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Causalidad de muertes y caracterización de hallazgos anatomopatológicos en Ajolotes de Xochimilco (Ambystoma mexicanum
(Universidad de Murcia, 2023-10-19) López Díaz, Osvaldo; Buendía Marín, Antonio Julián; Escuela Internacional de Doctorado
Los ajolotes de Xochimilco (Ambystoma mexicanum) son anfibios pertenecientes al orden: Caudata, Familia: Ambystomatidae, es la especie neoténica acuática más común en cautiverio y se ha utilizado por muchos años en la investigación biomédica por sus características de regeneración corporal. El ajolote o axolotl es una especie endémica del sistema lagunar del valle de México y actualmente sólo habita en vida libre en los canales de Xochimilco en Ciudad de México. Este anfibio se encuentra en peligro de extinción y aunque existen múltiples investigaciones en torno a él, éstas se enfocan en su capacidad de regeneración, la cual podría apoyar a la salud humana, también se encuentran registrados diversos avances en la descripción de algunos de sus procesos fisiológicos. Los estudios relacionados a sus enfermedades son escasos y generalmente han sido extrapolados a partir de la información generada en otras especies de anfibios; hoy en día continúa la idea de utilizar las descripciones de anfibios como un modelo “estándar” donde no se determinan particularidades por especie. Con respecto a las descripciones anatomopatológicas estas son escasas, principalmente generadas a partir de casos aislados. Este estudio se llevó a cabo en el periodo comprendido entre 2019 y 2022, a partir de 50 cadáveres de Ambystoma mexicanum (21 machos, 27 hembras y 2 de sexo indeterminado) de diferentes edades, todos ellos pertenecientes a la colección del Centro de Investigaciones Biológicas y Acuícolas de Cuemanco (CIBAC), México. Se realizaron las necropsias de estos ejemplares con el objetivo de determinar la causalidad de muerte de esta especie y describir macroscópica y microscópicamente las lesiones encontradas, además de identificar los agentes etiológicos involucrados en los decesos y describir la resistencia antimicrobiana de las cepas aisladas. La principal causa de muerte correspondió a septicemia con 45 casos que representaron el 90% de los decesos, a partir de los cuales se aislaron bacterias del género Aeromonas spp., E.coli, Enterobacter aerogenes y Salmonella arizonae, 3 procesos de parasitosis que representaron el 6% y 2 procesos de inanición que representaron el 4%, además de identificarse 37 lesiones microscópicas en los siguientes sistemas; en el sistema cardiorrespiratorio se identificaron endocarditis granulomatosa, congestión pulmonar, flebectasia, hiperinsuflación, y neumonías necróticas, purulentas y granulomatosas. En el sistema digestivo se diagnosticaron gastritis y enteritis linfocíticas, enteritis necróticas, enteritis catarral mucosa y enteritis con melanomacrófagos, además de lesiones hepáticas como degeneración vacuolar, telangiectasia, hepatitis necrótica aguda, hepatitis granulomatosas, hepatitis intersticial crónica, hepatitis granulomatosa con predominio de melanomacrófagos y hepatitis crónica fibrosante. En el sistema linforreticular se observó congestión esplénica, depleción linfoide, hiperplasia de pulpa roja, esplenitis purulenta y esplenitis granulomatosa con melanomacrófagos. A nivel del sistema urinario se determinaron lesiones como congestión renal, necrosis tubular asociada a depósitos de calcio, nefritis intersticial linfocítica, glomerulonefritis crónica asociada a melanomacrófagos y glomerulonefritis mesangioproliferativa. En cuanto al sistema tegumentario, se observaron lesiones como degeneración vacuolar epitelial, dermatitis necrótica erosiva, dermatitis necrótica ulcerativa, adenoma de glándulas de moco con área carcinomatosa y melanoma. Las principales resistencias antimicrobianas generadas por Aeromonas spp. se desarrollaron contra quinolonas, nitrofuranos y cefalosporinas. Las principales resistencias antimicrobianas generadas por Salmonella arizonae se desarrollaron contra cefalosporinas, nitrofuranos y quinolonas. El aislamiento de Enterobacter aerogenes presentó resistencia a las cefalosporinas y el aislamiento de E.coli. resistencias a quinolonas, aminoglucósidos y nitrofuranos. En nuestro conocimiento, éste es el primer catálogo de lesiones específicas de Ambystoma mexicanum que pretende establecer bases para la descripción de patogenias y el diagnóstico de enfermedades que aquejan a este anfibio de importancia mundial para la biodiversidad, además de apoyar a los programas dirigidos a su conservación.
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Contribución de la metabolómica en el diagnóstico histopatológico de la hepatitis C y de las hepatopatías autoinmunes
(Universidad de Murcia, 2023-01-10) Vizcaíno Vázquez, José Ramón; Pons Miñano, José Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
El diagnóstico histopatológico de la hepatitis C (VHC) y de las hepatopatías autoinmunes como la colangitis biliar primaria (CBP) y la hepatitis autoinmune (HAI) requiere la integración de datos bioquímicos, serológicos, inmunológicos y moleculares, porque no hay aspectos morfológicos patognomónicos en la biopsia que caractericen estas entidades diagnósticas. Ante la ausencia de datos que favorezcan una entidad, la biopsia es un elemento esencial para auxiliar en el diagnóstico que en estos casos es de presunción. Fueron seleccionados 62 pacientes distribuidos en cuatro grupos: control (n=13); CBP (n=11); VHC (n=21); HAI (n=17). El producto de extracción de metabolitos a partir de tejido de biopsia hepática parafinada, analizado en HPLC-MS/MS, reveló 95 metabolitos de los que 53 cumplían el requisito de precisión impuesto (35%). Los modelos predictivos generados, con estos 53 metabolitos para los diferentes grupos diagnósticos, mostraron una capacidad de discriminación buena para Control vs VHC (AUC= 0.88), Control vs HAI (AUC=0.81), VHC vs HAI (AUC=0.88) y excelente para Control vs CBP (AUC=0.96), VHC vs CBP (AUC=0.97), HAI vs CBP (AUC=0.92). El estudio de vías metabólicas a partir de los módulos generados en la red de correlaciones perturbadas entre los diferentes grupos diagnósticos sugiere una perturbación en el metabolismo de los carbohidrato en los grupos Control vs VHC y VHC vs CBP, del metabolismo de los aminoácidos en los grupos VHC vs HAI y HAI vs CBP, del metabolismo de nucleótidos en los grupos VHC vs HAI, HAI vs CBP y control vs CBP, del metabolismo energético en el grupo control vs CBP. La baja capacidad discriminativa de las variables morfológicas no contribuye a mejorar el poder discriminativo de los modelos generados con los metabolitos. No encontramos un conjunto de metabolitos lo suficientemente discriminativos para construir un modelo de predicción del grado de fibrosis y de actividad necroinflamatoria. En resumen, en esta tesis hemos demostrado que la metabolómica podría constituir la base de una técnica complementaria extremadamente relevante para el diagnóstico histopatológico de la hepatitis C y la hepatopatías autoinmunes. El conjunto de conocimientos que se exponen en esta tesis debería ser de interés general para los investigadores que utilizan tecnologías de vanguardia, incluida la metabolómica, para el perfeccionamiento del diagnóstico histopatológico en el siglo XXI.
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Crecimiento y desarrollo del alumno. Patologías y tratamiento escolar
(2011-06-21) Baena Extremera, Antonio; Actividad Física y del Deporte; Facultad de Ciencias del Deporte; Departamento de Actividad Física y del Deporte
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Elogio de la melancolía: una historia marginal de la bilis negra
(Universidad de Murcia. Servicio de Publicaciones, 2016) Horacio De Freitas, Juan
Este ensayo se desarrolla a partir de la siguiente hipótesis: hay, por lo menos, dos historias posibles de la melancolía. No se trata, sin embargo, de historias indiferentes entre sí, sino más bien de historias entrecruzadas que pretenden ignorarse una a la otra, que se confunden, dialogan y se enfrentan a lo largo de su transcurso. Nos permitiremos elaborar una pequeña genealogía que nos permita comprender la forma en la que nacieron estas dos presuntas historias de la melancolía a las que hacemos referencia, y así mostrar las diferentes transformaciones por las cuales ha pasado la bilis negra, sustancia que ha sido asociada con fenómenos tan disímiles entre sí como lo patológico, la genialidad e, incluso, lo humorístico.
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Estudio anatómico del complejo fibrocartílago triangular mediante análisis de imagen: valoración de la ecogenicidad de sus componentes
(2015-12-10) Carbonell Ruiz, Daniel José; Domenech Ratto, Ginés; Moreno Cascales, Matilde; Martínez Martínez, Francisco; Berná Serna, Juan De Dios; Departamento de Anatomía Humana y Psicobiología
La patología del aparato locomotor consume gran cantidad de recursos económicos y asistenciales en la práctica médica diaria. Tan importante como solucionar dicha patología, es realizar un diagnóstico correcto de la misma, sin el cual, podríamos estar tratando determinadas patologías de forma completamente errónea. Actualmente, la radiología, supone una de las herramientas más poderosas en el diagnóstico de la patología del aparato locomotor, siendo una ayuda inestimable en identificar la causa de las molestias en el paciente. Cada problema requiere de la técnica diagnóstica correcta, y un mal uso de ellas, puede llevarnos a diagnósticos equivocados. La ecografía es una técnica asequible, rápida que permite visualizar imágenes a tiempo real. Algunos equipos de trabajo, han intentado utilizar dicha técnica en el diagnóstico de las lesiones del complejo fibrocartílago triangular (FCT), concretamente para la valoración del disco articular. No obstante, la escasa literatura publicada, así como resultados muy dispares, no ha permitido asegurar que la ecografía, sea útil para el diagnóstico de roturas en dicha estructura. En el presente trabajo, pretendemos evaluar si la ecografía, es una técnica diagnóstica válida para la identificación y valoración del disco articular del CFT. Nosotros creemos que, dada la base anatómica, así como los hallazgos descritos en los estudios referidos, la ecografía no es útil para la evaluación del disco articular del complejo, ya que, la estructura anatómica identificada en estos trabajos como disco articular, se corresponde realmente con el menisco homólogo. Para poder validar nuestra hipótesis, se realizaron varias pruebas diagnósticas sobre 20 piezas anatómicas intactas, que incluyeron antebrazo, articulación de la muñeca y mano. Dichas pruebas consistieron en: radiología simple de la articulación de la muñeca, en proyecciones anteroposterior y lateral, ecografía simple del borde cubital de la muñeca, con corte coronal preestiloideo y longitudinal paracoronal oblicuo, artrografía con inyección tricompartimental de contraste, artroecografía con punción ecoguiada de marcador metálico en la estructura anatómica tradicionalmente identificada mediante ecografía como disco articular, y por último, disección anatómica, como técnica de referencia, con el fin de valorar la localización del marcador metálico, y si efectivamente, dicha estructura se correspondía con el disco articular. Sobre los datos obtenidos se realizó un estudio estadístico descriptivo, para conocer la distribución de frecuencias, y posteriormente, un análisis estadístico de los mismos, donde se estudió la relación entre variables mediante un análisis de tablas de contingencia con el test de la χ 2 de Pearson, y la prueba de McNemar. Para la valoración de la concordancia entre los resultados obtenidos en las distintas técnicas diagnósticas del trabajo, se aplicó el índice kappa. En nuestro estudio observamos, que existía concordancia entre la artrografía tricompartimental y la disección anatómica en el diagnóstico de rotura del disco articular. Sin embargo, no existía concordancia entre la ecografía y los resultados obtenidos mediante artrografía y disección anatómica; lo mismos resultados se obtuvieron con la artroecografía. En la disección anatómica se comprobó, que el marcador metálico se encontraba alojado en el menisco homólogo en el 80% de las piezas utilizadas. Existen diferentes trabajos en los que se estudia el CFT mediante ecografía, sin embargo, muy pocos en los que se le compare con otras técnicas diagnósticas, o con disección anatómica. Los resultados obtenidos son muy variables, no obstante, todos identifican la misma estructura ecográfica como el disco articular del complejo. Dados los resultados obtenidos en nuestro trabajo, observamos que dicha estructura se corresponde realmente con el menisco homólogo, quedando el disco articular oculto por la interposición de estructuras óseas y su profundidad en la articulación. Por tanto, la ecografía no ha demostrado ser una técnica diagnóstica útil para la evaluación del disco articular del CFT. The locomotor system pathology consumes a lot of economic and welfare resources in everyday medical practice. As important as solving this disease, it´s to make a correct diagnosis, without which, certain diseases could be treated in a completely wrong way. Currently, radiology is one of the most powerful tools in the diagnosis of musculoskeletal pathology, plain radiography, magnetic resonance, computed tomography and ultrasound, are an invaluable aid in identifying the cause of the patient discomfort. Each problem requires proper diagnostic technique, and misuse of these techniques can lead to misdiagnosis. Ultrasound is an affordable, rapid technique, which allows viewing images in real time; It is helpful in the diagnosis of muscle and ligament pathology. In recent years, some teams have tried to use this technique in the diagnosis of lesions of the triangular fibrocartilage complex, more specifically for the assessment of the articular disc. However, limited published literature and disparate results, has not allowed ensure that ultrasound is useful for the diagnosis of tears in this structure. In this work, we evaluate whether ultrasound is a valid diagnostic technique for the identification and assessment of the articular disc of the triangular fibrocartilage complex. We believe that, given the anatomical basis and findings described in the studies mentioned, ultrasound is not useful for evaluating the articular disc of the complex, as the anatomical structure identified in those works as articular disc, actually correspond with the meniscus homologue. In order to validate our hypothesis, several diagnostic tests were made on 20 intact anatomical pieces, which included forearm, wrist joint, and hand held. These tests consisted of: plain radiography of the wrist joint, anteroposterior and lateral projections, simple ultrasound of the ulnar side of the wrist, with coronal prestyloid view and paracoronal longitudinal oblique view, three-compartment arthrography contrast injection, sonoarthrography with ecoguided metallic marker puncture on the anatomical structure traditionally identified by ultrasound as articular disc, and finally, anatomical dissection, as the gold standard, in order to assess the location of the metal label, and, if indeed such structure matched the articular disc. On data obtained, a statistical descriptive study was conducted to determine the distribution of frequencies, and then, a statistical analysis of the data, where the relationship between variables was studied by analyzing contingency tables with the test of χ 2 Pearson, and the McNemar test. For the assessment of the agreement between the results obtained from the various diagnostic techniques work, the kappa index was applied. We observed that there was agreement between the three-compartment arthrography and the anatomical dissection in the diagnosis of rupture of the articular disc. However, there was no correlation between ultrasound and the results obtained by arthrography and anatomic dissection; the same results were obtained with sonoarthrography. In anatomical dissection it was found that the metallic marker was staying in the homologous meniscus in 80% of the pieces used. There are different Jobs where the triangular fibrocartilage complex is studied by ultrasound, however, very few which compare with other diagnostic, or anatomical dissection techniques. The results are highly variable, however, all identified the same ultrasound structure as the articular disc of the complex. Given the results of our work, we note that such structure actually corresponds to the meniscus homologue, leaving the disk hidden by the interposition of bony structures and it´s depth in the joint. Therefore, ultrasound has not proven to be a useful diagnostic technique for the evaluation of the articular disc of the triangular fibrocartilage complex.
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Estudio de los factores predictivos del resultado del análisis intraoperatorio de la biopsia selectiva del ganglio centinela en el cáncer de mama y su implicación en la indicación del mismo
(Universidad de Murcia, 2021-05-05) Nicolás López, Tatiana; Piñero Madrona, Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
En el manejo del cáncer de mama es esencial una adecuada estadificación que incluye conocer la afectación ganglionar del mismo. En este contexto, existen antecedentes que implican un manejo más conservador de la axila desde el punto de vista quirúrgico, evitando linfadenectomías mediante el uso de la biopsia selectiva del ganglio centinela (BSGC) al identificar ganglios con o sin afectación. Históricamente, se ha producido un enfoque cada vez más conservador, dependiendo de la intensidad de dicha afectación, pasándose del requerimiento de su negatividad, a considerar la presencia de células tumorales aisladas y micrometástasis, e incluso, en las últimas dos décadas, ante la presencia de afectación ganglionar en el centinela con macrometástasis. Todo lo anterior resalta la utilidad de poder conocer, en el momento de la cirugía, la probabilidad de afectación para decidir la necesidad de proceder a la linfadenectomía, o no. Sin embargo, esta evolución a una actitud cada vez más conservadora, junto con la obligada inversión de recursos en tiempo y métodos diagnósticos que supone el análisis intraoperatorio del ganglio centinela, lleva a plantear la conveniencia de conocer, de forma lo más precisa posible, la existencia de variables que predigan las condiciones de afectación ganglionar y puedan evitar la necesidad del análisis intraoperatorio. Este proyecto plantea un análisis de variables preoperatorias que permitan predecir con suficiente precisión la carga tumoral en el ganglio o ganglios centinelas (GCs) que obliguen a realizar la linfadenectomía en el mismo acto quirúrgico. Para ello se ha realizado un estudio retrospectivo de casos con cáncer invasor de mama en los que se realizó la BSGC, recogiendo variables (clínicas, de método de imagen, histopatológicas, inmunohistoquímicas), obtenidas previamente a la cirugía, y realizando un estudio de ser posible relación con una carga tumoral y los criterios vigentes que obliguen a la linfadenectomía. De manera global, en el análisis bivariante, las variables que se relacionaron de forma estadísticamente significativa con variable dependiente “indicación de LA tras resultado del análisis IO del GC” y/o con “afectación IO del GC” fueron: la menopausia, el tamaño tumoral, la palpabilidad, el número de lesiones, el número de GCs aislados, la invasión linfovascular, el grado de diferenciación, el porcentaje de carcinoma ductal in situ, y la clasificación molecular subrogada. En el análisis de regresión logística multivariante se mantuvieron estadísticamente significativas la invasión linfovascular, el grado de diferenciación, el número de GCs aislados, y la clasificación molecular subrogada. Se obtuvieron tres modelos matemáticos, uno para la técnica H&E, otro para el método OSNA y otro para la serie general, que permitirían identificar grupos de bajo riesgo en los que evitar el análisis intraoperatorio del ganglio centinela. Como conclusión, la presencia de invasión linfovascular y un bajo grado de diferenciación histológica en la biopsia preoperatoria; un número mayor de dos GCs aislados; y, cuando se considere el método molecular con OSNA, el perfil inmunohistoquímico, tiene relación con la probabilidad de que el análisis intraoperatorio del GC determine un cambio de actitud en el manejo de la axila durante el mismo acto quirúrgico
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Estudio del efecto del tratamiento tópico con diferentes formulaciones de curcumina sobre un modelo de reparación tisular en ratas Sprague- Dawley sanas y diabéticas
(Universidad de Murcia, 2021-12-03) Ramírez Andreo, Antonio; Gómez García, Francisco José; Martínez Díaz, F.; Escuela Internacional de Doctorado
La piel es sin duda el órgano por excelencia en la anatomía humana, por extensión y por su implicación en múltiples funciones que incluye la síntesis de vitamina D(1)(2)(3). La integridad de la piel en muchas ocasiones se puede ver alterada por distintos mecanismos lesivos, que abocan muchas veces en una herida. El objetivo de este estudio experimental ha sido comprobar la eficacia de diferentes formulaciones de curcumina en nanopartículas, aplicadas en las heridas de espesor total en ratas (Sprague-Dawley) sanas y en ratas diabetizadas. Las distintas preparaciones se aplicaron a diario en las heridas y se hizo una evaluación macroscópica del diámetro de la herida, así como un estudio histomorfométrico e inmunohistoquímico (sólo en ratas diabéticas) en los días 3, 7 y 14. En el estudio macroscópico de ratas sanas se obtuvo una más rápida cicatrización en las tratadas con curcumina en glicerosomas recubiertos de ácido hialurónico (AH). Los resultados de las variables histomorfométricas demostraron una clara tendencia a la reepitelización precoz del grupo de ratas sanas tratadas con curcumina en glicerosomas+AH, si bien no se hallaron diferencias estadísticamente significativas (d.e.s). El resto de variables histomorfométricas no mostraron d.e.s El estudio inmunohistoquímico no relevó d.e.s. Concluimos que la eficacia de la encapsulación de curcumina en glicerosomas+AH frente a otras presentaciones se haya debido a la consecución de una mayor concentración de curcumina en la herida y mayor estabilidad, así como por el efecto adyuvante del AH (antiinflamatorio y promotor de la movilidad celular).
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Evaluación cuantitativa y cualitativa de la satisfacción en la enseñanza de la Patología en estudiantes de medicina en una universidad compleja chilena
(Universidad de Murcia. Servicio de publicaciones, 2024) Durán Reyes, Cristina; Delgado Schneider, Carolina; Martínez Riquelme, Santiago; Maturana Barrera, Jorge; Constanzo Valdebenito, Claudia; Burgos Burgos, Diego; Dassori Walker, Valeria; Vallejos, Anai; Villalobos Huerta, Pía
Las asignaturas de Patología general y Anatomía patológica son impartidas durante elquinto y sexto semestre de la carrera de Medicina de la Universidad de Concepción. En estas seutiliza un estilo de enseñanza tipo aula invertida con una actividad práctica de “Diseño de casosClínico-Patológicos” (DCCP), iniciada en sala de patología quirúrgica, donde los estudiantesvivencian en forma real el trabajo del anatomopatólogo en grupos de 3 a 4 personas, realizandodesde el dictado macroscópico hasta el diagnóstico microscópico, con una presentación final delcaso a estudiantes y docentes. Se realizó un estudio observacional analítico transversal a unamuestra de 87 estudiantes que cursaron ambas asignaturas. Se efectuó un análisis descriptivocuantitativo y un método cualitativo de análisis de contenido, codificándose y clasificándose lasrespuestas de2 instrumentos. La satisfacción general de la actividad DCCP fue del 82,4%, siendopercibida como innovadora y útil para el desarrollo de habilidades y aprendizajes teóricos depatología, que prepara a los alumnos de mejor manera para enfrentar los desafíos del mundo realcomo profesionales de la salud. No se debe olvidar la importancia de considerar las preferencias ynecesidades de los estudiantes al diseñar estrategias de enseñanza. La evaluación cualitativa de laactividad DCCP y de las asignaturas entregó valiosa información para un mejoramiento continuo;reafirmando la importancia de incorporar éstas en las evaluaciones de prácticas docentes. Se concluye que la actividad práctica DCCP ayuda de mejor forma a los estudiantes de medicina a entender los aspectos macroscópicos y microscópicos de la Anatomía Patológica; superando incluso al aula invertida. La combinación de enfoques centrados en el alumno, trabajo en entornos reales,un apoyo docente adecuado y material de estudio de calidad puede conducir a una experiencia de aprendizaje más efectiva y satisfactoria para los estudiantes en estas disciplinas.
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Mechanisms involved in the inflammatory process of gilthead seabream (Sparus aurata)
(Universidad de Murcia, 2022-06-20) Campos-Sánchez, José Carlos; Esteban Abad, María de los Ángeles; Guardiola Abellán, Francisco Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
La inflamación es una respuesta inespecífica desencadenada por el sistema inmunitario innato frente a cualquier estímulo de diversa etiología para defender el organismo, en este caso el de peces, y devolverlo a la homeostasis inicial. La inflamación presenta una serie de síntomas muy característicos y por los que puede ser fácilmente identificable cuyo conjunto recibe el nombre de “Signos cardinales de la inflamación”, y se pueden diferenciar dos tipos de inflamación: i) la inflamación aguda, o respuesta inmediata, la cual puede desarrollarse de forma breve ante la detección del estímulo inicial, y durar días o semanas hasta su final resolución; y ii) la inflamación crónica, producida ante la ineficacia de los mecanismos defensivos para resolver la inflamación aguda y cuyos efectos están altamente relacionados con la aparición de enfermedades crónicas . La inflamación es un evento muy común que ocurre en acuicultura debido a las intensas condiciones de producción a los que son sometidos los peces para cubrir las demandas del mercado. Este escenario hace a los animales más susceptibles a heridas, traumatismos e infecciones por patógenos, lo que podría estar relacionado con la aparición de enfermedades asociadas, que muchas veces se traducen en pérdidas económicas para el propio sector. La inflamación supone un mecanismo esencial para devolver a los peces a su estado inicial de salud, ya que participa de forma directa en la reparación del tejido dañado. No obstante, hasta la fecha no se ha desarrollado ningún modelo inflamatorio en peces que permita profundizar en sus mecanismos de inflamación y salud de manera adecuada. La presente Tesis Doctoral pretende mejorar el conocimiento sobre el proceso de inflamación de la dorada (Sparus aurata), una de las especies de interés en acuicultura más importantes del Mar Mediterráneo. Para alcanzar nuestro objetivo dividimos esta Tesis Doctoral en tres capítulos. En el Capítulo I se evaluaron los efectos sistémicos provocados por una inyección de carragenina. Los peces fueron inyectados intramuscularmente con PBS (control) o carragenina (1%) y tras 1,5, 3 y 6 horas se tomaron muestras de moco de la piel, suero, riñón cefálico e hígado para determinar el estado inmunológico y antioxidante en la dorada. Los resultados evidenciaron que una inyección intramuscular de carragenina al 1% es suficiente para provocar inflamación en los ejemplares, provocando además un aumento de actividades inmunitarias humorales en el moco de la piel a las 3 horas de la inyección. Sin embargo, la inyección de carragenina no tuvo repercusiones en la inmunidad sistémica de la dorada. Además, aunque se observó una disminución de la actividad de la catalasa en el hígado a las 3 y 6 horas después de la inyección, no se detectaron variaciones significativas en la expresión de ninguno de los genes estudiados en el hígado, evidenciando que este órgano no se vio afectado por la inyección de carragenina. El Capítulo II de esta Tesis Doctoral consistió en el estudio de los efectos locales desencadenados por la carragenina en el lugar de la inyección. Así, los animales fueron inyectados intramuscularmente con PBS (control) o carragenina, tomando muestras de piel para el estudio histológico e inmunohistoquímico y para el análisis de la expresión génica a 1,5, 3 y 6 horas después de la inyección. Los resultados evidenciaron un aumento en el número de células mucosecretoras de la piel y de granulocitos acidófilos en la piel a las 1,5 y 3 horas después de la inyección, respectivamente. Considerando los resultados obtenidos, se diseñó otro ensayo donde los peces fueron inyectados intramuscularmente con PBS (control) o con carragenina, y la zona de inyección fue evaluada mediante ecografía en tiempo real y micro-CT a las 1,5, 3, 6, 12 y 24 horas después de la inyección. Los resultados evidenciaron los síntomas típicos de la fascitis necrosante humana (aumento del grosor de la piel, edema y enfisema) en el músculo subyacente de los animales inyectados a las 1,5, 3 y 6 horas, los cuales se redujeron hasta desaparecer a las 12-24 horas de la administración de la carragenina. Esta sintomatología parece deberse a las moléculas liberadas en el sitio de la inflamación y a la posible degradación de la carragenina en dicho lugar, lo que apuntaria en ultimo lugar a las etapas finales de la respuesta inflamatoria. En el Capítulo III de la presente Tesis Doctoral se incluyeron los resultados obtenidos del análisis génico de la respuesta inflamatoria provocada por la carragenina en la dorada. Para ello, la expresión de 40 genes relacionados con la inflamación se evaluó in vivo en dos ensayos que se llevaron a cabo por separado. En el primer experimento, los especímenes de dorada fueron inyectados con PBS (control) o carragenina por vía intramuscular, y después de 1,5, 3 y 6 horas se recolectaron las muestras de piel del área inyectada y se procesaron para evaluar la expresión génica. En el segundo ensayo se replicó el mismo diseño experimental, pero aumentando el tiempo de muestreo a 12 y 24 horas. El incremento de marcadores celulares y la expresión de genes pro-inflamatorios, así como la disminución de genes anti-inflamatorios en el intervalo de 1,5 a 6 horas después de la inyección, indicaron la duración de la inducción de la respuesta inflamatoria provocada por la carragenina. No obstante, los resultados obtenidos a las 12 y 24 horas después de la inyección parecieron indicar la activación de mecanismos necesarios para terminar la respuesta inflamatoria inducida por la carragenina, restaurando la homeostasis de la piel. Estos resultados fueron respaldados por un ensayo in silico en el que se estudió la conservación filogenética de las 40 moléculas previamente estudiadas por expresión génica a partir de secuencias de proteínas de dorada en comparación con otras secuencias proteicas de teleósteos, presentando las proteínas de la corvina amarilla (Larimichthys crocea L.) los mayores porcentajes de identidad con las secuencias proteicas de la dorada. Además, las proteínas de la inflamación más conservadas fueron aquellas implicadas en su regulación, hecho que apoya la hipótesis de que los mecanismos génicos reguladores podrían activarse 24 horas después de la inyección de la carragenina para controlar la respuesta inflamatoria. Finalmente, todos los hallazgos de esta Tesis Doctoral evidencian que una sola inyección de carragenina al 1% puede ser utilizada para desencadenar una inflamación local en doradas, lo que constituye un modelo para continuar estudiando este proceso, tanto en la salud como en la enfermedad en esta especie.

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