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    Caracterización molecular y prevalencia de las variantes genéticas en BRCA1/2 en el síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario en la Región
    (2014-11-11) Gabaldó Barrios, Xavier; Alonso Romero, José Luis; Ruiz Espejo, Francisco; Sarabia Meseguer, María Desamparados; Facultad de Medicina
    PALABRAS CLAVE: BRCA1, BRCA2, BRCAX, Síndrome de Cáncer de Mama y Ovario Hereditario, variante patogénica, variante de significado clínico desconocido, variante de efecto fundador. RESUMEN: El cáncer de mama es la principal causa de mortalidad por cáncer en las mujeres en todo el mundo, con una estimación de 1,68 millones de nuevos casos y más de 521.000 muertes sólo en 2012. Las mujeres con una historia familiar de cáncer de mama tienen de 1,5 a 3,9 veces más probabilidades de desarrollar cáncer de mama que las mujeres sin antecedentes familiares, en función del número y grado de parentesco de los miembros de la familia afectados. Aunque esta asociación podría surgir a causa del entorno compartido y estilo de vida, también puede ser debido a la susceptibilidad genética heredada. Los genes con mayor penetrancia y prevalencia en el Síndrome de Cáncer de Mama y Ovario Hereditario (CMOH) son BRCA1 y BRCA2, los cuales explican el 20% de este síndrome. Se ha realizado una caracterización molecular y un análisis de prevalencia de las variantes encontradas de BRCA1 y BRCA2 en 396 familias de riesgo de CMOH de la Región de Murcia. Para la secuenciación de exones y zonas colindantes de BRCA1 y BRCA2 hemos empleado el método de modificación de Sanger por secuenciación automática de electroforesis capilar y la pirosecuenciación (Gs Junior 454, Roche Diagnostics). El screening de los reordenamientos genéticos se realizó por tecnología MLPA. Para la comprobación de los reordenamientos detectados utilizamos la tecnología de PCR a tiempo real y para demostrar el efecto fundador de las variantes patogénicas de nueva descripción con más de una familia no relacionada se realizó análisis de microsatélites. El 17,7% de las familias es portadora de alguna variante patogénica en BRCA1/2 y el 11,49% fueron variantes de significado clínico desconocido. Siete variantes patogénicas fueron de nueva descripción, de las cuales c.1918C>T (BRCA1) proviene de un ancestro común en nuestra Región. Se han identificado variantes de efecto clínico desconocido de mayor probabilidad patógena según estudios in silico. Las variantes de efecto clínico desconocido missense de mayor probabilidad patógena han resultado ser c.946A>G (BRCA1), c.3032C>G (BRCA2), c.7559G>T (BRCA2) y c.9875C>T (BRCA2); mientras que las variantes splicing de mayor probabilidad patógena han sido c.68-7T>A (BRCA2), c.7008-14delT (BRCA2) y c.4501+3A>T (BRCA2). Los pacientes portadores de una variante patogénica en BRCA1/2 tienen mayor riesgo de tener un cáncer bilateral de mama y cáncer de mama en varón que en el resto de pacientes BRCAX. Existe asociación entre los pacientes BRCA1+ y los cánceres de mama triple negativo, con mayor presentación del tipo histológico medular. Los cánceres de ovario BRCA1/2+ suelen ser de tipo histológico seroso y existe una mayor prevalencia de este tipo de cáncer en BRCA1 con respecto a BRCA2 en nuestro estudio (33% vs. 16,7%, respectivamente). ABSTRACT: Breast cancer is the leading cause of cancer death in women worldwide, with an estimated 1.68 million new cases and 521,000 deaths in 2012. Women with a family history of breast cancer are 1.5 to 3.9-fold more likely to develop breast cancer than women without a family history, depending on the number and degree of kinship of the affected family members. Although this association could arise because of the shared environment and lifestyle, it can also be due to inherited genetic susceptibility. BRCA1 and BRCA2 are genes with greater penetrance and prevalence in Hereditary Breast and Ovarian Cancer (HBOC), but account 20% of these cancers. In this study we performed a molecular characterization and analysis of prevalence of BRCA1 and BRCA2 mutations in 396 families at risk of HBOC in the Region of Murcia. For sequencing of exons and adjacent areas of BRCA1 and BRCA2 genes, we used the method of modification of Sanger sequencing by automated capillary electrophoresis and pyrosequencing (Junior Gs 454, Roche Diagnostics). The screening of gene rearrangements was performed by MLPA technology. For the verification of detected rearrangements we used real-time PCR and to demonstrate founder effect of novel pathogenic variants with more than one unrelated family, microsatellite analysis was performed. The 17.7% of families are carriers of a pathogenic variant in BRCA1/2 and 11.49% are unknown variants. Seven pathogenic variants were novel, which c.1918C> T (BRCA1) comes from a common ancestor in our region. Have been identified unknown variants of increased pathogenic probability according to in silico tools. Missense variants of unknown clinical effect likely pathogenic were c.946A>G (BRCA1), c.3032C>G (BRCA2), c.7559G>T (BRCA2) and c.9875C>T (BRCA2); while splicing variants likely pathogenic were c.68-7T>A (BRCA2), c.7008-14delT (BRCA2) and c.4501+3A>T (BRCA2). BRCA1/2 carriers are at increased risk of having a bilateral breast cancer and male breast cancer than patients BRCAX. There is an association between BRCA1+ patients and triple negative breast cancers with medullary histological type overpresentation. Ovarian cancer BRCA1/2+ are usually serous histological type and there is a higher prevalence of this type of cancer in BRCA1 regarding BRCA2 (33% versus 16.7%, respectively).
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    Correlación entre la clínica, ecografía, marcadores tumorales y bipsia intraoperatoria y definitiva en tumoraciones ováricas sospechosas de malignidad
    (Universidad de Murcia, 2018-02-12) Muñoz Sánchez, Mª Jezabel; Sánchez Ferrer, María Luisa; Facultad de Medicina
    Para la práctica clínica ginecológica, supone un reto mejorar la precisión del diagnóstico preoperatorio de las tumoraciones ováricas, estableciendo una correcta clasificación entre neoplasias malignas y benignas. Esta distinción es esencial para el óptimo manejo quirúrgico, y para ofrecer a la paciente la mejor opción terapéutica. La ecografía ginecológica es la prueba complementaria más empleada para determinar el grado de sospecha diagnóstica. De forma complementaria, otras pruebas de imagen (TC y/o RMN), marcadores tumorales, la clínica referida, así como factores de riesgo asociados, pueden colaborar para establecer un diagnóstico de sospecha clínico. Sin embargo, en ocasiones, resulta difícil establecer un diagnóstico preoperatorio, y es necesaria la realización de una biopsia intraoperatoria (BIO), la cual, nos proporciona gran información acerca de la naturaleza de la lesión y oferta la posibilidad de tomar decisiones durante el propio acto quirúrgico. OBJETIVOS El principal objetivo de este estudio fue valorar el grado de concordancia de la BIO con la anatomía patológica definitiva en tumoraciones anexiales sospechosas de malignidad. Además, el presente estudio se ha realizado para comprobar la precisión de las diferentes técnicas diagnósticas empleadas preoperatoriamente para la categorización de dichas tumoraciones. MATERIAL Y MÉTODOS Se realizó un estudio retrospectivo, que incluyó 375 pacientes con tumoraciones ováricas sospechosas de malignidad, sometidas a intervención quirúrgica en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) entre los años 2008 y 2016, y en las que se realizó BIO en el propio acto quirúrgico. Se recopilaron datos epidemiológicos, clínicos, ecográficos y de otras pruebas de imagen, bioquímicos y anatomo-patológicos. RESULTADOS La sensibilidad y especificidad global para la BIO fue del 96,3% y del 98,1%, respectivamente. Por grupos, se obtuvo una sensibilidad del 98,1% para las tumoraciones benignas, del 87,5% para las malignas y del 86,1% para las borderline. Únicamente el 9,1% de las BIO no fueron previstas pre-quirúrgicamente, y de ellas, la mayoría obtuvieron un diagnóstico definitivo de benignidad. De las biopsias previstas, el 55,4% resultaron benignas. La sensibilidad del diagnóstico ecográfico fue del 88,4% y la especificidad del 57,8%. La sensibilidad del diagnóstico clínico fue del 87,8% y la especificidad del 56,9%. DISCUSIÓN En nuestro trabajo, la sensibilidad obtenida en la BIO para tumoraciones malignas fue muy similar a la descrita en la bibliografía, sin embargo, la sensibilidad para tumoraciones borderline, así como la especificidad global fue mayor. La mayor frecuencia de discordancias en la BIO, tuvo lugar en los tumores mucinosos, de los cuales el 50% fueron borderline y la mayoría resultaron ser tumoraciones de gran tamaño. La sensibilidad ecográfica obtenida en nuestro estudio fue ligeramente superior a la esperada, sin embargo, la especificidad fue significativamente menor. Pruebas de imagen complementarias asumieron una elevada tasa de falsos positivos, mayor a la hallada en otros estudios. Únicamente el CA 125 y el algoritmo ROMA mostraron una utilidad clínica moderada en pacientes premenopáusicas y en estadios avanzados. El diagnóstico de sospecha clínico mostró una baja especificidad. CONCLUSIONES La biopsia intraoperatoria presentó una utilidad clínica excelente para el diagnóstico de tumoraciones ováricas. Resultó determinante la experiencia de patólogos especializados en patología ginecológica para alcanzar el elevado grado de precisión. La especialización en grandes centros de referencia, como es el nuestro, es de vital importancia para la categorización de tumoraciones anexiales. El diagnóstico ecográfico asumió un elevado porcentaje de diagnósticos erróneos, que resultaron benignos en el diagnóstico definitivo, condicionando un aumento de las biopsias intraoperatorias realizadas. El diagnóstico de sospecha clínico mostró menor precisión que el ecográfico, por lo que los marcadores tumorales y otras pruebas de imagen no mejoraron el rendimiento diagnóstico ecográfico. INTRODUCTION For gynecological clinical practice, it is a challenge to improve the accuracy of preoperative diagnosis of ovarian tumors, establishing a correct classification between malignant and benign neoplasms. This distinction is essential for optimal surgical management, and to offer the patient the best therapeutic option. Gynecological ultrasound is the most commonly used complementary test to determine the degree of diagnostic suspicion. In addition, other imaging tests (CT scan or MRI), tumor markers, referred symptoms, as well as associated risk factors, can collaborate to establish a diagnosis of clinical suspicion. However, it is sometimes difficult to establish a preoperative diagnosis, and it is necessary to perform an intraoperative biopsy (IOB), which gives us great information about the nature of the lesion and offers the possibility of making decisions during the surgical procedure itself. OBJECTIVES The main objective of this study was to assess the degree of concordance of IOB with the definitive pathological anatomy in adnexal tumor suspected of malignancy. In addition, the present study has been performed to verify the accuracy of the different diagnostic techniques used preoperatively for the categorization of such tumors. MATERIAL AND METHODS A retrospective study was carried out, including 375 patients with suspected malignant ovarian tumors who underwent surgery at the Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) between 2008 and 2016, and in whom IOB was performed during the operation. Epidemiological, clinical, ultrasound and other imaging test, biochemical and anatomopathological data were collected. RESULTS The overall sensitivity and specificity for IOB was 96.3% and 98.1%, respectively. By groups, a sensitivity of 98.1% was obtained for benign tumors, 87.5% for malignant tumors and 86.1% for borderline tumors. Only 9.1% of IOB's were not pre-surgically planned, and most of them obtained a definitive diagnosis of benignity. Of the predicted biopsies, 55.4% were benign. The sensitivity of the ultrasound diagnosis was 88.4% and the specificity was 57.8%. The sensitivity of the clinical diagnosis was 87.8% and the specificity was 56.9%. DISCUSSION In our study, the sensitivity obtained in IOB for malignant tumors was very similar to that described in the literature, however, the sensitivity for borderline tumors as well as the overall specificity was greater. The greatest frequency of discordance in IOB occurred in mucinous tumors, of which 50% were borderline and the majority were large tumors. The ultrasound sensitivity obtained in our study was slightly higher than expected, however, the specificity was significantly lower. Complementary imaging tests assumed a high false positive rate, higher than that found in other studies. Only CA 125 and the ROMA (Risk of Ovarian Malignancy Algorithm) showed moderate clinical utility in premenopausal and advanced stage patients. The diagnosis of clinical suspicion showed a low specificity. CONCLUSIONS The intraoperative biopsy presented an excellent clinical utility for the diagnosis of ovarian tumors. The experience of pathologists specialized in gynecological pathology was decisive in reaching the high degree of precision. Specialization in large centers of reference, such as ours, is of vital importance for the categorization of adnexal tumors. The ultrasound diagnosis assumed a high percentage of erroneous diagnoses, which were benign in the definitive diagnosis, conditioning an increase of intraoperative biopsies performed. The diagnosis of clinical suspicion showed less precision than the ultrasound, so that tumor markers and other imaging tests did not improve ultrasound diagnostic performance.
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    Estrés oxidativo en pacientes con síndrome de ovario poliquístico
    (Universidad de Murcia, 2019-07-03) Calzada González, Mireya; López Riquelme, María Natividad; Mendiola Olivares, José Antonio; Noguera Velasco, José Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
    El Síndrome de Ovario Poliquístico (SOP) es una importante causa de irregularidad ovulatoria y menstrual, y de exceso de andrógenos. El desorden afecta al 5-10% de las mujeres en edad reproductiva. Las mujeres con SOP sufren numerosas complicaciones, como obesidad, hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, dislipemia e hipertensión. Estas complicaciones exponen a las pacientes con SOP a un mayor riesgo de diabetes mellitus tipo 2, hígado graso, arteriosclerosis, disfunción vascular y enfermedad cardiovascular La fisiopatología del SOP es desconocida y los cuidados médicos de estas pacientes se han limitado al control de los síntomas y de la infertilidad. Las razones para el incremento del riesgo de ECV en el SOP no se explican del todo. Estudios recientes sugieren que el estrés oxidativo (EO) juega un papel importante en la patogénesis del SOP. Además, se ha hipotetizado que el EO también contribuye al riesgo de ECV en estas pacientes. Numerosos estudios demuestran que los niveles de EO son significativamente más altos en mujeres con SOP. Sin embargo, los resultados no son consistentes cuando el EO es valorado mediante diferentes marcadores oxidativos. La peroxidación lipídica es un mecanismo de daño celular, y es usada como indicador de EO en células y tejidos. Es evaluada frecuentemente en trabajos de investigación y uno de sus productos, los Isoprostanos (IsoP), se considera como gold estándar. El nivel de los IsoP es un marcador de confianza de peroxidación lipídica endógena, y por lo tanto una herramienta útil que refleja el daño y estado oxidativo in vivo. Por todo ello, son considerados el biomarcador más sensible de EO disponible actualmente. Muchas mujeres con SOP no se diagnostican debido a la falta de consenso en los criterios de diagnóstico, y la presencia de varios fenotipos de SOP complica aún más el diagnóstico. Es por estas razones que se necesita una herramienta de diagnóstico estandarizada con una mínima variación interobservador, y así poder realizar un seguimiento del riesgo para la salud a corto y largo plazo. Los objetivos del presente estudio fueron evaluar el EO en grupos de mujeres de la misma edad con y sin SOP, utilizando niveles plasmáticos de diferentes marcadores oxidativos, principalmente 8-isoprostanos (8-IsoP), y evaluarlos como herramientas de diagnóstico para el SOP. Además, se investigó si existe una relación entre los 8-IsoP y un mayor riesgo de ECV en mujeres con SOP. Metodología Este estudio de casos y controles incluyó a 125 pacientes con SOP y a 168 mujeres sanas de las consultas del Servicio de Ginecología, Endocrinología y Esterilidad del Hospital Clínico de la Universidad Virgen de la Arrixaca, Murcia (España) entre junio de 2014 y febrero de 2016. Las participantes fueron reclutadas voluntariamente. El SOP fue diagnosticado de acuerdo con los criterios de la Conferencia de Consenso de Rotterdam por la Sociedad Europea de Reproducción Humana y Embriología y la Sociedad Americana de Medicina Reproductiva. Los sujetos del grupo control fueron voluntarias sanas con ciclos menstruales normales, morfología de ovarios normales y sin características clínicas o bioquímicas de hiperandrogenismo. Los parámetros bioquímicos, hematológicos, hormonales y de EO se midieron en todos los sujetos. Los resultados se analizaron utilizando el software Statistical Package for Social Sciences versión 22.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE. UU.). Conclusiones Nuestro estudio demostró que las pacientes con SOP tienen niveles más altos de marcadores de oxidación y niveles más bajos de antioxidantes que el grupo control, y que este EO es mayor en aquellos fenotipos de SOP con hiperandrogenismo. Este aumento de EO es independiente de la presencia de obesidad, pero se asocia con la presencia de IR y el síndrome metabólico. Las pacientes con SOP que tienen niveles más altos de 8-IsoP tienen niveles más altos de marcadores de riesgo cardiovascular que aquellas con este síndrome, pero con niveles normales de 8-IsoP. El SOP por sí sólo es un factor que predispone al desarrollo de ECV, pero la presencia de EO aumenta este riesgo aún más en estas pacientes. Por esta razón, se ha sugerido que la medición de manera rutinaria de los marcadores de EO puede ser una herramienta precisa para identificar el riesgo cardiovascular en mujeres con SOP y puede ser adoptada e incluida en la práctica clínica. Por último, de los biomarcadores medidos en este estudio, la combinación de MULLE, BILT y 8-ISOP resultó la más útil como herramienta para el diagnóstico de SOP.
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    Estudio multivariante de los factores asociados con la morbilidad postoperatoria y la recurrencia tras citorreducción y quimioterapia intraperitoneal intraoperatoria hipertérmica (HIPEC) en pacientes con carcinomatosis peritoneal por carcinoma de ovario
    (2012-09-14) Cascales Campos, Pedro Antonio; Parrilla Paricio, Pascual; Ramírez Romero, Pablo; Parrilla Paricio, Juan José; Departamentos y Servicios::Departamentos de la UMU::Cirugía, Pediatría y Obstetrica y Ginecología
    La aplicación de terapias novedosas en el ámbito de la oncología ha permitido mejorar la esperanza de vida en patologías antes consideradas como intratables. Un ejemplo de ello es el abordaje multidisciplinar de la diseminación peritoneal de tumores digestivos y ginecológicos, con la aplicación de cirugías extensas con procedimientos de peritonectomía y la administración de quimioterapia intraperitoneal intraoperatoria hipertérmica (HIPEC). En la presente tesis doctoral se exponen los resultados obtenidos tras la aplicación de dicho esquema terapéutico en pacientes con carcinomatosis peritoneal de origen ovárico, primario y recurrente, explorando los factores que se relacionaron con la morbilidad y las recurrencias en el grupo de pacientes estudiadas. Estos resultados permiten concluir que la terapia es aplicable con una morbilidad postoperatoria controlada y genera unos resultados de supervivencia esperanzadores a la espera de los estudios prospectivos y aleatorizados que se desarrollan en la actualidad.The use of novel therapies in oncology has improved life expectancy in diseases previously considered untreatable. An example of this is the multidisciplinary approach to the peritoneal dissemination of gastrointestinal and gynecological tumors, with the application of extensive surgery with peritonectomy procedures and administration of hyperthermic intraoperative intraperitoneal chemotherapy (HIPEC). In this thesis we presents the results obtained after the treatment with this therapeutic scheme of patients with peritoneal carcinomatosis of primary and recurrent ovarian cancer, analizing the factors associated with morbidity and recurrences in the group of patients studied. These results suggest that HIPEC therapy can be applied with a controlled postoperative morbidity rates and generates encouraging survival results until the results of prospective randomized studies which are developing in ovarian cancer
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    Impacto de la citorreducción con procedimientos de peritonectomía y administración de HIPEC en los resultados del tratamiento del cáncer de ovario primario estadios IIC/IV
    (2014-12-15) Gil Gómez, Elena; Cascales Campos, Pedro Antonio; Gil Martínez, José; Nieto Díaz, Aníbal; Facultad de Medicina
    El cáncer de ovario es la séptima causa de muerte por cáncer en la mujer, supone la tercera neoplasia ginecológica más común y es la segunda causa de muerte entre las mujeres con cáncer ginecológico. Al diagnóstico, la diseminación tumoral macroscópica en la cavidad peritoneal se presenta en más del 60-80% de los casos y el grado de citorreducción obtenida al final de la cirugía es considerado como el principal factor pronóstico en estas pacientes. Uno de los avances mas importantes en el campo de la oncología quirúrgica peritoneal ha sido el añadir a la citorreducción quirúrgica de máximo esfuerzo la administración de quimioterapia intraperitoneal intraoperatoria hipertérmica (HIPEC). A priori, la utilización de HIPEC tiene un objetivo bien definido: el tratamiento de la enfermedad tumoral microscópica en el mismo momento de la intervención quirúrgica, antes de la formación de adherencias, contra la que el cirujano no puede actuar, mediante medidas físicas (calor) y químicas (citostáticos). A pesar de que en los últimos años existe un creciente interés por la utilización de HIPEC en pacientes con carcinomatosis peritoneal por cáncer de ovario avanzado, no existe en la actualidad ningún estudio prospectivo y randomizado que demuestre que su uso, tras una citorreducción óptima, sea superior al no hacerlo en esta indicación y los trabajos publicados ofrecen una gran heterogeneidad en cuanto a los esquemas utilizados durante la HIPEC, además, no hay en la literatura estudios que evalué el impacto que el inicio de un programa de cirugía oncológica peritoneal ha tenido sobre los resultados de una primera cirugía del cáncer de ovario en estadios IIIC/IV. Los resultados de esta tesis doctoral han mostrado que la implantación de un programa de cirugía oncológica peritoneal, que incluye además de la citorreducción quirúrgica extensa, la utilización de HIPEC, ha prolongado la supervivencia libre de enfermedad en pacientes con carcinoma de ovario avanzado (estadios IIIC/IV) sometidos a una primera cirugía radical. Sin embargo en el subgrupo de pacientes con citorreducciones completas, este beneficio sobre la supervivencia libre de enfermedad no se demostró en pacientes con tumores indiferenciados, lo que puede poner de manifiesto la importancia de la biología tumoral como un potencial limitante de esta terapia intraperitoneal en este tipo de pacientes. SUMMARY OF THE THESIS Ovarian cancer is the seventh leading cause of cancer death in women, the third most common gynecologic malignancy and the second leading cause of death among women with gynecological cancer. At diagnosis, macroscopic tumor spread in the peritoneal cavity is presented in more than 60-80% of cases and the degree of cytoreduction obtained at the end of debulking surgery is considered the main prognostic factor in these patients. One of the most important advances in the field of peritoneal surgical oncology has been to add to the maximum effort debulking, intraoperative hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC). A priori, the use of HIPEC has a clear objective: the treatment of microscopic tumor disease at the time of surgery, before the formation of adhesions, against which the surgeon cannot act, by physical (heat) and chemical (cytostatic) measures. Although there is growing interest in the use of HIPEC in patients with peritoneal carcinomatosis from advanced ovarian cancer in recent years, there is currently no prospective randomized study demonstrating its use after optimal cytoreduction has better outcomes than not to perform this measure of treatment, and published studies offer a great heterogeneity in chemotherapy regimens used during HIPEC. Also no studies in the literature evaluate the impact that the initiation of a program of peritoneal cancer surgery has on the results of a first surgery for stage IIIC/IV ovarian cancer. The results of this thesis have shown that the implementation of a program of peritoneal cancer surgery, which also includes extensive surgical debulking and the use of HIPEC, has prolonged disease-free survival in patients with advanced ovarian carcinomas (stages IIIC / IV) who underwent a first radical surgery. However, in the subgroup of patients with complete cytoreductions, this benefit on disease-free survival was not demonstrated in patients with undifferentiated tumors, which may reveal the importance of tumor biology as a potential limitation of this intraperitoneal therapy in this type of patients.
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    Impacto pronóstico de las mutaciones de BRCA1 y BRCA2 en el cáncer de ovario hereditario
    (Universidad de Murcia, 2018-10-23) Sánchez Henarejo, Pilar; Alonso Romero, José Luis; Escuela Internacional de Doctorado
    Introducción: Se estima que entre un 10-15% de los carcinomas epiteliales de ovario aparecen en mujeres con susceptibilidad genética. El 80% de los casos se asocian a mutaciones en los genes BRCA1 y BRCA2. El resto se deben a mutaciones en genes mismatch repair (MMR), genes implicados en la vía de la recombinación homóloga y TP53. Las características clínico-patológicas del cáncer de ovario varían en función de la mutación genética subyacente. En lo que respecta al pronóstico, los carcinomas asociados a mutaciones en BRCA1 y BRCA2 parecen presentar un curso clínico más favorable con mayores tasas de supervivencia, aunque los datos no son homogéneos. Objetivos: Comparar la supervivencia global (SG), supervivencia libre de progresión (SLP) e intervalo libre de platino (ILP) de las pacientes diagnosticadas de cáncer de ovario portadoras de mutaciones patogénicas en BRCA1/BRCA2 respecto a un grupo de pacientes diagnosticadas de carcinoma esporádico. Material y Métodos: Hemos realizado un estudio de cohortes retrospectivo que incluyó a todas las pacientes diagnosticadas de cáncer de ovario portadoras de mutaciones en BRCA1/BRCA2 valoradas entre Enero de 2008 y Enero de 2016 en las Unidades de Consejo Genético de la Región de Murcia. La evolución de esta cohorte se comparó con la de otra formada por pacientes con carcinoma de ovario sin criterios de estudio genético. También hemos evaluado la repercusión sobre el pronóstico de las diferentes categorías resultantes del estudio genético (pacientes portadoras de mutaciones en BRCA, portadoras de mutaciones en genes MMR, pacientes con estudio genético no informativo). Resultados: Las pacientes portadoras de mutaciones germinales en BRCA1 y BRCA2 presentan mejor pronóstico en términos de SLP y SG con respecto a las pacientes con carcinoma de ovario esporádico. En el análisis multivariante las únicas variables que influyeron tanto sobre la SLP como sobre la SG fueron la presencia de mutaciones en BRCA1 y BRCA2 y la sensibilidad a platino. La alteración de los mecanismos implicados en la recombinación homóloga que presentan las células deficientes en BRCA1 y BRCA2 explicaría por qué estos carcinomas son más sensibles al tratamiento con sales de platino y ello se traduciría en una supervivencia más prolongada. El pronóstico de las pacientes con criterios de síndrome hereditario que presentaron un test no informativo fue similar en términos de SLP y SG al de pacientes portadoras. Estas pacientes además presentaron ILP significativamente más prolongados que las pacientes con carcinomas esporádicos, lo que sugiere que podrían presentar alteraciones somáticas o germinales en otros genes relacionados con la vía de la recombinación homóloga. Conclusiones: Los carcinomas de ovario asociados a mutaciones en BRCA1 y BRCA2 tienen una supervivencia significativamente más prolongada que los carcinomas esporádicos. El diagnóstico genético de las pacientes con carcinoma de ovario podría ayudar a predecir la evolución y seleccionar la estrategia de tratamiento más adecuada. Introduction: Genetic mutations are estimated to cause 10-15% of epithelial ovarian cancers. As many as 80% of cases of epithelial ovarian cancer are associated with mutations in the genes BRCA1 and BRCA2. The remaining 20% are caused by mutations in mismatch repair (MMR) genes, other genes involved in homologous recombination and TP53. The clinical characteristics of ovarian cancer are related to the underlying genetic mutation. Prognosis of ovarian cancers associated to BRCA 1 or BRCA2 mutations is supposed to be more favorable, although data are not homogeneous. Objectives: Assessing overall survival (OS), progression-free survival (PFS) and platinum-free interval (PFI) in ovarian cancer patients with pathogenic mutations in BRCA1/2, as compared to patients with sporadic cancer. Materials and Methods: A retrospective cohort study was performed. The sample was composed of all ovarian cancer patients with mutations in BRCA1/BRCA2 examined in the Genetic Counseling Units of Murcia, Spain, between January 2008 and January 2016. The evolution of this cohort was compared with that of patients with ovarian cancer not meeting the indications for a genetic test. Based on genetic test results, patients were classified as "carriers of BRCA mutations", "carriers of MMR mutations", and "patients with uninformative test results". Then, we investigated the potential relationship between these mutations and prognosis. Results: Carriers of germline mutations in BRCA1/2 had a more favorable prognosis in terms of OS and PFS, as compared to patients with sporadic cancer. Multivariate analysis revealed that mutations in BRCA1/2 and platinum sensitivity were the only factors with significant effects on both OS and PFS. The alterations in homologous recombination mechanisms exhibited by BRCA1/BRCA2-mutated cells may explain BRCA1/2-mutation carriers' higher sensitivity to platinum-based chemotherapy, which results in higher survival rates. The prognosis of patients who met criteria of hereditary ovarian cancer syndrome with uninformative test results was similar to that of BRCA-mutation carriers in terms of OS and PFS. In addition, PFI was significantly higher in these patients, as compared to that of patients with sporadic cancer. This suggests that these patients might carry somatic or germline mutations in genes other than BRCA1/2 involved in the homologous recombination pathway. Conclusions: Survival was significantly higher in ovarian cancer patients with BRCA1/2 mutations, compared to patients with sporadic ovarian cancer. Diagnosis of ovarian cancer based on genetic criteria may have prognostic value and could guide the choice of the best treatment for each patient.
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    El mecanismo de efecto y regulación de CircHIAT1 sobre el síndrome de ovario poliquístico (SOP)
    (Universidad de Murcia, 2019-06-11) Wang, Tianjuan; Sánchez Ferrer, María Luisa; Cao, Yunxia; Escuela Internacional de Doctorado
    Parte I: Expresión diferencial del circRNA en el síndrome de ovario poliquístico (SOP) Resumen Objetivo: Se ha encontrado que el ARN circular (ARNrc) desempeña un papel importante en muchas enfermedades, sin embargo, ha habido una investigación limitada centrada en el ARNcc en la enfermedad del SOP. Por lo tanto, intentamos detectar la expresión de circRNAs en el cumulus oophorus (CO) de pacientes con PCOS mediante secuenciación de alto rendimiento, para explorar el papel y el posible mecanismo de circRNAs en la patogénesis de PCOS. Métodos: Los CO de pacientes de FIV / ICSI se recolectaron al azar. Seleccionamos 3 pares de muestras para secuenciación de alto rendimiento. Se seleccionaron 14 circRNA expresados diferencialmente para la validación clínica en CO. Resultados: Se detectaron un total de 55,776 circRNAs expresados diferencialmente. En comparación con el grupo de control, 7,047 circRNAs fueron significativamente regulados por incremento y 48,729 fueron significativamente regulados por disminución en el grupo de SOP. El análisis GO mostró que los circRNA podrían ser activos en el metabolismo celular, la regulación biológica y la catálisis activa del SOP. El análisis de la ruta KEGG indicó que los circRNA podrían participar en la transducción de señales, el transporte de sustancias y el catabolismo, la endocitosis y la vía de proteólisis mediada por ubiquitina. En pacientes con SOP, la expresión de circ_0011693, circ_0042454, circ_0001365, circ_0006252 y circ_0003737 fue significativamente mayor y la expresión de circHIAT1 fue significativamente menor. Conclusiones: El estudio encontró los perfiles de expresión diferencial de circRNA en SOP por primera vez. El análisis bioinformático mostró que los circRNA expresados diferencialmente podrían participar en múltiples vías relacionadas con las enfermedades de SOP. Por lo tanto, el efecto y la regulación de circRNA en SOP merecen un estudio más a fondoParte II: Los efectos de CircHIAT1 sobre la esteroidogénesis en el síndrome de ovario poliquístico mediante esponja de miR-195-5p Objetivo: Nuestra hipótesis es que circHIAT1 podría regular la función de los CO esponjando miR-195-5p, participando así en la regulación del SOP. Métodos: El estudio detectó la co-localización de circHIAT1 y miR-195-5p en CO por RNA-FISH. Se utilizaron qRT-PCR y Western Blot para detectar los efectos de circHIAT1 en AR, CYP19A, GATA4 y VEGF en la línea celular KGN pretratada con DHT. Se utilizó FACS para detectar el ciclo celular. La relación de direccionamiento de circHIAT1 / miR-195-5p y miR-195-5p / CCNE1 se detectó mediante un ensayo de indicador de luciferasa dual. Se detectó la expresión de miR-195-5p y CCNE1 en muestras clínicas. Se verificaron los efectos de miR-195-5p y CCNE1 en AR, CYP19A, GATA4, VEGF y ciclo celular. Resultados: circHIAT1 y miR-195-5p se localizaron en el citoplasma de CO primarias y células KGN. El silenciamiento circHIAT1 podría aumentar significativamente los niveles de AR, CYP19A, GATA4 y VEGF, y conducir a la disminución de la viabilidad celular en las células KGN. circHIAT1 podría unirse a miR-195-5p. miR-195-5p se encontró altamente expresado en COs de pacientes con SOP. La sobreexpresión de miR-195-5p podría aumentar significativamente los niveles de AR, CYP19A, GATA4 y VEGF en células KGN, y dio como resultado una disminución significativa de la viabilidad celular. miR-195-5p podría unirse a CCNE1. El nivel de expresión de CCNE1 en el grupo de SOP fue significativamente menor. Conclusión: el silenciamiento de circHIAT1 podría aumentar significativamente los indicadores relacionados con la esteroidogénesis, inhibir el ciclo celular de las células KGN. Por lo tanto, circHIAT1 podría utilizarse como un nuevo objetivo para el diagnóstico y tratamiento del SOP
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    Prevalencia y análisis mutacional de los genes RAD51C y rad51D en familias con síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario no asociado a BRCA1 y/o BRCA2 de la Región de Murcia
    (2016-07-11) Sánchez Bermúdez, Ana Isabel; Alonso Romero, José Luis; Ruiz Espejo, Francisco; Sarabia Meseguer, María Desamparados; Escuela Internacional de Doctorado
    El objetivo general es evaluar el rendimiento diagnóstico del estudio genético realizado en pacientes de la Región de Murcia con criterios de cáncer de mama y ovario hereditario referidos desde la Unidad de Consejo Genético del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca y del Hospital Morales Meseguer durante los años 2006 y 2015. La presente tesis doctoral comprende un análisis del rendimiento diagnóstico del test genético BRCA y un estudio de prevalencia y análisis mutacional de los genes RAD51C y RAD51D en las familias que no se haya encontrado ninguna variante en BRCA1 y BRCA2 asociada con el aumento de riesgo para cáncer de mama y/o cáncer de ovario. El test genético se realizó mediante secuenciación Sanger y la técnica de MLPA. Finalmente se realizaron estudios de asociación entre los resultados genéticos y el fenotipo de los casos índice y la historia familiar. Las principales conclusiones obtenidas fueron: 1) El 16,5% de la población de este estudio fue portadora de alguna variante patogénica en BRCA1/2. Con la aplicación de los nuevos criterios de selección desarollados por la SEOM, la tasa de detección aumentó hasta el 20,1%. Los resultados obtenidos justifican la implementación de estos nuevos criterios al Programa de Consejo Genético en cáncer de mama y ovario hereditario. 2) El criterio propuesto por la SEOM que selecciona los tumores de mama diagnosticados a edades avanzadas con receptores hormonales negativos (CMTN<50) obtuvo una tasa de detección de un 16% . El rendimiento del test genético de BRCA en los casos con cáncer de ovario de alto grado sin antecedentes familiares destacados (COHG) fue de un 29%. Estos rendimientos justifican su incorporación como criterios de selección en el síndrome de cáncer de mama y ovario hereditario. 3) El 0,7% de los casos estudiados fueron portadores de alguna variante patogénica en RAD51C, teniendo en cuenta el fenotipo familiar, la prevalencia mutacional de RAD51C en familias con cáncer de mama y ovario fue de un 1,5%. Con respecto a RAD51D, el 1,2% de las familias estudiadas fueron portadoras de variantes patogénicas, siendo la prevalencia mutacional en familias con cáncer de ovario de un 6,25%. Los datos obtenidos en la población de estudio estuvieron en concordancia a lo descrito en la bibliografía. 4) La variante c.404C>T de RAD51C se asoció a cáncer de mama y ovario en la misma paciente a edad avanzada. Sin embargo, la variante c.694C>T (p.Arg232X) de RAD51D se asoció a familias con fenotipo exclusivamente de cáncer de ovario diagnosticado a edades tempranas. 5) Según los datos obtenidos es recomendable la inclusión de los genes RAD51C y RAD51D en el diseño de un panel de genes con el cual poder ampliar el estudio genético de BRCA1/2 en las familias BRCAX con gran agregación familiar, casos de cáncer de ovario o casos de cáncer de mama bilateral. The overall objective is to evaluate the diagnostic yield of the genetic study of patients in the Region of Murcia with criteria of hereditary breast and ovarian cancer referred from the Unit of Genetic Counseling University Hospital Virgen de la Arrixaca and Morales Meseguer Hospital since 2006 to 2015. This thesis comprises an analysis of the diagnostic yield of BRCA genetic test and a study of prevalence and mutational analysis of genes RAD51C and RAD51D, in families in which no variants associated with increased risk for breast and/or ovarian cancer in BRCA1 and BRCA2 genes had been found. The genetic test was performed using Sanger sequencing and MLPA technique. Finally, association studies between genetic results and phenotype of the index cases and family history were performed. The main conclusions were: 1) 16,5% of the population that took part in the study was carrier of some pathogenic variant in BRCA1/2. With the implementation of the new selection criteria developed by the SEOM, the detection rate increased to 20,1%. The results justify the implementation of these new criteria Genetic Counseling Program in hereditary breast and ovarian breast cancer. 2) The proposed criteria by the SEOM that selects breast tumors diagnosed at older ages with negative hormone receptors (TNBC <50) had a detection rate of 16%. The genetic yield of BRCA gene in patients with ovarian cancer without remarkable high degree family history (COHG) was 29%. This fact justifies their inclusion as selection criteria in the hereditary breast and ovarian cancer syndrome. 3) Carriers of a pathogenic variant in RAD51C were 0,.7% of all the cases studied, considering the phenotype family, RAD51C mutational prevalence in families with breast and ovarian cancer was 1,5%. Regarding RAD51D, 1,2% of the families studied were carriers of pathogenic variants, with the mutational prevalence in families with ovarian cancer of 6,25%. The data obtained in the study population were in agreement as described in the literature. 4) The c.404C> T variant RAD51C was associated with breast and ovarian cancer in the same patient elderly. However, variant c.694C> T (p.Arg232X) of RAD51D associated phenotype exclusively to families with ovarian cancer diagnosed at an early age. 5) According to data obtained, it is recommended to include RAD51C and RAD51D genes in the design of a panel of genes to expand the genetic study of BRCA1/2 families BRCAX with great familial aggregation, cases of ovarian cancer or cases of bilateral breast cancer.
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    Valor predictivo y pronóstico de la determinación de células tumorales y ADN libre circulantes en plasma en carcinoma epitelial de ovario en estadio avanzado
    (Universidad de Murcia, 2017-11-17) Martínez García, Jerónimo Jerónimo.; José Luis Alonso Romero, José Luis; Minguela Puras, Alfredo; Cascales Campos, Pedro Antonio; Facultades, Departamentos, Servicios y Escuelas::Facultades de la UMU::Facultad de Medicina
    Valor predictivo y pronóstico de la determinación de células tumorales y ADN libre circulantes en plasma en carcinoma epitelial de ovario en estadio avanzado En los últimos años ha habido un creciente interés en el estudio de células tumorales circulantes (CTC) y ADN libre circulante (cfDNA) como nuevos biomarcadores en las enfermedades neoplásicas. Nuestro trabajo pretende aclarar su papel clínico en carcinoma epitelial de ovario (CEO).