Browsing by Subject "Muerte súbita"
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- PublicationRestrictedA Novel Founder Mutation in MYBPC3: Phenotypic Comparison With the Most Prevalent MYBPC3 Mutation in Spain.(Elsevier, 2016-10-28) Saura, Daniel; García Molina Sáez, Esperanza; González Carrillo, Josefa; Polo, Luis; Pérez Sánchez, Inmaculada; Olmo, María Carmen; Oliva Sandoval, María José; Barriales Villa, Roberto; Carbonell, Pablo; Pascual Figal, Domingo A.; Gimeno, Juan Ramón; Sabater Molina, María; Ciencias SociosanitariasIntroducción y objetivos: Las mutaciones en MYBPC3 son causa de miocardiopatía hipertrófica (MCH). A pesar de que la mayorı´a de ellas producen una proteína truncada, la gravedad del fenotipo es diversa. Se describe el fenotipo clínico de una nueva mutación en MYBPC3, p.Pro108Alafs*9, presente en 13 familias del sur de España, y se compara con la mutación de MYBPC3 con mayor prevalencia en dicha región (c.2308 + 1 G > A). Métodos: Se estudió a 107 familiares de 13 casos índice que tenían diagnóstico de MCH y portaban la mutación p.Pro108Alafs*9. Se realizó un anélisis del árbol genealógico, junto con una evaluación clínica y determinación del genotipo. Resultados: Se identificó en total a 54 portadores de la mutación p.Pro108Alafs*9, de los que 39 tenían MCH. Hubo 5 casos de muerte súbita en las 13 familias. La penetrancia de la enfermedad aumentaba a medida que se incrementaba la edad, y los pacientes con MCH fueron con más frecuencia varones, y estos contrajeron la enfermedad más precozmente que las mujeres. El fenotipo fue similar en la p.Pro108Alafs*9 y la c.2308 + 1 G > A, pero se observaron diferencias en varios factores de riesgo y en la supervivencia. Hubo tendencia a mayor masa ventricular izquierda en la p.Pro108Alafs*9 que en la c.2308 + 1G > A. La resonancia magnética cardiaca reveló una extensión y un patrón de fibrosis similares en ambas. Conclusiones: La mutación p.Pro108Alafs*9 se asoció a MCH, alta penetrancia y aparición de la enfermedad a mediana edad.
- PublicationOpen AccessEstudio de la patogenicidad de las variantes genéticas desmosómicas en las miocardiopatías y la muerte súbita(Universidad de Murcia, 2018-02-05) Gómez Milanés, Iván; Gimeno Blanes, Juan Ramón; Sabater Molina, María; Facultad de MedicinaEste estudio trata de evaular la correlación entre la patogenicidad de las alteraciones genéticas encontradas en la población de estudio y el desarrollo de la enfermedad de los individuos (afectados de Miocardiopatía Arritmogénica de Ventrículo Derecho, Miocardiopatía Dilatada o Síndrome de la Muerte Súbita Arrítmica). Para esto realizamos el análisis por secuenciación de los genes DSP, PKP2, DSG2, DSC2, JUP, PLN y LMNA ya que determinados cambios en la secuencia aminoacídica de estos se asocia a perfiles fenotípicos y pronósticos específicos. Hemos realizado además un estudio in silico mediante software predictores para ayudarnos a valorar la patogenicidad de las variantes encontradas. En determinado número de casos, el resultado obtenido por secuenciación coincide con la predicción de los softwares, pero hay ocasiones que se han obtenido resultados contradictorios dificultando de esta manera un diagnóstico genético claro. Sin embargo, hay ocasiones en las que en mediante el estudio por secuenciación no se detecta ninguna mutación causante de enfermedad. En estos casos hemos utilizado la técnica del MLPA buscado grandes inserciones y/o deleciones en aquellos pacientes con sospecha de causa genética de patología pero con estudio de secuenciación negativo. Ocurre esto con una de las familias incluidas en el estudio; tras no encontrar la causa genética de la patología por secuenciación directa, sometimos las muestras a MLPA y encontramos una gran deleción en el exón 8 del gen PKP2. Debido a que en ocasiones, familias no emparentadas a priori, son portadoras de una misma mutación, realizamos el análisis de haplotipos con marcadores microsatélites para buscar un efecto fundador y conocer el número de generaciones que han transcurrido desde que se originó la mutación. En nuestro caso, 3 familias no emparentadas, han resultado tener un antecesor común como origen de la mutación que afecta a las tres. This study attempts to evaulate the correlation between the pathogenicity of the genetic alterations found in the study population and the development of the disease of the individuals (affected with Arrhythmogenic Right Ventricular Myocardiopathy, Dilated Cardiomyopathy or Arrhythmic Sudden Death Syndrome). For this we performed the sequencing analysis of the DSP, PKP2, DSG2, DSC2, JUP, PLN and LMNA genes since certain changes in the amino acid sequence of these genes are associated with phenotypic profiles and specific prognoses. We have also performed an in silico study using software predictors to help us evaluate the pathogenicity of the variants found. In a number of cases, the result obtained by sequencing coincides with the prediction of the software, but there are occasions that contradictory results have been obtained, making it difficult to obtain a clear genetic diagnosis. However, there are occasions we can´t find a disease-causing mutation by sequencing. In these cases we have used the MLPA technique for large insertions and / or deletions in those patients with suspected genetic cause of pathology but with a negative sequencing study. This occurs with one of the families included in the study; After not finding the genetic cause of the pathology by direct sequencing, we submitted the samples to MLPA and found a large deletion in exon 8 of the PKP2 gene. Because sometimes unrelated families are carriers of the same mutation, we performed the analysis of haplotypes with microsatellite markers to find a founding effect and to know the number of generations that have elapsed since the origin of the mutation. In our case, 3 unrelated families have been found to have a common ancestor as the origin of the mutation that affects all three
- PublicationOpen AccessEstudio genético de muerte súbita en la Región de Murcia(2015-09-03) Pérez Ruescas, Caricia; Gimeno Blanes, Juan Ramón; Ruiz Espejo, Francisco; Escuela Internacional de DoctoradoObjetivos 1) Estudiar las causas de MS no isquémica en la Región de Murcia. 2) Describir desde el punto de vista histopatológico los casos de MS con sospecha o evidencia de miocardiopatía. 3) Evaluar el funcionamiento de un protocolo de estudio patológico, genético y familiar de los casos de MS no isquémica. 4) Identificar las alteraciones genéticas asociadas a las causas de MS con sospecha de cardiopatía hereditaria. 5) Estudiar mediante el uso de herramientas bioinformáticas la causalidad de las variantes encontradas y estimar su patogenicidad, mediante la relación entre el tipo de variante y las manifestaciones clínicas (correlación genotipo-fenotipo). 6) Estudiar la segregación de la enfermedad con el genotipo y su penetrancia a partir del estudio de familiares de primer grado de los afectados. Metodología 1. Autopsia Se realizó un estudio necrópsico completo con disección reglada del corazón por especialistas del IMLRM. Se procedió a la recogida, conservación y almacenamiento de muestras sanguíneas (2 tubos EDTA, 4 ml), para la realización del estudio molecular, dichas muestras de sangre fueron tratadas, siguiendo procedimiento habitual para purificación y amplificación del DNA. 2. Estudio familiar Se trazaron árboles familiares de forma detallada. Se realizó un estudio clínico completo, en función de cada caso. Se interrogó acerca de la edad y las causas de los fallecimientos y se recogió la historia médica, en los casos en que esta información estaba disponible. 3. Análisis estadístico Se creó una base de datos específica para el estudio. Se empleó el programa estadístico SPPS (versión 15.0) para el análisis de resultados. 4. Estudio molecular Miocardiopatías Genes estudiados MCH MYBPC3, MYH7 HIVI MYBPC3, MYH7 MAVD PKP2, DSP, DSG2 MCD LMNA Dilatada/Espongiforme MYBPC3, MYH7, LMNA, Cypher/ZASP Canalopatías Genes estudiados SQTL SCN5A, KCNQ1, KCNH2 SB SCN5A SQTC KCNQ1, KCNH2 Tabla 1. Resumen de los genes estudiados por secuenciación directa. a) Extracción del ADN genómico b) Amplificación y purificación del ADN genómico c) Secuenciación automática directa d) Next generation secuencing e) Análisis bioinformático de las variantes encontradas f) Análisis bioinformático de las nuevas variantes identificadas: Estudios In silico Conclusiones 1) La incidencia media de casos de MS relacionados con cardiopatías hereditarias, estimada en la Región de Murcia, fue de 14 personas/año con una media de edad al diagnóstico de 36,0±19,6 años. 2) Existe un claro predominio del sexo varón en todos los casos de MS de nuestra población, destacando la asociación significativa en el grupo de las MCP. 3) El estudio histológico o la evaluación cardiológica exhaustiva, permitieron obtener un rendimiento diagnóstico en el 60,9% de los casos, siendo la MCH la causa de MS más común en nuestro medio. 4) Mediante el estudio molecular dirigido de en los 50 casos de MS, con sospecha o evidencia de cardiopatía hereditaria, se ha conseguido un rendimiento global del diagnóstico genético positivo del 10,0%. 5) Tras el análisis con herramientas in silico, la consulta en la literatura científica y el estudio de la relación genotipo-fenotipo, se ha considerado que el 30,0% de los casos portaba al menos una variante de significado clínico incierto, se han identificado entre ellas, variantes missense de mayor probabilidad patógena. 6) Como estrategia diagnóstica, el análisis molecular contribuyó a aumentar el rendimiento diagnóstico positivo; de los familiares estudiados clínica y genéticamente, el 27,5% era portador de al menos una de las mutaciones identificadas como causantes o probablemente causante de la enfermedad, el 16,0% estaba afectado clínicamente y el 10,3% no lo estaba. 7) La creación de un grupo multidisciplinar que integra patólogos, cardiólogos y biólogos moleculares, ha permitido profundizar en las causas de MS en la Región de Murcia ABSTRACT Objectives 1) To study the causes of nonischemic sudden death in Murcia. 2) To describe from a histopathological point of view, cases of sudden death with evidence or suspected of cardiomyopathy. 3) To evaluate the performance of an organized pathological, genetic and family study of cases of nonischemic sudden death 4) To identify genetic alterations associated with the causes of sudden death with suspected hereditary disease. 5) To study the causality of the variants found, by bioinformatics tools and estimate its pathogenicity by the relationship between type of variation and clinical manifestations (genotype-phenotype correlation). 6) To study the segregation of the disease with genotype and its penetrance from of first-degree relatives of those affected. Methods 1. Autopsy A full necropsy with formal dissection of the heart was performed by specialists of the Institute of Legal Medicine of the Region of Murcia (IMLRM). To realize molecular studies, we proceeded to the collection, preservation and storage of blood samples (2 EDTA tubes, 4 ml), these blood samples were treated, following routine purification and DNA amplification procedure. 2. Family Study Family pedigrees were outlined in detail from the questioning of patients and families. A complete clinical study was made, depending on each case. Families were questioned about the age and cause of death and medical history was collected, in cases where this information was available. 3. Statistical Analysis Specific data base was created for the study. SPPS statistical software (version 15.0) was used for the analysis of results. 4. Molecular study Cardiomyopathy Studied Genes MCH MYBPC3, MYH7 HIVI MYBPC3, MYH7 MAVD PKP2, DSP, DSG2 MCD LMNA Dilatada/Espongiforme MYBPC3, MYH7, LMNA, Cypher/ZASP Channelopathies Studied Genes SQTL SCN5A, KCNQ1, KCNH2 SB SCN5A SQTC KCNQ1, KCNH2 Table 1. Summary of the studied genes by direct sequencing for each cardiomyopathies and / or channelopathies. a) Extraction of genomic DNA. b) Amplification and purification of genomic DNA. c) Automatic direct sequencing. d) Next generation secuencing. e) Bioinformatic analysis of the variants found. f) Bioinformatic analysis of the new genetic variants identified: in silico studies. Conclusions 1) It was estimated that the average incidence of sudden death related hereditary disease, estimated in Murcia, was 14 people/ year with a mean age at diagnosis of 36.0 ± 19.6 years. 2) A clearly predominance of male sex in all cases of sudden death in our population was shown, highlighting the significant association in the group of Cardiomyopathies. 3) Histological examination or comprehensive cardiac evaluation (in case of a resurrected cardiac arrest), showed a yield of 60.9%, being MCH the most common cause of sudden death in our clinical area. 4) Using molecular studies on 50 cases of sudden death, with evidence or suspected of hereditary disease, it has achieved an overall yield of positive genetic diagnosis of 10.0%. 5) After analysis with in silico tools, scientific literature consultation and the study of genotype-phenotype relationship, it is considered that the 30.0% of cases carrying at least one variant of uncertain clinical significance. Have been identified, missense variants of pathogenic greater probability. 6) As a diagnostic strategy, molecular analysis helped to increase the positive diagnostic yield; relatives clinically and genetically studied, 27.5% were carrying at least one of the mutations identified as causing or likely to cause the disease, 16.0% were clinically affected and 10.3% was not. 7) The multidisciplinary group created, which it is integrated by pathologists, cardiologists and molecular biologists, has allowed deepened in sudden death causes in Murcia.
- PublicationOpen AccessInfluencia neurohormonal y farmacológica en el fenotipo del síndrome de Brugada(2018-01-09) Peñafiel Verdú, Pablo; García Alberola, Arcadio; Gimeno Blanes, Juan Ramón; Escuela Internacional de DoctoradoIntroducción: El síndrome de Brugada (SB) es una canalopatía o alteración de los canales iónicos del corazón, de origen genético, capaz de producir muerte súbita en individuos con corazón estructuralmente normal. No existe tratamiento etiológico, y la dificultad en su manejo estriba en la estratificación de riesgo de muerte súbita para el implante de un desfibrilador automático. Si bien esta indicación está clara en pacientes recuperados de una muerte súbita, en el resto de pacientes no lo está tanto, y es preciso buscar indicadores de riesgo para optimizar el uso del desfibrilador. La incidencia de muerte súbita es mucho mayor en varones, y su aparición es más frecuente durante las horas nocturnas, sin que se haya llegado a establecer el mecanismo de estas asimetrías. Objetivos: 1. Desarrollar un software específico de promediado y análisis de la señal electrocardiográfica. 2. Estudiar las diferencias en la señal promediada entre pacientes con SB y control. 3. Analizar el comportamiento del intervalo QT a lo largo de las 24 h. 4. Estudiar los niveles de testosterona en pacientes con SB, y analizar su correlación con el fenotipo. Métodos: Inclusión de pacientes con SB espontáneo, y de aquellos a los que hubo que realizar un test de provocación con flecainida para su diagnóstico. Realización de 3 subestudios: a) En pacientes con test de flecainida, análisis de la señal electrocardiográfica promediada, con el objetivo de estudiar el mecanismo de acción de la flecainida en estos pacientes e intentar describir marcadores de riesgo. Comparar hallazgos en función del resultado del test. b) Estudio del comportamiento del intervalo QT mediante registro electrocardiográfico de 24 horas, con el propósito de investigar la causa que produce que los episodios de muerte súbita sean más frecuentes durante el período nocturno. c) Descripción de los niveles de testosterona (TH) en pacientes de ambos sexos con SB, y su correlación con la expresión clínica, incluyendo su posible implicación como factor de riesgo. Estudio de la penetrancia en una muestra genotipada. Resultados: a) Se observó un aumento del QRS filtrado, de la amplitud del segmento ST y de los parámetros que indican activación retrasada en todos los pacientes sometidos al test, comparados con el grupo control.Entre los pacientes con resultado positivo y negativo hubo diferencias en el aumento de la amplitud del segmento ST y en la concavidad del mismo, sin diferencias en otras variables. b) Se observó una deficiente adaptación del intervalo QT a la frecuencia cardíaca en los pacientes con SB, comparados con un grupo control. Esto se tradujo en intervalos medios a lo largo de las 24 horas, menores en los pacientes con SB que en el grupo control, y en intervalos QT predichos por la recta de regresión extremadamente cortos a frecuencias lentas. c) Los pacientes con SB presentan niveles de TH mayores que una muestra control, aunque no hubo diferencias al analizar por sexos. La normalización de TH no sirvió para evitar la influencia del sexo en los resultados. Conclusiones: a) La flecainida produce un retraso global en la activación ventricular, tanto en pacientes con síndrome de Brugada como en controles. b) Los pacientes con síndrome de Brugada presentan una deficiente adaptación del intervalo QT a la frecuencia cardíaca, lo que resulta en intervalos QT medio menores que en individuos normales. c) Los pacientes con síndrome de Brugada presentan niveles mayores de testosterona que los controles, probablemente en relación a la asimetría en cuanto al sexo que presenta la enfermedad. NEUROHORMONAL AND PHARMACOLOGICAL INFLUENCE ON BRUGADA SYNDROME PHENOTYPE Introduction: Brugadasíndrome (BS) is a channelopathy, or alteration of the heart’s ionic channels, with a genetic origin, capable of producing sudden death in patients with structurally normal hearts. There is no ethiologic treatment, and the difficulty in its management resides in sudden death risk stratification for further automatic defibrillator implant. Though this indication is clear for patients who have suffered a recuperated sudden death, for the other patients the indication is unclear, and it is necessary to look for risk indicators in order to optimize the defibrillator use. Sudden death incidence is much higher in males, and its occurrence is more frequent during night hours, the mechanism for these asymmetries not having been established. Aims: 1. To develop a specific software for electrocardiographic signal averaging and analysis. 2. To study the differences in averaged signal between BS patients and a control group. 3. To analyze the QT interval behaviour for 24 h. 4. To study testosterone (TH) levels in BS patients, and to analyze its correlation with the phenotype. Methods: Inclusion of patients with spontaneous BS and of those who underwent a challenge test with flecainide for its diagnosis was carried out. Three sub-studies were performed: a) In patients who underwent flecainide test, analysis ofaveraged electrocardiographic signal, with the aim of studying flecainide action mechanism in these patients, and attempt to describe risk markers. To compare findings according to the test result. b) Study of the QT interval behaviour using 24h electrocardiographic recording, in order to investigate what causes that sudden death episodes are more frequent during night time. c) Description of testosterone levels in BS patients of both genders, and their correlation with the clinical expression, including their possible implication as a risk factor. Study of the penetrance in a genotyped sample. Results: a) An increase of filtered QRS, ST segment amplitude, and delayed activation parameters were observed in all the patients who underwent the test, compared to the control group. There were differences in ST segment amplitude increase and in its concavity between patients with positive or negative result. There were no differences in the other variables. b) A deficient adaptation of QT interval to heart rate was observed in BS patients, compared to the control group. This meant shorter mean intervals along the 24 hours in BS patients than in the control group, and also extremely short QT intervals at slow heart rates, as predicted by the regression line. c) BS patients show higher TH levels than the control group, though there were no differences when analysed by gender. TH standardization proved of no use to avoid the gender influence in the results. Conclusions: a) Flecainide produces a global delay in ventricular activation, both in BS and control patients. b) BS patients show a deficient QT interval adaptation to heart rate, which results in shorter mean QT intervals than in normal people. c) BS patients show higher testosterone levels than the control group, probably due to the gender asymmetry showed by the disease.