con Astaxantina, respecto a las del Control: el eritema se hacía fijo con aspecto reticulado, 15-16 sesiones mas tarde que en el Control; la presentación del marcado patrón geométrico de la piel (8-10 sesiones); arrugas (15-16 sesiones); engrosamiento cutáneo-lesiones queratósicas (10-12 sesiones) y de las lesiones eritemato-erosivas (5-6 sesiones). Las diferencias más destacables fueron en las lesiones tumorales, ya que solo las presentaron 10 animales del grupo tratado. De los 20 que recibieron 80 sesiones, solo 2 presentaron tumores; y de los 10 que recibieron 113 sesiones, se presentaron solo en 6 a partir de la sesión 100 y en 2 tras la 113. Todas las neoplasias correspondían a carcinomas de células escamosas. Microscópicamente, también encontramos diferencias en las lesiones precancerosas: la displasia en: el 60% de los animales tras la sesión 80 y en el 80% tras la 113; el carcinoma “in situ” en el 25% y el 75% respectivamente, mientras que en los animales del grupo Control se observaban ambos en el 100% de los animales. En el estudio inmunohistoquímico, constatamos un incremento significativo de la tasa de proliferación celular en los tumores del grupo control respecto a los tratados. La expresión de MMP-9 resultó más alta en los tumores de los animales tratados que en los del control. Sin embargo, el inhibidor de metaloproteinasas TIMP-1, se expresó de forma más intensa en el estroma de los tumores de los animales tratados que en los controles, sugiriendo que el tratamiento con astaxantina podría inhibir la progresión tumoral, mediante la inducción de la síntesis de inhibidores de metaloproteinasas en el estroma tumoral. ABSTRACT Photoaging, a common pathological process, is of enormous socio-sanitary interest (Kawada, 2011) and its clinical and therapeutic treatment is expensive (Yaar, 2007; Jemal, 2011; Siegel, 2012). Developed countries invest enormous sums of money in research into substances to prevent or delay the effects of the process (Gil Ortega, 2014) – hence the interest in developing experimental models for its study and new protection methods. The first objective of our study was to establish a model of cutaneous photoaging in SKH-1 mice chronically exposed to UVR, and the second to evaluate the possible protective effects of Astaxanthin. Sixty SKH1/CRL mice were exposed to 80 sessions of UVR (98.6% UVA and 1.4% UVB) for 60 minutos/session, 3 times per week (total of 1,688 J/cm2 per animal). The mice were divided into two groups (N= 30): the control group, which only received UVR, and a second group, which received UVR and Astaxanthin adminsitered orally at 0.05 mg / animal / day. Since most of the animals of the second group showed no neoplastic lesions at the end of the 80 sessions, the treatment was continued in 10 mice to reach 113 sessions (2,384,3 J/cm2). The control group animals showed the alterations characteristic of photoaging (100% squamous carcinomas), so that the experimental model can be considered ideal for studying such pathologies. However, there were differences in the lesions treated with Astaxanthin compared with the control group: erythema became permanent and showed a reticulated pattern 15-16 sessions later than in the control group; a marked geometric pattern of the skin (8-10 sessions later); swelling and/of queratósicas cutáneo-lesiones (10-12 sessions later); wrinkling (15-16 sessions) and eritemato-erosivas lesions (5-6 sessions later). The most pronounced differences concerned the tumoral lesions, which only appeared in 10 animals of the treated group. Of the 20 animals that received 80 sessions, only 2 showed tumours, while, of the 10 animals that received 113 sessions, tumour growth was evident in 6 after 100 sessions and another 2 after 113 sessions. All the neoplasias corresponded to squamous cell carcinomas. Microscopically, there were also differences in the precancerous lesions observed: dysplasia in 60% of animals after 80 sessions and in 80% after 113 sessions. “In situ” carcinomas were observed in 25 and 75%, respectively of the treated animals. In the control group, on the other hand, both were observed in 100% of the animals. An immunohistochemical study pointed to a significantly higher cell proliferation rate in the tumours of the control group, while MMP-9 expression was higher in the tumours of the treated group. Metaloproteinase TIMP-1 inhibitor expression was greater in the stroma of the tumours of the treated animals, suggesting that treatment with astaxanthin may inhibit tumour progression by inducing the synthesis of inhibitors of metaloproteinases in the tumoral stroma.
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    Efectos de los aceites de almendras dulces y de crisálida del gusano de la seda sobre el fotoenvejecimiento cutáneo inducido en ratones SKH1/CRL por radiación UV
    (2014-04-28) Gil Ortega, Ana María; Vicente Ortega, Vicente; Gómez García, Francisco José; Sánchez-Pedreño Guillén, Paloma; Departamento de Oftalmología, Optometría, Otorrinolaringología y Anatomía Patológica
    La piel es el órgano más extenso del organismo y puede sufrir, además del envejecimiento cronológico, el denominado fotoenvejecimiento o envejecimiento cutáneo patológico. Está caracterizado por un envejecimiento cutáneo más extenso y sobre todo, de mayor gravedad, pues engloba la fotocarcinogénesis o presentación de cánceres cutáneos. Desde la Antigüedad, el hombre tuvo conciencia de la importancia del Sol en su vida, pero también de sus efectos indeseables. En la actualidad las sociedades de los países desarrollados invierten sumas millonarias en la investigación de sustancias que eviten o retrasen los efectos del envejecimiento, no sólo por el culto a la belleza, sino por el gran coste económico que tiene la asistencia sanitaria de las lesiones. En los últimos años, los aceites esenciales han recibido gran atención dada su capacidad antioxidante, que podría interferir en los mecanismos de fotoenvejecimiento, evitando la formación de radicales libres y potenciando el subsistema inmunológico cutáneo. Por otro lado, a las dificultades metodológicas que supone la lenta evolución de los tumores, se suman las limitaciones éticas del desarrollo de modelos experimentales en humanos. Por esta razón, el primero de los objetivos de nuestro trabajo fue el establecimiento de un modelo de fotoenvejecimiento cutáneo en ratones SKH-1, mediante la exposición crónica a Radiación Ultravioleta (RUV), para en el segundo objetivo de nuestro estudio, evaluar las propiedades de dos aceites, el de almendras dulces y el de la crisálida del gusano de la seda, como posibles fotoprotectores. Para la realización del estudio, utilizamos 60 ratones SKH1/CRL, que se sometieron a radiación ultravioleta, 60 minutos por sesión, tres veces por semana, durante un total de 80 sesiones, con 1.688 J/cm2 de energía total absorbida por cada animal. Los ratones se dividieron en tres grupos. El primero (Control) sólo recibió RUV y los otros dos fueron tratados tópicamente, previamente a la irradiación, con aceite de almendras dulces (Grupo II) y con aceite de la crisálida del gusano de seda (Grupo III). Todos los animales expuestos a las RUV presentaron las alteraciones características del fotoenvejecimiento y fotocarcinogénesis cutánea, por lo que consideramos este modelo experimental idóneo para el estudio de esta patología, ya que la exposición crónica a las radiaciones provocó todo el espectro de lesiones propias del fotoenvejecimiento, si la exposición era prolongada (entre 65 y 80 sesiones), además de tratarse de un modelo fácilmente reproducible y de bajo coste. No obstante, en nuestro estudio observamos diferencias significativas entre los animales tratados con el aceite de la crisálida del gusano de seda (Grupo III) respecto a los de los otros dos grupos. En los ratones del grupo III se observa un retraso en la presentación de las lesiones cutáneas (6-9 semanas), con respecto a los otros grupos y hubo dos animales sin lesiones tumorales al final del experimento. Además, el área media de las lesiones era menor en el grupo III un 59,14% respecto al grupo control (reducción del 40,86%); el grupo tratado con aceite de almendras dulces, tan sólo redujo el área media en un 10%. Esto sugiere las propiedades fotoprotectoras del aceite de crisálida del gusano de seda, probablemente debidas a la acción de la sericina que contiene, que es un potente antioxidante. Este retraso en la presentación de lesiones neoplásicas y su menor volumen fue confirmado por el estudio inmunohistoquímico, respecto a la metaloproteinasa 9 (MMPs-9) y los inhibidores TIMP. The skin is the largest organ of the body and may, in addition to chronological aging, suffer some disease called photoaging. It is characterized by a large aging of the skin and above all, what is more dangerous, photocarcinogenesis or presentation of skin cancers . Since antiquity, men became aware of the importance of the sun in our life, but also of its undesirable effects. At present, a lot of companies of developed countries invest a large amount of money in researching, looking for substances that prevent or delay the effects of aging, not only for beauty, but also by the great economic cost of health care. In recent years, essential oils have received great attention due to its antioxidant capacity, which may interfere with the mechanisms of photoaging, preventing the formation of free radicals and boosting the skin 's immune subsystem. Furthermore, to the methodological difficulties of the slow evolution of tumors, ethical constraints on development of experimental models in humans are added . Therefore, the first objective of our work was to establish a model of cutaneous photoaging in SKH -1 mice by chronic exposure to Ultraviolet Radiation (UVR). The second objetive of our study was to evaluate the properties of two oils, sweet almond and chrysalis of silkworm, as possible photoprotective . For the study, we used 60 mice SKH1/CRL, that received ultraviolet radiation, 60 minutes per session, three times per week, for a total of 80 sessions , with 1,688 J/cm2 of total energy absorbed by each animal. The mice were divided into three groups. The first (control) received only UVR and the other two were treated topically prior to irradiation, with sweet almond oil (Group II ) and oil of silkworm chrysalis (Group III). All animals exposed to UVR showed the characteristic alterations of cutaneous photoaging and photocarcinogenesis, so consider this experimental model as ideal for the study of this disease, since chronic exposure to radiation caused the entire spectrum of lesions characteristic of photoaging, if the exposure was prolonged (65 to 80 sessions), besides being an easily reproducible and not expensive model . However, in our study we observed significant differences between animals treated with oil of chrysalis silkworm (Group III) compared to the other two groups. In Group III, mice observed a delay in the presentation of skin lesions (6-9 weeks), with respect to the other groups, and there were three animals without tumor lesions at the end of the experiment. In addition, the mean area of lesions was lower in group III (59.14 %) than in the control group (40.86 % reduction), the group treated with sweet almond oil only reduced the area by 10 %. This suggests the photoprotective properties of oil of silkworm chrysalis, probably due to the action containing sericin, which is a potent antioxidant. This delay in the presentation of neoplastic lesions and their smaller area was confirmed by immunohistochemical study, regarding metalloproteinase 9 ( MMP -9) and TIMP inhibitors.
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    Ensayo clínico aleatorizado sobre la puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes frente a la técnica de Karydakis en el tratamiento del sinus pilonidal
    (2017-07-26) Martínez Sanz, Nuria; Moreno Cascales, Matilde; González Valverde, Francisco Miguel; Albarracín Marín-Blázquez, Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
    INTRODUCCIÓN El sinus pilonidal (SP) es una patología frecuente que afecta fundamentalmente a pacientes jóvenes. Su tratamiento es esencialmente quirúrgico. Hasta el momento no se ha descrito una técnica ideal para su resolución, que cumpla los criterios de baja morbilidad y recurrencia, que pueda realizarse en régimen de cirugía mayor ambulatoria, que tenga un resultado estético satisfactorio y que facilite una reincorporación sociolaboral precoz. Algunos autores opinan que las técnicas tradicionales son demasiado agresivas teniendo en cuenta la condición de benignidad del SP. De ahí, que se planteen otras cirugías mínimamente invasivas para su tratamiento como la Puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes (PPCYM). HIPÓTESIS La seguridad terapéutica de la PPCYM no será inferior a la de la técnica de Karydakis al mes de la intervención. La seguridad de la técnica, unido a otros factores como la eficacia, el dolor postoperatorio, el bienestar subjetivo y parámetros relacionados con la eficiencia de la PPCYM permitirán afianzar su utilización como alternativa quirúrgica en el tratamiento del SP. OBJETIVOS Demostrar la no inferioridad en términos de seguridad terapéutica de la PPCYM frente al Karydakis a los 30 días de la intervención. Comparar la eficacia terapéutica, el dolor postoperatorio, el bienestar subjetivo de los pacientes y determinados aspectos sobre la eficiencia en ambos grupos de tratamiento. MATERIAL Y MÉTODO Se realizó un ensayo clínico randomizado en pacientes con SP en el Hospital General Universitario Reina Sofía de Murcia (HGURS) entre julio de 2014 y marzo de 2017. Los sujetos se aleatorizaron para ser intervenidos mediante PPCYM o Karydakis. La recogida de datos se realizó a los 15 días, 30 días, 3 meses y 18 meses tras la cirugía. Para valorar la seguridad terapéutica de ambas técnicas, se realizó un análisis de no inferioridad comparando la proporción de complicaciones postoperatorias precoces (CPP) relacionadas con la herida quirúrgica en el primer mes tras la cirugía. Respecto a la eficacia terapéutica se tuvo en cuenta la proporción de sujetos en cada grupo con recidiva del SP hasta los 18 meses tras la cirugía. En cuanto al dolor, se realizó una medida basal preoperatoria y varias medidas postoperatorias, y se compararon los resultados entre ambos grupos de tratamiento. En relación al bienestar subjetivo del paciente, para evaluar la calidad de vida relacionada con la salud (CVRS) se compararon los datos obtenidos con los cuestionarios SF-36 en ambos grupos de tratamiento. Se comparó además, el grado de satisfacción con el resultado estético con las técnicas estudiadas. Para evaluar la eficiencia terapéutica de las técnicas se tuvieron en cuenta la duración hasta la reincorporación sociolaboral, el tiempo quirúrgico empleado, el número de visitas no programadas y el tiempo de cicatrización. RESULTADOS Se incluyeron un total de 122 pacientes (62 intervenidos mediante PPCYM y 60 mediante Karydakis). La edad media fue de 24,5±9,3 años y el 67,2% eran varones. Las características basales de ambos grupos fueron similares. La duración media de la intervención fue significativamente menor en el grupo de PPCYM, sin diferencias entre ambos grupos respecto al resto de variables relacionadas con el proceso quirúrgico. Durante el seguimiento, se objetivó una menor proporción de CPP con la PPCYM y no hubo diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos de tratamiento respecto a la proporción de recidivas, al dolor y al bienestar subjetivo en general. La mayoría de parámetros relacionados con la eficiencia terapéutica, demostraron que la PPCYM era más eficiente que la técnica de Karydakis en términos generales. Además, el tabaco y la obesidad se mostraron como factores de riesgo para el desarrollo de CPP en el análisis univariante y multivariante para la predicción de las mismas. CONCLUSIONES La Puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes es más segura y más eficiente que la técnica de Karydakis. En términos generales, la Puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes no es inferior en eficacia terapéutica, dolor postoperatorio y bienestar del paciente, respecto a la técnica de Karydakis. El tabaquismo y la obesidad son factores de riesgo para el desarrollo de complicaciones postoperatorias precoces tras la cirugía del sinus pilonidal. La Puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes supone una alternativa comparable a la técnica de Karydakis. Palabras clave: sinus pilonidal; Puesta a plano, curetaje y marsupialización de bordes; Karydakis; complicaciones postoperatorias; Cirugía Mayor Ambulatoria; Ensayo Clínico. INTRODUCTION Pilonidal sinus (PNS) is a common disorder that primarily affects young patients. Its treatment is essentially surgical. No ideal technique which meets the criteria of low morbidity and recurrence, which can be performed as major outpatient surgery, which has a satisfactory aesthetic result and which facilitates an early social and occupational reintegration, has been described to date for its cure. Some authors believe that tradicional techniques are too aggressive considering the benign nature PNS. Hence, others surgical procedures should be considered for treatment, such as unroofing, curettage and marsupialization of the edges of the skin (UCM). HYPOTHESIS The therapeutic safety of UCM shall not be lower than that of the Karydakis technique one month after the procedure. The safety of the technique, together with other factors such as efficacy, postoperative pain, subjective well-being and parameters related with the therapeutic efficiency of the UCM, shall help anchor its use as a surgical alternative in the treatment of PNS. OBJECTIVES To demonstrate the non-inferiority in terms of therapeutic safety of UCM against the Karydakis technique 30 days after the procedure. To compare the therapeutic efficacy, postoperative pain, subjective well-being of patients and certain efficiency-related aspects in both treatment groups. MATERIALS AND METHOD A randomised clinical trial was conducted on patients with PNS at the Hospital General Universitario Reina Sofia in Murcia, Spain between July 2014 and March 2017. Patients were randomised to be operated on using UCM or Karydakis. Data collection was performed at 15 days, 30 days, 3 months and 18 months after surgery. To assess the therapeutic safety of both techniques, a non-inferiority analysis was performed comparing the proportion of early postoperative complications (EPCs) related to the surgical wound in the first month after surgery. Regarding therapeutic efficacy, the proportion of patients in each group with recurrence of PNS was taken into account for 18 months after surgery. Regarding pain, a preoperative baseline and several postoperative measures were performed, and the results were compared between the two groups of treatment. Regarding the subjective well-being of the patient, the data obtained from the SF-36 questionnaires were compared in both treatment groups to evaluate health-related quality of life. The degree of satisfaction with the aesthetic result using the techniques in question was also compared. In order to evaluate the therapeutic efficacy of the techniques, the time until social and occupational reincorporation, the surgery time required, the number of unscheduled visits and the healing time, were taken into account. RESULTS A total of 122 patients were enrolled (62 operated on using UCM and 60 using Karydakis). The mean age was 24.5 ± 9.3 years and 67.2% were males. The baseline characteristics of both groups were similar. The mean duration of the operation was significantly lower in the UCM group, with no differences between the two groups concerning the other variables related to the surgical procedure. During follow-up, a lower proportion of EPCs were observed with UCM and there were no statistically significant differences between the two treatment groups regarding the rate of recurrences, pain and subjective well-being in general. Most parameters related to therapeutic efficiency showed that UCM was more efficient than the Karydakis technique in general terms. In addition, smoking and obesity were shown as risk factors for the development of EPCs in univariate and multivariate analysis for the prediction of said complications. CONCLUSIONS Unroofing, curettage and marsupialization is safer and more efficient than the Karydakis technique for pilonidal sinus surgery. In general terms, Unroofing, curettage and marsupialization is not inferior in therapeutic efficacy, postoperative pain and patient well-being compared to the Karydakis technique. Smoking and obesity are risk factors for the development of early postoperative complications following pilonidal sinus surgery. Unroofing, curettage and marsupialization is an alternative comparable to the Karydakis technique. Key words: pilonidal sinus; Unroofing, curettage and marsupialisation of borders; Karydakis; postoperative complications; major outpatient surgery; clinical trial.
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    Estudio de genes KIR y HLA-C y de polimorfismos de citoquinas en pacientes con psoriasis
    (2015-07-03) Pardo Sánchez, José; Álvarez López, María Rocío; López Hernández, Ruth; Departamento de Oftalmología, Optometría, Otorrinolaringología y Anatomía Patológica
    La psoriasis es una enfermedad de curso crónico caracterizada por la presencia de lesiones cutáneas eritemato-escamosas, y constituye uno de los procesos dermatológicos más frecuentes. Su curso clínico es dinámico e impredecible, y en algunos casos el impacto emocional y físico en el paciente que la sufre puede ser muy importante. Su inmunopatología se basa en mecanismos complejos, donde intervienen tanto una respuesta inmunitaria adaptativa, mediada fundamentalmente por células TH17, como innata, con la participación de elementos como el TNF-α o los receptores KIR (del inglés, Killer Immunoglobulin-like Receptors). Estos receptores son expresados fundamentalmente por las células NK, y su función principal es la de inhibir la actividad citotóxica de estas células tras su unión con ligandos como HLA-C. Igualmente, se sabe que el alelo HLA-C*06 es el principal determinante genético en la psoriasis, aunque los estudios en relación con el mismo realizados en nuestro país son escasos. Existe un número creciente de observaciones que demuestran que determinados genotipos receptor-ligando KIR/HLA-C modulan la acción de las células del sistema inmunitario innato a favor de interacciones activadoras que predispondrían a enfermedades autoinmunitarias como la psoriasis. Así, con el fin de realizar una descripción inmunológica de nuestros pacientes y de valorar la participación del sistema inmunitario innato en la enfermedad, en este trabajo se realizó el tipaje de los alelos HLA-C y de los genes KIR mediante técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), tanto en pacientes con psoriasis como en controles sanos. Además, mediante tipajes de alta resolución se determinaron los polimorfismos tipo SNP de genes que codifican citoquinas proinflamatorias involucradas en la formación de la placa psoriásica (TNF-, IL-6, INF- e IL-23). Los resultados obtenidos en este trabajo confirmaron que el alelo HLA-C*06 constituía un factor de riesgo, especialmente para la psoriasis de debut precoz o tipo I, mientras que el alelo HLA-C*07 era sugestivo de protección. Con respecto a los genes KIR, los individuos que carecían de KIR2DL1, los KIR2DL2/L2 homocigotos y los portadores de KIR2DL5 mostraban una mayor predisposición a padecer psoriasis. El gen KIR2DL5 parecía actuar de manera sinérgica con HLA-C*06 sobre la susceptibilidad a padecer la enfermedad. Además, la presencia de KIR2DS2 y KIR2DS3 en el genoma del paciente constituía un factor de riesgo más específico para la artropatía psoriásica. El estudio de la combinación de los pares receptor-ligando KIR/HLA-C reveló que la presencia simultánea del alotipo HLA-C1 no modificaba el efecto de susceptibilidad a la psoriasis observado en los individuos KIR2DL2/L2 homocigotos. Sin embargo, en los pacientes KIR2DL2/L3 heterocigotos la presencia del ligando C1 ejercía un efecto protector frente a esta enfermedad, que era además dependiente de la dosis de este ligando e independiente de la presencia del alelo HLA-C*06. Además, la combinación de KIR2DS1/ligando C2 se asociaba específicamente a la psoriasis tipo I. El estudio de los polimorfismos de citoquinas mostró que los SNPs TNF -238G>A, IL6 -174G>C e INFG +874T>A determinaban una mayor susceptibilidad a la psoriasis, especialmente la tipo I. Sin embargo, en el caso del gen TNF el efecto del alelo A podía ser subsidiario de un desequilibrio de unión con HLA-C*06. Llamaba la atención que la asociación de este alelo con la psoriasis se observaba en varones pero no en mujeres. Además, el polimorfismo IL12B -1188A>C se asociaba con un efecto protector modesto. En definitiva, los hallazgos encontrados contribuyen a confirmar el papel del par KIR/HLA-C y de algunas citoquinas como el TNF-α en la patogenia de la psoriasis, y hablan a favor de la importancia de la inmunidad innata en esta enfermedad. Abstract Psoriasis is a chronic disease characterized by the presence of erythematous and scaling skin lesions, and it is one of the most frequent dermatologic process. Its clinical course is dynamic and unpredictable, and in some cases the emotional and physical impact in patients can be very important. Its immunopathology is based on complex mechanisms, where either an adaptive immune response, mediated fundamentally by TH17 cells, and an innate immune response, with the participation of elements such TNF-α or Killer Immunoglobulin-like Receptors (KIR), are involved. These receptors are mainly expressed by NK cells, and their principal task is to inhibit these cells cytotoxic activity after their binding to ligands such as HLA-C molecules. Equally, it is known that HLA-C*06 allele is the main genetic factor in psoriasis, however studies related to this allele are hardly to be found in our country. There is a growing number of studies which demonstrate that certain KIR/HLA-C receptor-ligand genotypes modulate the action of cells from the innate immune system supporting activating interactions which would predispose to autoimmune diseases such as psoriasis. Thus, with the aim of performing an immunologic description of our patients and evaluating the participation of the innate immune system in the disease, in this study was carried out the genotyping of HLA-C alleles and KIR genes by means of polymerase chain reaction techniques, both in patients with psoriasis and in healthy controls. Besides, genotype of SNP polymorphisms of genes which codify pro-inflammatory cytokines involved in the formation of psoriatic plaques (TNF-α, IL-6, INF-γ and IL-23) were identified by high resolution techniques. The results of this study confirmed that HLA-C*06 allele is a risk factor, specially for patients with early onset psoriasis, type I, while HLA-C*07 allele suggested protection against the disease. Regarding KIR genes, individuals who lacked KIR2DL1, KIR2DL2 homozygotes and KIR2DL5 carriers, showed a higher predisposition to suffer from psoriasis. KIR2DL5 gene appeared to act synergistically with HLA-C*06 on the susceptibility to suffer from this disease. In addition, presence of KIR2DS2 and KIR2DS3 in patient’s genome constituted a more specific risk factor for psoriatic arthropathy. The study of the combination of KIR/HLA-C receptor-ligand pairs revealed that simultaneous presence of HLA-C1 allotype did not modify the susceptibility to suffer from psoriasis observed in KIR2DL2/L2 homozygotes individuals. However, in KIR2DL2/L3 heterozygotes patients, the presence of C1 ligand had a protective effect against the disease, which in addition was dependent on the dose ligand, and independent from the presence of HLA-C*06 allele. Moreover, the combination of KIR2DS1/C2-ligand was associated specifically to type I psoriasis. The study of cytokine polymorphisms illustrated that SNPs TNF -238G>A, IL6 -174G>C and INFG +874T>A determined a higher susceptibility to psoriasis, specially type I psoriasis. However, in the case of TNF gene, the effect of the A allele could be subsidiary of a linkage disequilibrium with HLA-C*06. It was very remarkable that the association of this allele with psoriasis was present in men, but not so in women. Likewise, the IL12B -1188A>C polymorphism was associated to a modest protective effect. In conclusion, the findings of this study contribute to confirm the role of KIR/HLA-C pair and of certain cytokines such as TNF-α in the pathogenesis of psoriasis, and give us insightful hints of the importance of innate immunity in this disease.
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    Estudio del efecto de polifenoles vegetales sobre un modelo de fotoenvejecimiento en ratones SKH1
    (2014-11-25) Belmar Ruiz, María José; Gómez García, Francisco José; García Carrillo, Nuria; Facultad de Medicina
    La piel sufre, con el paso del tiempo, el envejecimiento cronológico o intrínseco, pero además, debido a la exposición prolongada a la radiación solar, puede verse afectada por el denominado fotoenvejecimiento o envejecimiento extrínseco. Este fenómeno está caracterizado por lesiones cutáneas más extensas y, sobre todo, de mayor gravedad, pues engloba también la presentación de cánceres cutáneos (fotocarcinogénesis). Diversas sustancias polifenólicas de origen botánico, por su capacidad antioxidante, podrían mediar en los mecanismos del fotoenvejecimiento, evitando la formación de radicales libres, el daño al material genético, y en última instancia en la prevención del cáncer cutáneo. Existen limitaciones éticas del desarrollo de modelos experimentales en humanos. Por este motivo, el primero de los objetivos de nuestro trabajo fue el establecimiento de un modelo de fotoenvejecimiento cutáneo en ratones SKH-1 mediante la exposición crónica a la radiación ultravioleta. El segundo objetivo de nuestro estudio, fue evaluar las propiedades de los extractos de granada, fresno y uva, como posibles fotoprotectores. Para la realización de este estudio utilizamos 48 ratones hembras SKH-1/CRL, que se sometieron a radiación ultravioleta, 60 minutos por sesión, tres veces por semana, durante un total de 75 sesiones, con una energía total absorbida por animal, de 1.688 J/cm 2. Los ratones se dividieron en cuatro grupos. El primero sólo recibió RUV (control) y los otros tres eran tratados oralmente con los antioxidantes en el pienso: Extracto de granada (grupo I), fresno (grupo II) y uva (grupo III). Todos los animales expuestos a las RUV presentaron alteraciones características del fotoenvejecimiento y fotocarcinogénesis cutáneos, por lo que consideramos el modelo experimental como óptimo para el estudio de esta patología, pues la exposición crónica a las radiaciones provoca el espectro de lesiones propias del fotoenvejecimiento, si la exposición es prolongada (entre 65-80 sesiones) y además se trata de un modelo fácilmente reproducible y de bajo coste. De los extractos estudiados, el que mostró mejores propiedades sobre el fotoenvejecimiento y la fotocarcinogénesis, fue el E. de granada, con una reducción de las áreas lesionales de un 97,56% respecto al grupo control, de un 90% en la incidencia de carcinomas invasores y de un 38,67% en la tasa de proliferación tumoral (PCNA). Además, el tiempo de presentación de las lesiones fue de los más tardíos entre los polifenoles estudiados. Debido a los prometedores resultados descritos en la bibliografía consultada y los obtenidos por nosotros mismos, consideramos útil realizar ensayos clínicos con los agentes estudiados, que permitan conocer el posible efecto preventivo frente al cáncer cutáneo en humanos, ya sea mediante su incorporación a cremas solares o a la dieta, y su posible papel como agentes coadyuvantes en el tratamiento convencional de esta patología. ABSTRACT With time, the skin suffers chronological or intrinsic aging, but if exposed for long periods to solar radiation, it will also be affected by the process known as photoaging or extrinsic aging. The phenomenon is accompanied by extensive cutaneous lesions and may, more importantly, give rise to skin cancers (photocarcinogenesis). Several polyphenolic substances of vegetal origin are known to have antioxidant effects and may mediate in photoaging mechanisms, preventing the formation of free radicals and damage to genetic material, and, ultimately, contributing to the prevention of skin cancer. There are ethical limitations to the development of experimental models in humans, for which reason our first aim was to establish a model of cutaneous photoaging in SKH-1 mice chronically exposed to ultraviolet radiation. The second aim was to evaluate the possible photoprotective properties of pomegranate, ash and grape extracts. For this, 48 female SKH-1/CRL mice were submitted to 75 sessions of ultraviolet radiation (three, 60 minute sessions per week, total energy absorbed per animal 1,688 J/cm2). The mice were divided into four groups, the first of which (control) was exposed to the above UVR sessions, while the other three groups, besides being exposed to UVR, were given the following extracts as antioxidants in their feed: pomegranate (group 1), ash (group 2) and grape (group 3). All the animals exposed only to UVR showed the alterations characteristic of photoaging so that the experimental model can be considered ideal for studying this pathology if exposure is sufficiently long (65-80 sessions) and especially as it is easily reproducible and inexpensive Of the extracts studied, pomegranate showed the best anti-photoaging and anti-photocarcinogenesis properties, reducing the areas affected by lesions by 97.56% compared with the control, the incidence of invasive carcinomas by 90% and the tumoral proliferation rate (PCNA) by 38.7%. In addition, all the lesions appeared later than when the other polyphenols were provided. Due to the promising results described in the literature consulted and those obtained in our study, we consider that clinical trials are justifiable using the agents studied. These would throw light on the possible preventative role they might have in human skin cancer, whether through inclusion in sunscreens or in the diet, and also the part they could play as adjuvants in the conventional treatment of this pathology.
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    Interacciones funcionales entre el receptor de melanocortinas 1, B-arrestinas y mahogunina
    (2016-05-02) Abrisqueta González, Marta; García-Borrón Martínez, José Carlos; Jiménez-Cervantes Frigols, Celia; Olivares Sánchez, María Concepción; Facultad de Medicina
    El receptor de melanocortinas 1 (MC1R), un receptor acoplado a proteínas G (GPCR) expresado en los melanocitos epidérmicos, es el principal determinante de las respuestas biológicas cutáneas a la radiación ultravioleta de origen solar. El gen MC1R es un gen de susceptibilidad al cáncer de piel bien establecido. La señalización por MC1R, que transcurre por la cascada del AMPc y la vía de las MAP quinasas ERK1 y ERK2, está estrechamente regulada por mecanismos generales comunes a todos los GPCRs, como los mediados por β-arrestinas (ARRBs), y mecanismos específicos como los dependientes de Mahogunina (MGRN1), una proteína que presenta en su secuencia un dominio “RING finger” característico de las E3-ubiquitina ligasas, así como señales de localización nuclear. Las ARRBs participan en la desensibilización homóloga e internalización de muchos GPCRs, mientras que MGRN1 compite con la proteína G por su unión a MC1R. La mutación mahoganoide, que inactiva el gen murino (Mgrn1), genera ratones de pelaje oscuro con una alta letalidad embrionaria y propensión al desarrollo de encefalopatías de tipo espongiforme. Con estos antecedentes, nos propusimos estudiar: i) el efecto diferencial de las principales isoformas de ARRB sobre la señalización dual del MC1R, ii) las consecuencias de la interacción ARRB-MC1R en las propias ARRBs, iii) la posible participación de MGRN1 como ligasa responsable de la ubiquitinación de ARRBs y iv) posibles dianas de MGRN1 responsables del fenotipo mahoganoide. Para abordar estos objetivos utilizamos melanocitos de ratón normales o mutados en Mgrn1 (obtenidos del ratón mahoganoide), células de melanoma humano y sistemas de expresión heteróloga, en los que se sobreexpresaron o silenciaron genes de interés y variantes de las proteínas objeto de estudio obtenidas por mutagénesis dirigida. La función del MC1R se analizó mediante ensayos de producción de AMPc, de activación de ERK1/2 y de unión de radioligandos para determinar la expresión de MC1R en la membrana plasmática. Los extractos celulares se analizaron por técnicas electroforéticas y transferencia Western. Para la búsqueda de dianas de MGRN1 hicimos uso de micromatrices de expresión de ARNm y PCR cuantitativa. La validación funcional de cambios en la expresión génica de algunos genes candidatos previsiblemente regulados por Mgrn1 se llevó a cabo por ensayos de proliferación y análisis del ciclo celular. Demostramos que tanto ARRB1 como ARRB2 interaccionan competitivamente con MC1R, aunque solo ARRB2 lo desacopla de la vía del AMPc e induce su internalización por un mecanismo independiente de clatrina y adaptina. Ninguna de las dos ARRB tiene efecto sobre la señalización mediada por ERKs. Como consecuencia de esta interacción, las ARRBs sufren poliubiquitinación dependiente de MC1R funcional expresado en la membrana plasmática, de forma independiente de agonista. Esta poliubiquitinación disminuye la funcionalidad de ARRB2, transcurre en su dominio C-terminal, implica a Lys400, y se relaciona con una proteólisis alrededor de la posición 170 que origina un péptido de 31 kDa. MGRN1 participa en la poliubiquitinación de las ARRBs y para ello necesita el dominio RING-finger funcional y la presencia de MC1R, que actúa como andamio molecular facilitando la formación de un complejo ternario ARRB-MC1R-MGRN1. Además, se produce una mono- o diubiquitinación en residuo(s) de lisina del dominio N-terminal de ARRB, asociada a una menor capacidad para interaccionar con MC1R. Por otra parte, Mgrn1 regula postraduccionalmente a tubulina β III (TUBB3), y su carencia en melanocitos mahoganoides altera la estructura de los microtúbulos. Además, Mgrn1 afecta a la expresión de múltiples genes reguladores del ciclo celular. Así, la falta de Mgrn1 provoca una parada del ciclo celular en fase S asociada a una tasa de proliferación significativamente menor. c-Myc y Creb1 podrían ser los principales factores de transcripción regulados por MGRN1 responsables de este efecto.   The melanocortin 1 receptor (MC1R), a G protein-coupled receptor (GPCR) expressed in epidermal melanocytes, is the main determinant of the cutaneous biological responses to solar ultraviolet radiation. The MC1R gene is a well characterized skin cancer susceptibility gene. MC1R signaling involves activation of the cAMP and the MAP kinase ERK1 and ERK2 pathways. These processes are tightly regulated by general mechanisms involving the β-arrestins (ARRBs) that act on most if not all GPCRs, as well as by specific mechanisms such as those dependent on Mahogunin (MGRN1), a protein containing the RING finger domain characteristic of E3-ubiquitin ligases and nuclear localization signals. The ARRBs mediate the homologous desensitization and internalization of many GPCRs, and MGRN1 desplaces the Gs protein from MC1R. The mahoganoid mouse mutation, which inactivates the Mgrn1 gene, causes a dark fur phenotype and is associated with high embryonic lethality and neurodegeneration with spongiform-like encephalopathy. With this in mind, our aims were to study: i) the differential effect of the main ARRB isoforms on dual signaling downstream of MC1R, ii) the consequences of the ARRB-MC1R interaction on ARRB structure, iii) the involvement of MGRN1 as an E3-ligase responsible for ARRB ubiquitination and iv) possible targets of MGRN1 accounting for the mahoganoid phenotype. To achieve these goals, we used cultured melanocytes from normal and mahoganoid mutant mice, human melanoma cells and heterologous expression systems. We overexpressed or silenced the genes of interest, as well as variants obtained by site-directed mutagenesis. MC1R function was assessed by cAMP production and ERK activation assays, as well as by radioligand binding experiments to determine MC1R cell surface expression. Cell extracts were analyzed by electrophoretic techniques and Western blotting. To identify MGRN1 targets, we used gene expression microarrays and quantitative PCR. Functional validation of changes in the expression of selected candidate genes likely regulated by Mgrn1 was carried out by cell proliferation assays and cell cycle analysis. We showed that whereas both ARRB1 and ARRB2 bind competitively to MC1R, only ARRB2 uncouples the receptor from the cAMP pathway and triggers its internalization by a mechanism independent on clathrin and adaptin. Conversely, neither ARRB has any effect on ERK-dependent signaling. As a result of the MC1R-ARRB interaction, the ARRBs undergo polyubiquitination in a process strictly dependent on the expression of functional MC1R on the plasma membrane, but independent on MC1R agonists. This polyubiquitination impairs ARRB2 function. It occurs in the C-terminal domain of the protein, it involves Lys400, and it is related with a proteolytic event near residue 170 which generates a 31 kDa polypeptide. In addition, the ARRBs likely undergo a mono- or diubiquitination in lysine residue(s) of the N-terminal domain of the ARRBs, associated with a lower affinity for MC1R. MGRN1 is involved in ARRB polyubiquitination in a manner dependent on a functional RING finger domain and on MC1R, which acts as a scaffold to enable the formation of an ARRB-MC1R-MGRN1 ternary complex. On the other hand, Mgrn1 acts to regulate at the post-translational level tubulin β III (TUBB3), and its downregulation in mahoganoid melanocytes dramatically alters the structure of the microtubules. Moreover, Mgrn1 has a profound effect on the expression on many cell cycle regulatory genes. Accordingly, lack of Mgrn1 impairs cell cycle progression through the S phase and is associated with a significantly lower rate of proliferation. c-Myc and Creb1 appear to be the main Mgrn1-regulated transcription factors responsible for this effect of Mgrn1.
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    Intervenciones de enfermería en la dermatitis asociada a la incontinencia - revisión integradora de la literatura
    (Universidad de Murcia, 2018) de Sousa Lopes Reis do Arco, Helena Maria; Mendes da Costa, Arminda; Machado Gomes, Bárbara; Rosa Anacleto Anacleto, Nuno Miguel; Jorge da Silva, Rosa Alice; Carvalho Peixe da Fonseca, Sofia
    Introducción:La dermatitis asociada a la incontinencia se define como el daño de la piel asociado a la exposición de orina y/o heces, un tipo de dermatitis irritativa de contacto, que causa gran incomodidad y dolor y tiene tratamiento difícil, a largo plazo y caro. El objetivo principal pasa por identificar y adoptar intervenciones en la prevención, gestión y tratamiento de la dermatitis asociada a la incontinencia.Método:El método utilizado ha sido una revisión integradora de la literatura, realizada en las bases de datos establecidas: EBSCO Host Web -CINAHL Plus, MEDLINE y BOn, utilizando los descriptores "nurse”, “nurse care" e"incontinence associated dermatitis" y el carácter booleano "and". La cuestión central de esta revisión ha sido: ¿Cuáles son los cuidados de enfermería más adecuados a la dermatitis asociada a la incontinencia?
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    Lesiones de la piel en neonatos en cuidados intensivos neonatales
    (Universidad de Murcia, 2018) Faraj Faria, Talita; Kamada, Ivone
    RESUMEN: Objetivo: Describir la ocurrencia de lesiones de la piel en recién nacidos internados en una Unidad de Cuidados Intensivos Neonatal de un hospital público de Brasilia, Distrito Federal, Brasil. Método: Estudio cuantitativo, descriptivo y de abordaje prospectivo, realizado con 104 neonatos desde septiembre hasta diciembre de 2014. El análisis estadístico descriptivo incluyó frecuencia absoluta y relativa, mediana y desvío estándar. Resultados: 42 neonatos desarrollaron lesiones de la piel, resultando 77 lesiones, siendo las más incidentes las dermatitis del pañal (15,4%), edema (15,4%), eritema (13,5%) e infiltración (12,5%), seguidas de equimosis (4,8%) y descamación (3,8%). Conclusión: Es necesaria la creación de protocolos y/o la utilización de instrumentos que miren al mantenimiento de la integridad de la piel del recién nacido, que puedan ser herramientas útiles para identificar cualquier alteración en el sistema tegumentario del neonato y, de este modo, prevenir o disminuir su incidencia y sus consecuencias.
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    Melanoma cutáneo en la Comunidad Autónoma de Murcia : estudio clínico-patológico y evolutivo de 414 casos (1971-1990) / Juan José Vicente Ortega ; directores Vicente Vicente Ortega, Manuel Canteras Jordana.
    (Murcia : Universidad de Murcia, Facultad de Medicina, Departamento de Anatomía Patológica, Oftalmología y Otorrinolaringología,, 1995) Vicente Ortega, Juan José
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    Modelo de tratamiento experimental de la fotocarcinogénesis por irradiación ultravioleta crónica en ratones SKH-1
    (2016-12-22) Arribas Díaz, Blanca; Vicente Ortega, Vicente; Gómez García, Francisco José; Escuela Internacional de Doctorado
    La piel es el órgano más externo y extenso que recibe directamente las radiaciones UV solares, responsables del fotoenvejecimiento y la fotocarcinogénesis cutáneos. El objetivo de nuestro trabajo ha consistido en el desarrollo de un modelo experimental de fotoenvejecimiento mediante la exposición crónica a RUV, así como la evaluación de los efectos del tratamiento con ingenol mebutato y paclitaxel sobre las lesiones originadas. Para ello utilizamos 72 ratones SKH-1 que se expusieron a 65 sesiones de radiación UV (98,6% RUV A y 1,4% RUV B) de 60 minutos de duración, 4 días a la semana; cada animal fue expuesto a 1.371,5 J/cm2. Los ratones se dividieron en 6 grupos (n=12) según el tratamiento aplicado: grupo I (RUV exclusivamente); grupo II, tratados con ingenol mebutato durante 3 días consecutivos; grupo III, tratados con paclitaxel+5% GES durante 3 semanas; grupo I , tratados con paclitaxel+5% GES 6 semanas; grupo V, tratados con paclitaxel+1,2% GES 3 semanas y Grupo VI, tratados con paclitaxel+1,2% GES 6 semanas. Tras el período de tratamiento los ratones fueron observados durante 1 mes, y finalmente se realizó su sacrifio y necropsia. Todos los animales presentaban clínicamente todo el espectro lesional del fotoenvejecimiento y la fotocarcinogénesis cutáneos. En los animales tratados con ingenol mebutato se produjo la reducción de la superficie de las lesiones desarrolladas durante la irradiación, así como la reducción del 17% de la incidencia de carcinomas con respecto al grupo Control, mientras que los animales de los grupos tratados con distintas formulaciones de paclitaxel lograron reducir la incidencia de carcinomas entre el 25 y el 50%, siendo los animales tratados con paclitaxel+1,2% GES durante 3 semanas los que mostraron mayor grado de respuesta al tratamiento con una reducción de la incidencia de carcinomas del 50%. En el estudio inmunohistoquímico los animales de todos los grupos mostraron un comportamiento similar. Se observó la disminución de expresión de PCNA y, por tanto la proliferación celular y una mayor expresión de MMP-9 en los carcinomas in situ y microinvasores, lo que sugiere una mayor actividad de estas enzimas en estadíos iniciales de la carcinogénesis; mientras que el inhibidor de metaloproteinasas TIMP-1 parece tener poca relevancia en el proceso neoplásico en nuestro modelo. En conclusión, el presente modelo reproduce el efecto sobre la piel de la exposición crónica a la radiación ultravioleta, provocando las alteraciones del fotoenvejecimiento y el desarrollo de carcinomas. El tratamiento de la piel con signos de daño actínico con ingenol mebutato o con paclitaxel previene la evolución de las lesiones hasta el desarrollo de carcinomas espinocelulares. SUMARY The skin is the outermost and extensive organ that directly receives solar UV radiation, responsible for photoaging and skin photocarcinogenicity. The aim of our work was to develop an experimental model of photoaging by chronic exposure to UVR, as well as the assessment of the effects of the treatment with paclitaxel and mebutato ingenol on the injuries caused. We used 72 SKH-1 mice wich were exposed to 65 sessions of UV radiation (98.6% UVR A and 1.4% UVR B) of 60 minutes length, 4 days a week; each animal was exposed to 1371.5 J / cm2. Mice were divided into 6 groups (n = 12) as the treatment applied: Group I (only UVR); Group II, treated with ingenol mebutato for 3 consecutive days; Group III, treated with paclitaxel + 5% GES for 3 weeks; Group IV, treated with paclitaxel + 5% GES for six weeks; Group V, treated with paclitaxel + 1.2% GES 3 weeks; and Group VI, treated with paclitaxel + 1.2% GES 6 for weeks. After the treatment period mice were observed for 1 month, and finally its sacrifice and necropsy was performed. All animals showed clinically the whole lesional spectrum of skin photoaging and photocarcinogenicity. In animals treated with mebutato ingenol, the surface of the lesions developed during irradiation was reduced, and a 17% reduction in the incidence of carcinomas compared to the control group, while animals on the groups treated with different paclitaxel formulations reduced the incidence of carcinomas between 25 and 50%, the animals treated with paclitaxel + 1.2% GES for 3 weeks showed increased responsiveness to treatment with reduced incidence of carcinomas 50%. In the immunohistochemical study animals in all groups showed a similar behavior. A decreased expression of PCNA was observed, and thus cell proliferation and increased expression of MMP-9 in situ and microinvasive carcinomas, suggesting an increased activity of these enzymes in early stages of carcinogenesis; while the metalloproteinase inhibitor TIMP-1 seems to have little relevance in the neoplastic process in our model. In conclusion, this model reproduces the effect on skin of chronic exposure to ultraviolet radiation, causing alterations of photoaging and development of carcinomas. Treatment of skin with signs of photodamage with mebutato ingenol or paclitaxel prevented the evolution of injury to the development of squamous cell carcinomas.
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    Modelo experimental de fotoenvejecimiento : efectos de polifenoles
    (2014-07-24) Cano Gómez, Antonio; García Gómez, Francisco José; Sánchez-Pedreño Guillén, Paloma; Vicente Ortega, Vicente; Departamento de Oftalmología, Optometría, Otorrinolaringología y Anatomía Patológica
    La exposición a la radiación solar provoca daños sobre la piel, que incluyen: eritema, quemaduras, inmunosupresión, etc.; y a largo plazo fotoenvejecimiento (término acuñado por Kligman en 1982) y cáncer de piel. De ahí que estas patologías sean en gran parte prevenibles al evitar la exposición excesiva al sol y con la utilización de fotoprotectores. Los objetivos de nuestro estudio, correspondieron al desarrollo de un modelo de fotoenvejecimiento en ratones SKH1, que fuera reproducible y fiable, para posteriormente estudiar los posibles efectos fotoprotectores de algunos compuestos polifenólicos. Para su realización utilizamos 40 ratonas SKH1/CRL, que fueron expuestas a radiación ultravioleta (98.6 % RUV-A y 1.4 RUV-B), 60 minutos por sesión, tres veces a la semana, durante 80 sesiones, con un total de 1.688 J/cm2 de energía recibida por animal. Las ratonas se dividieron en cuatro grupos (n = 10). El primero (Control) sólo recibió RUV y a los tres restantes, además de RUV, se añadió a la dieta, ácido Carnósico (Grupo II), Apigenina (Grupo III) y ácido Rosmarínico (Grupo IV), a la dosis de 1 mg /animal/día. En nuestro estudio todos los animales expuestos a las RUV presentaron las alteraciones características del fotoenvejecimiento y fotocarcinogénesis cutánea (entre 65 y 80 sesiones), por lo que lo consideramos que el modelo experimental desarrollado es idóneo para el estudio de esta patología. No obstante hemos encontrado diferencias entre los animales de los distintos grupos experimentales en cuanto al tiempo de presentación de las lesiones, su extensión, e intensidad, fundamentalmente en las 4 variables estudiadas, (DT 50: semana en la que al menos la mitad de los animales del grupo mostraban lesión), área total lesionada, tamaño medio de las lesiones, e incidencia microscópica de lesiones neoplásicas malignas). 4 Clínicamente en los animales pertenecientes al Grupo IV (ácido Rosmarínico), destacaba que la piel del dorso presentaba menor número de arrugas y un aspecto general más saludable que los de los otros grupos hasta la sesión 50. En cuanto a la semana en la que al menos la mitad de los animales del Grupo presentaban lesión (DT 50), solo observamos retraso en los animales del Grupo II (Ácido Carnósico) que presentaban una DT50 = 70, mientras que en los de los Grupos I (Control) y Grupo IV (ácido Rosmarínico) era idéntica: 60 (DT50=60), y en el Grupo III tratado con Apigenina era de 52. En la media del área total lesionada observamos una reducción que era mayor en los Grupos II (Ácido Carnósico) con 71.58 seguido del Grupo III (Apigenina) con 104.72 y del Grupo IV (Ácido Rosmarínico) con 132.10, respecto al Grupo I(Control): 190.43. De modo similar, también observamos esa reducción respecto al tamaño medio de las lesiones, que era: Grupo II: 10.91, Grupo III:36.31, Grupo IV: 44.59 y Grupo I: 62.65. En cuanto a la incidencia microscópica de las lesiones neoplásicas malignas, en los Grupos II (Ácido Carnósico) y IV (Ácido Rosmarínico) se presentaron en 6 animales, mientras que en el III (Apigenina) ocurrían casi en todos los animales (9) y en todos los del Grupo I (Control). De estos resultados parece deducirse que tanto el ácido Carnósico como el Rosmarínico poseen propiedades fotoprotectoras y anticarcinogénicas, probablemente debidas a su actividad antioxidante.Summary Exposure to solar radiation provokes damage to the skin, including erithema, burns and immunosuppression, and, in the long term photoaging (a term coined by Kligman in 1982) and skin cancer. Many of these pathologies are preventable by avoiding prolonged exposure to the sun or by using photoprotectors. The aim of our work was to develop a photoaging model in SKH1 mice that was reproducible and reliable and subsequently to study the possible photoprotective effects of several polyphenolic compounds. For this, forty SKH1/CRL mice were exposed to 80 sessions of UVR (98.6% UVA and 1.4% UVB) for 60 minutes/session, 3 times per week (total of 1,688 J/cm2 per animal). The mice were divided into four groups (N= 10): the control group, which only received UVR, and three others which were exposed to UVR but were also given a dietary supplementation of Carnosic Acid (Group II), Potassium Apigenin (Group III) and Rosmarinic Acid (Group IV) at a rate of 1 mg /animal/day. The control group animals exposed to UVR showed the alterations characteristic of photoaging and cutaneous photocarcinogenesis after 65-80 sessions, so that the experimental model can be considered ideal for studying such pathologies. However, there were differences between the animals receiving the supplements as regards the time at which the lesions appeared, their extension and intensity, basically for 4 variables studied, (DT 50: week in which at least half the animals of the group showed lesions), total area affected, mean size of variables and microscopic incidence of malign neoplastic lesions. Clinically, the animals of Group IV (Rosmarinic acid) showed fewer wrinkles and a healthier appearance than the other groups up to session 50. As regards the DT50 variable, only the animals of Group II (Carnosic acid) showed a DT50 = 70, while the other groups showed the following scores: Groups I (Control) and Grupo IV (Rosmarinic acid) 60 (DT50=60), and Group III (treated with Apigenina) 52. As regards the total damaged area, the reduction compared with the control was greater in group II (Carnosic acid) with 71.58 followed by Group III (Apigenin) 2 with 104.72 and Group IV (Rosmarinic acid) with 132.10, compared withGroup I (Control): 190.43. Similarly, there was a reduction in the mean size of the lesions: Group II, 10.91; Group III, 36.31; Group IV, 44.59 and Group I, 62.65. As regards the microscopic incidence of malign neoplastic lesions, 6 animals presented the same in Groups II (Carnosic acid) and IV (Rosmarinic acid), 9 in Group III (Apigenin) and all in Group I (Control). From the results it can be deduced that both carnosic acid and rosmarinic acid possess photoprotective and anti-photocarcinogenic properties, probably as a result of their antioxidant activity.