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Actividad antifúngica de las equinocandinas. Estudio específico de caspofungina / Mónica Romero Otero; dirigida por Emilia Cantón Lacasa, Javier Pemán García, Manuel Segovia Hernández
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Genética y Microbiología,, 2006) Romero Otero, Mónica
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Alargamiento de la vida útil de queso fresco utilizando antimicrobianos de origen natural
(Murcia : Universidad, Facultad de Veterinaria, Departamento de Anatomía, Anatomía Patológica Comparadas y Tecnología de Alimentos,, 1999) Mendoza Yepes, María José; Marín Iniesta, Fulgencio
Embargo
Alternativas agro-sostenibles en el cultivo de cítricos
(Universidad de Murcia, 2025-07-18) Olmos Ruiz, Rafael; Carvajal Alcaraz, Micaela; Escuela Internacional de Doctorado; Escuela Internacional de Doctorado
Este trabajo de investigación abordó los principales retos del cultivo de limón (Citrus x limon) en regiones mediterráneas, especialmente frente al cambio climático, la degradación del suelo y la escasez hídrica. El objetivo general fue desarrollar y evaluar alternativas agro-sostenibles que mejoren la productividad, calidad del fruto y rentabilidad económica, reduciendo a la vez el impacto ambiental. La Tesis se dividió en cuatro secciones temáticas, cada una con ensayos experimentales independientes, pero conectadas por elementos comunes como el análisis de la fisiología vegetal, la nutrición mineral, la calidad del producto y la viabilidad económica del cultivo. En el primer bloque, se compararon los efectos de la agricultura ecológica y convencional sobre aspectos como la nutrición mineral, el intercambio gaseoso (fotosíntesis, transpiración, conductancia estomática), la eficiencia en el uso del agua y de los fertilizantes, la fijación de CO₂ y la composición bioquímica de los frutos. Asimismo, se estudió el aprovechamiento de subproductos cítricos (pulpa, cáscara y jugo) para producir nano-vesículas con capacidad de encapsular micronutrientes, adoptando así un enfoque de economía circular que permite reducir residuos agrícolas y valorizar desechos del cultivo. Los resultados indicaron que la producción ecológica puede mejorar ciertos parámetros de calidad del limón, aunque en determinados contextos presenta limitaciones de rendimiento. Las nano-vesículas mostraron propiedades bioactivas, proponiéndose su uso en sectores como la cosmética, la terapéutica y la fertilización foliar eficiente. El segundo capítulo abordó la evaluación de distintos tipos de acolchados (orgánicos y geotextiles) y su impacto en variables como la temperatura del suelo, la retención hídrica y la disponibilidad de nutrientes. Los acolchados geotextiles favorecieron el desarrollo vegetativo al conservar mejor la humedad del suelo. Por su parte, los acolchados con restos de poda triturados no solo promovieron un crecimiento superior durante los periodos de altas temperaturas, sino que también estimularon la diversidad bacteriana del suelo, mejorando su salud y sostenibilidad ambiental. El tercer bloque se centró en el efecto del intercultivo de cítricos con plantas aromáticas como Rosmarinus officinalis L. y Lavandula dentata L. Este enfoque permitió observar mejoras en la humedad del suelo, sus propiedades físico-químicas, y en la diversidad de bacterias y nematodos, con efectos positivos sobre la fisiología del limonero. Esta técnica demostró ser una alternativa viable para reducir el uso de insumos externos y recuperar suelos degradados, al tiempo que mejora la productividad. Finalmente, el cuarto bloque examinó diferentes niveles de riego deficitario como respuesta a la creciente escasez de agua provocada por el cambio climático. Se midieron parámetros fisiológicos como la fotosíntesis, la eficiencia hídrica y el rendimiento del cultivo, además de llevar a cabo un análisis económico. Se concluyó que una estrategia de riego moderadamente restringida puede mantener un buen nivel productivo y mejorar significativamente el uso eficiente del agua, generando beneficios económicos para los agricultores. En conjunto, las estrategias evaluadas permitieron un uso más eficiente de recursos clave como el agua, los fertilizantes y los subproductos del cultivo. La implementación de estas técnicas puede transformar los modelos productivos actuales hacia una agricultura más sostenible, resiliente y rentable. El estudio propone soluciones viables a corto y medio plazo, especialmente útiles para zonas mediterráneas semiáridas, afectadas por la crisis climática.
Open Access
Análisis del microbioma-metiloma y estudio de asociación entre Fusobacterium nucleatum y marcadores moleculares en el cáncer colorrectal
(Universidad de Murcia, 2023-11-20) Escudero Jiménez, Ángel; Galán Ros, Jorge; Conesa Zamora, Pablo; Escuela Internacional de Doctorado
Objetivo: Estudio del microbioma y metiloma a partir de muestras de tejido intestinal de pacientes con CCR para establecer asociaciones entre el perfil de metilación genética a nivel de islas CpG y la abundancia relativa respecto al género Fusobacterium. A su vez, se lleva a cabo el estudio de asociación entre la cuantificación relativa de Fusobacterium nucletarum y las características clínicas y moleculares en el CCR, así como la utilidad potencial de la medición del nivel de F. nucletaum en el diagnóstico/cribado del CCR. Material y métodos: Se incluyen un total de 154 muestras emparejadas correspondientes a 77 pacientes con CCR, tanto de tejido tumoral (T) como de tejido no tumoral periférico (NT), clasificadas según tipo de CCR (CC, SAC y hmMSI), localización (proximal, distal) y estadio según criterios TNM. El estudio del microbioma bacteriano en muestras T y NT se realiza mediante tecnología NGS (IlluminaMiSeq System®). El estudio del perfil de metilación del ADN a nivel de islas CpG en muestras T se realiza mediante el array Infinium® HumanMethylation450 BeadChip y los resultados se validan por pirosecuenciación. El estado MSI se determina mediante el kit MSI Analysis System (Promega) y el estado CIMP con la técnica SALSA® MS-MLPA® Probemix ME042-C1 CIMP (MRC-Holanda). También se determinan mediante pirosecuenciación las mutaciones de los genes: KRAS, BRAF y PIK3CA. Finalmente se realiza la cuantificación bacteriana global y de F. nucletaum por qPCR. Las diferencias existentes entre muestras T y NT en cuanto a microbioma se han estudiado mediante el método PCA (Principal Component Analysis), la prueba U de Mann-Withey-Wilcoxon y el análisis LDA (“linear discrimination analysis”). El análisis de correlación de Pearson entre la abundancia relativa del género Fusobacterium y el nivel de metilación de los genes estudiados se ha realizado con la función R statscor utilizando RStudio IDE versión 1.0.143. Para el resto de análisis estadísticos, tanto del estudio de validación del porcentaje de metilación, del análisis de correlación entre la cuantificación relativa de F. nucletaum y los porcentajes de metilación, o de asociación con los distintos marcadores de interés, se ha utilizado el paquete estadístico SPSS versión 21.0. Resultados: El análisis de la diversidad de géneros bacterianos realizado entre muestras T y NT según la localización determina que existen diferencias significativas que especificamente son debidas a muestras T de localización distal, con una menor diversidad, mientras que no existen diferencias de diversidad microbiana según el tipo de CCR. El PCA de los datos de microbioma no muestra diferencias entre los casos. Entre los géneros bacterianos con diferencias significativas en su abundancia relativa entre muestras T y NT se encuentran Bacteroides, Eubacterium, Fusobacterium y Acinetobacter, que se presentan como los géneros con mayor poder discriminatorio en el modelo predictivo obtenido mediante el método LDA a favor de muestras T, mientras que únicamente el género Lachnoclostridium se presenta como género en el modelo predictivo a favor de muestras NT. El estudio de validación realizado a partir de los datos obtenidos por el análisis de correlación para el nivel de metilación genético y la abundancia relativa del género Fusobacterium ha confirmado una correlación positiva con la metilación de los genes PLCH1, mirLET7D, EGFR y COBL. En cambio el nivel de F. nucletaum ha mostrado correlación positiva únicamente con el gen ZNF788. No se encuentran diferencias en la cuantificación de F. nucletaum en cuanto a sexo y localización. Existen diferencias significativas entre CC y SAC/hmMSI que se dan a nivel proximal, y entre los tumores de mayor tamaño (T3, T4) o estadios avanzados (II, III, IV) frente a los de menor tamaño (Tis, T1, T2) o estadio (0, I). También existen diferencias significativas entre MSS y MSI-H, entre CIMP-H y CIMP-L, y para los estados mutados de los genes KRAS y BRAF, mientras que no se encuentran para PIK3CA. El análisis multivariante confirma que el estado MSI, estadio CCR y el tipo de CCR son las variables que presentan asociación significativa de forma independiente con la cuantificación relativa de F. nucletaum. La cuantificación relativa de F. nucletaum presenta una eficiencia diagnóstica para CCR del 69%. Se establece el punto de corte óptimo en una diferencia ≤ 10 ciclos en Ct de F. nucletaum y Ct de carga bacteriana total obtenidos por qPCR. El modelo predictivo establece que la cuantificación relativa de F. nucletaum es predictor independiente de CCR (OR=2,23; IC95% [1,51-3,30]) y del tipo de CCR SAC/hm-MSI frente a CC (OR=2,00; IC95% [1,22–3,28]). Conclusiones: Se han encontrado potenciales biomarcadores potenciales bacterianos para CCR (géneros Bacteroides, Eubacterium, Fusobacterium y Acinetobacter). Además los genes PLCH1, mirLET7D, EGFR y COBL han mostrado un estado hipermetilado asociado a la abundancia del género Fusobacterium spp. en muestras T, mientras que sólo el porcentaje de metilación del gen ZNF788 ha mostrado correlación positiva con la cuantificación relativa de F. nucletaum. El nivel de F. nucletaum se asocia de forma significativa al tipo de CCR SAC/hmMSI, estadios avanzados, estado MSI-H, estado CIMP-H y BRAF mutado, aunque el análisis multivariante confirma la asociación de forma independiente con el CCR tipo SAC/hmMSI, estadios avanzados y estado MSI-H. Debido a la buena especificidad obtenida para la cuantificación relativa de F. nucletaum se propone dicho parámetro como candidato a la mejora del cribado/diagnóstico del CCR mediante técnicas no invasivas, incluso llegando a poder diferenciar entre CC y SAC/hmMSI.
Open Access
Analysis of mycelial growth and development of the desert truffle "Terfezia claveryi" Chatin and microorganisms associated to desert truffle mycorrhizal plants
(Universidad de Murcia, 2021-12-21) Arenas Jiménez, Francisco; Navarro Ródenas, Alfonso; Morte Gómez, María Asunción; Escuela Internacional de Doctorado
Terfezia claveryi Chatin es un hongo hipogeo comestible perteneciente al grupo conocido como “trufas del desierto”, localizado principalmente en ecosistemas áridos y semiáridos de la cuenca del Mediterráneo. En su hábitat natural, T. claveryi establece simbiosis ectendomicorrícica con numerosas especies del género Helianthemum y su fructificación es en primavera. Fue la primera especie dentro de las trufas del desierto en ser cultivada, y desde entonces se ha convertido en un cultivo agrícola alternativo en zonas semiáridas de la Península Ibérica, que ha ido incrementándose durante los últimos años. Esta tesis tiene como objetivo principal el estudio del comportamiento miceliar de la trufa del desierto T. claveryi, tanto en laboratorio como en campo, así como los microorganismos asociados a la rizosfera de plantas hospedantes del género Helianthemum con el fin de conocer más su biología y mejorar su cultivo. Para ello, se planteó el desarrollo de cinco objetivos parciales que dieron lugar a los siguientes resultados y conclusiones. Inicialmente, se evaluó el crecimiento miceliar de T. claveryi en condiciones in vitro, probando en el medio de cultivo MMN (sólido y líquido) distintas concentraciones de macronutrientes, micronutrientes y vitaminas, diferentes condiciones de pH, tamaño de inóculo inicial y relación C/N. Los resultados permitieron diseñar un medio de cultivo MMN optimizado que mejoraba la biomasa miceliar producida. Además, el micelio producido en cultivo líquido en biorreactor permitió la producción de planta micorrizada. En segundo lugar, se estudió la dinámica miceliar de T. claveryi s.l. en suelo durante 4 años en distintas zonas naturales y en plantaciones de la Región de Murcia. Para ello, se diseñaron cebadores específicos para la cuantificación de ADN en suelo con la técnica de PCR cuantitativa a tiempo real, en cada una de las estaciones. Finalmente, se desarrolló un protocolo con la pareja de primers Tc452F/TerclaR, que detecta los productos de PCR. La distribución del micelio fue independiente de las características geográficas de las áreas estudiadas. El año fue la única variable que separó significativamente los datos de micelio en dos grupos (años 1-4 y 2-3), existiendo diferencias significativas sólo para las estaciones de invierno y primavera. Además, el micelio de invierno se correlacionó fuertemente con las variables agroclimáticas del otoño previo, siendo positivas para la precipitación, el índice de aridez y la humedad relativa y negativas para la temperatura máxima, el déficit de presión de vapor y la evapotranspiración. En tercer lugar, se aislaron las bacterias de la rizosfera de T. claveryi x H. almeriense a lo largo de las estaciones. Se realizó una caracterizaron fenotípica, bioquímica, molecular y de las actividades PGPR de las colonias bacterianas (solubilización del fósforo, liberación de auxinas, producción de sideróforos y actividad ACC-deaminasa). Los análisis estadísticos revelaron un enriquecimiento significativo en bacterias solubilizadoras de fósforo (liberadoras de ácidos orgánicos) y con actividad ACC-deaminasa durante la época de fructificación del hongo. Además, se confirmó que un cambio del estado fenológico de la planta determinaba un cambio en la comunidad bacteriana vinculado a sus rasgos PGPR. Por último, para conocer la comunidad de hongos asociados a plantas productoras de ascocarpos frente a las plantas no productoras se utilizaron herramientas de secuenciación masiva de ADN, tanto en suelo como en raíz. Se encontraron distintos patrones en la composición de especies de hongos en función de la productividad. Además, algunos modos tróficos fúngicos fueron identificados como relevantes por tener un efecto positivo o negativo sobre la producción de ascocarpos. Finalmente, se encontraron un grupo de OTUs significativos asociados a zonas productivas, que podrían usarse como marcadores para la localización de trufas del desierto.
Open Access
Aplicaciones de la PCR en el diagnóstico de un brote de legionelosis
(2008-07-15) Vera Sánchez, María del Mar; Yagüe Guirao, Genoveva; Segovia Hernández, Manuel; Genética y Microbiología; Biología
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Calidad microbiológica de alimentos suministrados en comedores estudiantiles [Microforma].
(Murcia : Universidad, Secretariado de Publicaciones,, 1989) Caro Vergara, María Rosa
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Calidad microbiológica de alimentos suministrados en comedores estudiantiles.
(Murcia : Universidad, Facultad de Veterinaria,, 1987) Caro Vergara, María Rosa
Open Access
Características clínicas y microbiológicas de las diarreas agudas en una unidad de corta estancia : desarrollo de un modelo predictivo de salmonella
(2017-03-01) García Méndez, María del Mar; García Pérez, Bartolomé; Ruiz Gómez, Joaquín; Gómez Gómez, Joaquín; Facultad de Medicina
Introducción: la diarrea aguda es un problema importante por su frecuencia y sus posibles complicaciones. Es una de las 5 causas de mortalidad en el mundo, es responsable de aproximadamente dos millones de muertes al año. Es esencial para el manejo adecuado la reposición hidroelectrolítica y los antibióticos empíricos cuando estén indicados según el microorganismo que se sospeche. En los casos en los que la diarrea esté causada por Salmonella, que es la causa más frecuente de hospitalización por gastroenteritis aguda, no requiere administración de antibióticos excepto en casos seleccionados, ya que el tratamiento antibiótico aumenta la probabilidad de hacer al paciente portador y aumenta el riesgo de transmisión en la comunidad y aumenta la aparición de resistencias. Este estudio es importante porque en nuestro entorno hay pocos estudios de la etiología de la diarrea aguda en adultos y no hay modelos de predicción en la diarrea aguda. Objetivos: en primer lugar analizar las características de las diarreas agudas ingresadas en la Unidad de Corta Estancia del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca en un periodo de dos años. Después investigamos las variables que se asocian con el aislamiento de Salmonella, Campylobacter y con el resultado negativo del coprocultivo. Por último realizamos un modelo predictivo de Salmonella que nos ayude en la decisión de comenzar o no un tratamiento antibiótico empírico. Método: se realizó un estudio prospectivo de 210 casos de diarrea aguda ingresados en la Unidad de Corta Estancia del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca de Murcia en un periodo de dos años y se describen su características epidemiológicas, clínicas y microbiológicas. En segundo lugar se investigaron las variables que se asociaron con el aislamiento de Salmonella, Campylobacter, y el resultado negativo de los coprocultivos mediante regresión logística binaria. Después se realizó un modelo predictivo de Salmonella. Resultados: Se incluyeron en el estudio un total de 210 pacientes. El coprocultivo fue positivo en 89 casos (42,4%), Salmonella se aisló en 53 (25.2%), Campylobacter se aisló en 31 (14.8%), Clostridium difficile en 3 (1,4%), y Shigella en 2 casos (1%). Se encontró que las variables epidemiológicas consumo de huevos y otros afectados, variables clínicas presencia de fiebre, dolor abdominal y deposiciones verdes se asociaron con el aislamiento de Salmonella en el coprocultivo. Con estas variables se obtuvo un modelo predictivo que nos ayuda en la decisión de iniciar o no un tratamiento antibiótico empírico. En nuestro modelo se incluyeron variables epidemiológicas y clínicas para que sea más fácil su aplicación en la práctica diaria. Con este modelo podemos predecir con una probabilidad de hasta el 84% el aislamiento de Salmonella. No se realizó un modelo predictivo con Campylobacter porque solamente se encontró una variable que se asociaba a su aislamiento en el coprocultivo. SUMMARY Introduction: Acute diarrhea is a major clinical problem due to its frequency and its possible complications. It is one of the five leading causes of death in the world, it is responsible for approximately two million deaths annually. It is essential for the proper management a correct electrolyte replacement therapy and empirical antibiotics when they are indicated according to the suspected microorganism. In cases where diarrhea is caused by Salmonella, which is the most frequent cause of hospitalization for acute gastroenteritis, does not require antibiotic administration except in selected cases, antibiotic treatment increases the likelihood of making the patient bearer, increases the risk of transmission in the community and antibiotic treatment increase the emergence of resistances. This study is important because in our area there are few studies of etiology of acute diarrhea in adults and have never done predictive etiological models in acute diarrhea. Objectives: First analyze the characteristics of acute diarrhea admitted to the Short Stay Unit of Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca over a period of two years. Second we investigate which of these variables are associated with the isolation of Salmonella, Campylobacter, and the negative results of stool culture. Finally conduct a predictive model of Salmonella which help us in the decision to start or not an empirical antibiotic treatment. Methods: First we conducted a prospective study of 210 cases of acute diarrhea admitted to the Short Stay Unit of the Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca of Murcia for a period of two years, and described the epidemiological, clinical and microbiologic characteristics. Second, the variables that were associated with the isolation of Salmonella, Campylobacter, and the negative results of culture tests using binary logistic regression were investigated. Subsequently, a predictive model of Salmonella was conducted. Results: A total of 210 patients were included in the study. The stool culture was positive in 89 cases (42,4%), Salmonella was isolated in 53 (25,2%), Campylobacter was isolated in 31 (14,8%), Clostridium difficile in 3 (1,4%), and Shigella in 2 cases (1%). It was found that the epidemiological variables eggs consumption and others affected, clinical variables presence of fever, abdominal pain and green stools are associated with isolation of Salmonella in stool culture. With these variables was obtained a predictive model that helps us in the decision to start or not an empirical antibiotic treatment. Epidemiological and clinical variables were included in our model to make easier its implementation in daily practice. With this model we can predict with a probability of up to 84% the isolation of Salmonella. A model predictive with Campylobacter was not performed because only found a variable that is associated with its isolation in the stool.
Open Access
Caracterización biológica y ecología de balos en una planta de depuración simbiótica de aguas residuales
(Universidad de Murcia, 2021-02-19) Solana Guillén, Rafael; Torrella Mateu, Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción: Bdellovibrio fue descubierto por H. Stolp y H. Petzold en los años 60. Son bacterias gramnegativas, con forma de vibrio, quimioorganótrofas, aerobias y depredadoras de otras bacterias gramnegativas. Poseen un ciclo de vida constituido por dos fases: fase de ataque, donde se fija a la presa, y fase de crecimiento y división, donde crece a expensas de ésta. Ante el problema del incremento de multirresistencias a antimicrobianos, que ha llegado a constituir un desafío en terapia antimicrobiana, las bacterias del grupo BALOs (del inglés: Bdellovibrio And Like Organisms) han suscitado interés como recurso alternativo al uso de antibióticos, tanto en el campo de la patología infecciosa como en la agricultura y acuicultura, ya que destruyen una gran variedad de bacterias patógenas. Objetivos: esta investigación tiene como objetivos constatar la diversidad genética entre este grupo bacteriano, establecer una metodología óptima para una recuperación efectiva de BALOs ultracongelados y otra que permita maximizar su detección directamente en el medio, y analizar la capacidad depredadora de BALOs y su especificidad frente a la presa bajo distintas condiciones ambientales. Metodología: los BALOs fueron aislados de la Estación Depuradora de Aguas Residuales (E.D.A.R.) del Campus de Espinardo (Murcia), mediante la llamada “técnica de la doble capa de agar”, empleando como presas, bacterias de interés sanitario, así como distintas condiciones nutritivas y de temperatura para el estudio de su perfil ecológico. Se realizaron experimentos de congelación con concentraciones variables de glicerol para la optimización de la preservación de BALOs a largo plazo y posterior reactivación. El estudio genético y taxonómico de dos cepas de BALOs (MuRa1a y MuRa6a) se realizó por secuenciación y analisis con técnicas bioinformáticas, y búsqueda bibliográfica, respectivamente. Resultados: La revisión bibliográfica nos mostró los numerosos cambios taxonómicos sufridos por BALOs hasta llegar a su clase atual: Oligoflexia. Los resultados obtenidos tras la secuenciación de las cepas de Bdellovibrio revelan distancia filogenética entre las mismas, y corrobora la variedad genética de este grupo bacteriano. La detección de BALOs directamente del medio acuático fue mayor utilizando cepas de Escherichia coli como bacteria presa tras filtración e incubación conjunta a 30ºC. Esta detección se vio incrementada utilizando un sistema favorecedor del autoenriquecimiento de la muestra, sin aporte externo de nutrientes. El experimento de congelación dio como resultado una reactivación de BALOs sólo posible a concentaciones de glicerol menores al 0,5%, mientras que, en el ámbito ecológico, los BALOs mostraron gran especificidad de depredación dependiendo de su bacteria presa de origen y se observó mayor presencia de BALOs en biotopos de la E.D.A.R donde abundaban las presas independientemente a las condiciones fisico-químicas. Por último, en BALOs aislados de la E.D.A.R. y tras días en incubación con su presa, se observó una trasformación de la forma infectiva hacia formas cocoides compactas y sin capacidad motora. Conclusiones: el grupo BALO es un grupo bacteriano que presenta una gran diversidad genética y de habitat. La disminución de la riqueza del medio de cultivo y el autoenriquecimiento de la muestra, produce una mayor detección de BALOs directamente del medio, observando además que la capacidad depredadora del BALO es mayor si encuentra en el medio la bacteria presa de origen. Además, la concentración baja de glicerol en la congelación favorece la posterior reactivación de las bacterias a estudio. Por ultimo, las nuevas formas cocoides observadas en las cepas de BALOs aisladas parecen aparecer a consecuencia de una depauperación del medio.
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Caracterización de la actividad Trehalasa en levaduras / Juan Carlos Argüelles Ordóñez ; director Mariano José Gacto Fernández.
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Microbiología,, 1987) Argüelles Ordóñez, Juan Carlos
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Caracterización de la glicoproteina GP63 de Leishmania infantum /Tesis doctoral dirigida por el Dr. Manuel Segovia Hernández.
(Murcia : Universidad,, 1997) Martínez Andrés, Pilar
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Caracterización de la marinocina, un compuesto con actividad antimicrobiana sintetizado por "marinomonas mediterranea" : mecanismos regulatorios comunes entre su síntesis y la expresión de actividades polifenol oxidasa / Patricia Lucas Elio ; dirección, Antonio Sánchez Amat , Francisco Solano Muñoz.
(Murcia : Universidad de Murcia, Facultad de Biología, Departamento de Genética y Microbiología,, 2003) Lucas Elío, Patricia
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Caracterización del sistema polifenol oxidasa de R. solanacearum /Diana Hernández Romero; directores, Antonio Sánchez Amat, Francisco Solano Muñoz.
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Genética y Microbiología,, 2006) Hernández Romero, Diana
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Caracterizacion preliminar del sistema exoproteasico de un vidrio cholerae no aglutinable aislado de zonas costeras / Jose Manuel Navarro Espinel.
(Murcia : Universidad,, 1985) Navarro Espinel, José Manuel
Open Access
El complejo Card-Carg y su implicación en una nuevo mecanismo de regulación de la expresión de un sistema CRISPR-Cas
(Universidad de Murcia, 2018-11-29) Bernal Bernal, Diego; Elías Arnanz, Montserrat; Padmanabhan Iyer, Subramanian; Escuela Internacional de Doctorado
La bacteria Myxococcus xanthus presenta un complejo regulador de acción global constituido por las proteínas CarD y CarG que participa en la respuesta a la luz y en el desarrollo multicelular. CarD presenta un dominio C-terminal de unión al DNA similar al observado en los factores arquitectónicos eucarióticos HMGA, y un dominio N-terminal (CarDNt), que define a la familia de proteínas PF02559, que interacciona con CarG y con la polimerasa de RNA (RNAP). La proteína CarG, por otro lado, regula la expresión génica interaccionando con CarD, sin unirse directamente al DNA. Ambas podrían funcionar a modo de un “enhanceosoma” bacteriano. Este complejo es esencial para la acción de varios factores σ de tipo ECF (ExtraCytoplasmic Function) que responden a señales del medio para dar una respuesta fisiológica adecuada. En este trabajo se ha demostrado que CarDNt es esencial para la función de CarD y se ha determinado la estructura del subdominio de interacción con la RNAP (CarD1-72), que adopta una estructura tipo Tudor similar a la observada en CdnL, otro regulador global de M. xanthus que forma parte de la misma familia que CarD. El análisis mutacional de este subdominio ha permitido observar que, pese a que la superficie de interacción con la RNAP está conservada en CarD y en CdnL, dichas mutaciones no eliminan la actividad de CarD, a diferencia de lo observado en CdnL. Por otro lado, mediante la mutagénesis de varios aminoácidos no polares y básicos del subdominio C-terminal de CarDNt, se ha visto que estos cumplen un papel importante en la función de CarD, no relacionado con la interacción con CarG. Además, se ha profundizado en el estudio de las parejas σ-ECF/anti-σ: CarQ/CarR, que participa en la respuesta carotenogénica, y DdvS/DdvA, que está implicada en la regulación de un sistema CRISPR-Cas. Se ha identificado la topología en la membrana de sus factores anti-σ, CarR y DdvA, así como el dominio de interacción con sus respectivos factores σ-ECF. De la misma manera, se han analizado otras posibles parejas σ-ECF/anti-σ, cuyo factor anti-σ presenta un dominio NZAS asociado a un dominio eSTK. Para comprender el modo de acción del complejo CarD-CarG en la regulación de los factores σ-ECF, se ha demostrado que CarD y CarG colocalizan in vivo, lo que refuerza la idea de que ambas proteínas funcionan siempre juntas y de que CarG se localiza en el DNA a través de su interacción con CarD. Además, se ha demostrado que la unión de CarD a las regiones promotoras de carQ o ddvS requiere la activación de dicho promotor y la presencia de CarG. En relación a su acción reguladora sobre la pareja DdvS/DdvA, este trabajo ha demostrado que el complejo CarD-CarG modula junto a DdvS/DdvA la expresión de un sistema CRISPR-Cas de tipo III-B, en el que se han identificado cuatro promotores activados por DdvS y dependientes de CarD-CarG, que incluye a un promotor localizado aguas arriba del operón cas. Consistente con una acción directa, DdvS y CarD-CarG se localizan en estos promotores in vivo. La expresión de este sistema CRISPR-Cas genera un largo transcrito que incluye a los genes cas, la región CRISPR y su segmento líder, donde se ha observado un posible promotor dependiente de σA que no presenta una actividad significativa in vivo. Por tanto, la expresión de este sistema CRISPR-Cas, así como la producción de CRISPR-RNA maduros (crRNA) depende de DdvS y CarD-CarG. The bacterium Myxococcus xanthus has a global regulatory protein complex formed by CarD and CarG, which participates in the response to light and starvation-induced multicellular development. CarD contains a C-terminal DNA binding domain similar to that observed in the eukaryotic architectural factors HMGA, and a N-terminal domain (CarDNt), defining the protein family PF02559, which interacts with CarG and with the RNA polymerase (RNAP). CarG does not bind to DNA directly, but can regulate gene expression via its interaction with CarD. Both proteins could act together as a type of bacterial enhanceosome. The CarD-CarG complex is necessary for the action of several ECF-type (ExtraCytoplasmic Function) σ factors that respond to extracellular signals to provide an appropriate physiological response. In this work, it has been shown that CarDNt is essential for CarD function, and the structure of the RNAP interacting segment (CarD1-72) has been determined. CarD1-72 adopts a Tudor-like structure similar to that described for CdnL, another global regulator of M. xanthus belonging to the same family as CarD. Mutational analysis has proved that, although the RNAP interaction surface is conserved in CarD and CdnL, mutations within CarD1-72 do not abolish CarD activity, in contrast to what is observed in CdnL. In addition, it has been shown that mutations in several non-polar and basic amino acids within the C-terminal CarDNt segment disrupt CarD function, whereas its interaction with CarG remains unaffected. Also, two pairs of ECF-σ/anti-σ factors: CarQ/CarR, which controls the carotenogenic response, and DdvS/DdvA, which drives the expression of a CRISPR-Cas system, have been further analyzed. The topology inside the membrane of the anti-σ factors CarR and DdvA has been established, as well as the interacting domain with their respective ECF-σ factors. Similarly, other possible ECF-σ/anti-σ pairs, in which the anti-σ factor contains a NZAS domain associated to a eSTK domain, have been studied. In order to understand the mechanism by which the CarD-CarG complex regulates ECF-σ factors, CarD and CarG colocalization experiments have been carried out, proving that CarD and CarG colocalize in vivo, which supports the notion that both proteins always act together as a complex and that CarG is recruited to DNA through its interaction with CarD. Moreover, it has been demonstrated that the binding of CarD to the carQ or ddvS promoter regions requires both an active state of the promoter and the presence of CarG. Regarding their action on DdvS/DdvA, this work has revealed that the CarD-CarG complex, together with DdvS/DdvA, regulate the expression of a type III-B CRISPR-Cas system, in which four DdvS-activated CarD-CarG-dependent promoters have been identified, with one of them lying upstream of the cas operon. Consistent with their direct action, DdvS and CarD-CarG localize at these promoters in vivo. The expression of this CRISPR-Cas system generates a long transcript that comprises the cas genes, the CRISPR locus and the leader segment, which has a possible σA-dependent promoter but with no significant activitity in vivo. It can therefore be concluded that expression of the CRISPR-Cas system, as well as mature CRISPR-RNA (crRNA) production, depend on the ECF-σ factor DdvS and the CarD-CarG complex.
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Control ambiental de la división y diferenciación celular en levaduras con fisión
(Universidad de Murcia, 2022-02-21) Gómez Gil, Elisa; Cansado Vizoso, José; Madrid Mateo, María Isabel; Escuela Internacional de Doctorado
Las rutas de señalización intracelular mediadas por las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPKs), juegan un papel fundamental en las células eucariotas durante la respuesta adaptativa frente a cambios ambientales y condiciones adversas. El citoesqueleto de actina constituye una compleja red de polímeros que desempeñan un papel esencial durante la ejecución de procesos fundamentales para la célula como son la motilidad, la endocitosis, el crecimiento polarizado y la citocinesis. El correcto ensamblaje y organización de los polímeros de actina depende en gran medida de la activación y/o inhibición coordinada de un elevado número de proteínas evolutivamente muy conservadas que participan en diferentes cascadas de señalización, incluyendo las rutas de señalización mediadas por MAPKs. La levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe constituye un excelente modelo para el estudio de los mecanismos que activan dichas rutas, así como de los procesos que estas regulan, pues su genoma está evolutivamente muy conservado en relación con el de eucariotas superiores, y además presenta una gran versatilidad para la realización de estudios genómicos, bioquímicos, y celulares. Sin embargo, aunque tradicionalmente se ha empleado a S. pombe como organismo modelo en investigación, en los últimos años también está adquiriendo gran relevancia Schizosaccharomyces japonicus, otra de las cuatro especies que componen este género. S. japonicus fue la primera especie en distanciarse evolutivamente de las demás especies del género, y, a pesar de no ser patógeno, es un organismo dimórfico que puede crecer como levadura o diferenciarse para formar hifas en respuesta a distintas señales ambientales. S. pombe y S. japonicus también muestran diferencias notables en procesos biológicos tales como la remodelación de la envuelta nuclear durante la mitosis, el posicionamiento del plano de división, o la regulación de la polaridad celular. En base a estas y otras diferencias, ambas especies de levadura constituyen modelos óptimos para la realización de estudios evolutivos en el campo de la biología celular. Así, la presente Tesis Doctoral se ha focalizado en la caracterización funcional de las rutas de MAPKs de respuesta a estrés (SAPK) y de integridad celular (CIP) en las levaduras de fisión desde un punto de vista evolutivo, y su posible papel como reguladores de la morfogénesis. Para ello he planteado el abordaje de dos objetivos fundamentales: 1. Conservación evolutiva de las rutas de MAP quinasas activadas por estrés y de integridad celular en el género Schizosaccharomyces, y su papel como reguladores del dimorfismo en S. japonicus. 2. El estudio de las MAPKs activadas por estrés como reguladoras de la integridad del citoesqueleto de actina y la citocinesis en levaduras del género Schizosaccharomyces. Para la consecución de los objetivos anteriormente descritos se han empleado tanto cepas silvestres como distintos mutantes de S. pombe y S. japonicus obtenidos mediante manipulación genética o procedentes de otras fuentes (grupos de investigación y colecciones de cepas), así como diferentes técnicas experimentales. Estas incluyen: i- la construcción de cepas mutantes de levadura mediante manipulación genética (deleciones; mutagénesis dirigida; fusión de genes a epítopos específicos), ii- técnicas de biología molecular (PCR; qPCR; análisis RNAseq), iii- análisis de proteínas (marcaje y purificación de proteínas; SDS-PAGE; detección del estado de fosforilación y de los niveles de proteína mediante Western blot; inmunoprecipitación; ensayos de fosforilación in vivo/in vitro; tecnología PhosTag), y iv- técnicas de microscopía (microscopía time-lapse de fluorescencia de tipo confocal y wide-field). Los resultados obtenidos durante la realización de esta Tesis has permitido extraer las siguientes conclusiones: - La arquitectura del módulo de MAPKs de integridad celular se encuentra fuertemente conservada en S. pombe y S. japonicus, mientras que los activadores aguas arriba del módulo, los ortólogos de PKC Pck1 y Pck2, regulan antagónicamente la transición dimórfica en S. japonicus mediante el control preciso de la actividad de la MAPK Pmk1. Además, en S. japonicus Pmk1 posee una estructura secundaria única evolutivamente diferente que permite que la señalización mediada por la ruta CIP cumpla con los requisitos específicos de desarrollo de esta especie de levadura de fisión. - S. japonicus presenta un mecanismo de percepción del quórum dependiente de la densidad celular mediado por la liberación de alcoholes aromáticos que, junto con la ruta de MAPKs activada por estrés (SAPK), modula negativamente la transición dimórfica levadura-hifa en respuesta a estímulos ambientales. - La ruta de MAPKs activada por estrés (SAPK) regula negativamente el ensamblaje del anillo contráctil de actomiosina (CAR) en S. pombe mediante la reducción de los niveles de proteína de la formina For3 en respuesta a daños en el citoesqueleto de actina inducidos con Latrunculina A. Por el contrario, esta ruta modula de forma positiva el ensamblaje del CAR en S. japonicus, reflejando así la adaptación evolutiva que dicha cascada de señalización ha experimentado en respuesta a las marcadas diferencias que existen entre ambas levaduras de fisión en cuanto a la ejecución de la citocinesis.
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Cpc2 Regula la respuesta a estrés y el ciclo celular en Schizosaccharomyces pombe / Andrés Nuñéz Hernández; director, José Cansado Vizoso.
(Murcia : Universidad de Murcia. Departamento de Genética y Microbiología,, 2010) Núñez Hernández, Andrés
RACK1 (Receptor for Activated C-Kinase-1) es una proteína de 36 kDa identificada por su capacidad para unirse a PKC activada y miembro de la familia de proteínas con dominios WD40. Este grupo de proteínas están involucradas en la regulación de numerosas funciones biológicas como la transducción de señales, el control del ciclo celular, la organización de la cromatina y la muerte celular programada. Concretamente, la actividad de RACK1 ha sido relacionada con la función y envejecimiento neuronal, el desarrollo embrionario, la adhesión celular, la regulación de las rutas de señalización mediadas por MAP quinasas, la regulación de la traducción, el ciclo celular, cáncer y apoptosis. Además, RACK1 es un componente estructural de la subunidad 40S del ribosoma eucariótico, localizando en una región conservada evolutivamente y próxima al túnel de salida de los ARN mensajeros. Cpc2, el ortólogo de RACK1 en la levadura con fisión Schizosaccharomyces pombe, se asocia in vivo con Pck2, uno de los dos ortólogos a la PKC presentes en la levadura con fisión. Los mutantes carentes del gen cpc2+ manifiestan diversos fenotipos, tales como un retraso en la transición G2/M del ciclo celular que conlleva un incremento en el tamaño en división, la dificultad para bloquear el ciclo celular en la fase G1 durante el ayuno de nitrógeno, distintos defectos en la conjugación y esporulación, y sensibilidad al crecimiento a temperatura elevada. Además, se ha descrito que en ausencia de Cpc2 se reduce de manera selectiva la síntesis de algunas proteínas, sin afectar a la síntesis proteica global. De acuerdo con los resultados obtenidos en esta Tesis Doctoral, Cpc2 participa en las funciones asociadas a la ruta de integridad celular como la septación, la morfología y el mantenimiento de la integridad de pared, pero de manera independiente de la actividad de Pmk1 (MAP quinasa efectora de esta ruta). Al mismo tiempo, Cpc2 modula el grado de fosforilación/activación de las MAP quinasas Pmk1 (ruta de integridad celular) y Sty1 (ruta SAPK) de modo que, en su ausencia, se incrementa el nivel de fosforilación de ambas quinasas tanto en crecimiento vegatativo como en respuesta a estrés. Este incremento en el nivel de fosforilación de las MAP quinasas se debe a que Cpc2 regula positivamente la traducción de las fosfatasas de tirosina Pyp1 y Pyp2, encargadas de desfosforilar a Pmk1 y Sty1. Como resultado, la falta de Cpc2 reduce específicamente los niveles de proteína de ambas fosfatasas sin que se vean alterados los niveles de los respectivos ARN mensajeros. Además, Cpc2 es también necesario para una correcta adaptación celular frente al estrés, regulando positivamente la traducción de Atf1. Concretamente, las células carentes de cpc2+ ven reducida su viabilidad frente al peróxido de hidrógeno debido, en parte, a la incapacidad de sintetizar cantidades suficientes de catalasa citoplasmática (Ctt1). También demostramos que Cpc2 regula la transición G2/M del ciclo celular a través de la proteína Wee1. Las células carentes de cpc2+ muestran un incremento de esta quinasa Wee1, que inhibe la entrada en mitosis fosforilando e inhibiendo a la quinasa dependiente de ciclina Cdc2, el regulador clave de la transición G2/M del ciclo celular. Adicionalmente, Cpc2 regula positivamente la traducción de la quinasa Cdr2, uno de los principales reguladores negativos de la actividad de Wee1. Los resultados sugieren que en ausencia de Cpc2 las células de S. pombe presentan mayores niveles de Wee1 y más activos. Finalmente, los residuos conservados de Aspártico-36 y Glutámico-38 en Cpc2 son esenciales para su asociación a la subunidad 40S del ribosoma y su actividad biológica. La sustitución de estos residuos por Arginina y Lisina, respectivamente, impiden su unión al ribosoma, provocando que la proteína se acumule fundamentalmente en la fracción citosólica y las células que expresan esta versión de Cpc2 muestran los mismos fenotipos que el mutante nulo. En conclusión, Cpc2 constituye un elemento clave en la regulación traduccional de la levadura S. pombe afectando a múltiples procesos celulares: ejerciendo una regulación selectiva de la traducción de los ARN mensajeros, Cpc2 modula la actividad de las rutas de MAP quinasas favoreciendo la síntesis de las fosfatasas Pyp1 y Pyp2; regula la expresión de elementos involucrados en la respuesta a estrés como el factor de transcripción Atf1 y la catalasa citoplasmática Ctt1 implicados en la detoxificación del peróxido de hidrógeno, y modula los niveles de proteína de Wee1 y Cdr2, regulando así la progresión del ciclo celular. De acuerdo con nuestros datos, es necesaria la unión de Cpc2 al ribosoma para llevar a cabo todas sus funciones biológicas en este microorganismo modelo.
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Del origen de la vida a las vacas locas : lección inaugural del curso académico 1996-1997
(1996) Gacto Fernández, Mariano José
Open Access
Desarrollo de métodos rápidos para la detección de alicyclobacillus spp. en materia prima destinada a la elaboración de bebidas y zumos de frutas
(2016-02-11) Fernández Fernández, María Pilar; Periago Castón, María Jesús; Gabaldón Hernández, José Antonio; Departamento de Tecnología de Alimentos, Nutrición y Bromatología
Alicyclobacillus acidoterrestris es una bacteria termoacidófila, formadora de esporas que crece a una temperatura entre 26 y 60 ºC (con un rango óptimo de temperatura 42-53 ºC) y en un rango de pH de 2,0 a 6,0 con valores óptimos entre 3,5 y 5,0. Es una bacteria termorresistente que puede crecer en alimentos ácidos, incluyendo zumos y bebidas de frutas, y supone un gran problema para la industria de este sector, ya que el deterioro del zumo por este microorganismo no es perceptible en el producto final al crecer sin formación de gas, pero origina sabores desagradables que alteran el producto, como un “sabor a medicina”. Su detección, plantea dificultades en los departamentos de calidad ya que son necesarios varios días para la obtención de resultados por los métodos microbiológicos clásicos tradicionales. Por ello, es de gran importancia el desarrollo de métodos rápidos que permitan el control de Alicyclobacillus en las materias primas empleadas en la industria alimentaria garantizando así la ausencia de este microorganismo en los productos finales, zumos y bebidas de frutas. En la presente Tesis Doctoral el objetivo general ha sido estudiar la aplicación de dos métodos rápidos (impedancia eléctrica y PCR) para la detección de Alicyclobacillus spp. en distintas materias primas empleadas en la industria de zumos. Para ello se inocularon las materias primas (zumo concentrado de uva, zumo concentrado de manzana, zumo concentrado de piña, zumo concentrado de naranja, cremogenado de melocotón-nectarina, cremogenado de pera y zumo puro de naranja) con esporas Alicyclobacillus acidoterrestris aisladas a partir de un zumo de melocotón y uva, y con una cepa de referencia del mismo. En la primera experiencia se ensayaron distintos tratamientos térmicos (80 ºC/10 minutos, 70 ºC/20 minutos y 60 ºC/30 minutos) para la germinación de esporas a formas vegetativas, no existiendo diferencias significativas en los recuentos de Alicyclobacillus a las distintas concentraciones de inóculos, ni en los porcentajes de recuperación. Es por ello que se seleccionó el tratamiento térmico de 80 ºC/10 minutos para emplear así menos tiempo de análisis. La técnica de impedancia eléctrica válida para la detección de Alicyclobacillus acidoterrestris fue el método indirecto, que registró los cambios en la impedancia del medio (%M) a través de la formación de CO2 derivado de la ruta metabólica del guayacol por Alicyclobacillus, siendo el medio de cultivo más adecuado para la determinación de este microorganismo el caldo BAT. Por el contrario, no detectamos crecimiento por impedancia eléctrica directa. Para cada una de las materias primas, zumo concentrado de uva, zumo concentrado de manzana, zumo concentrado de naranja, cremogenado de melocotón-nectarina, cremogenado de pera y zumo puro de naranja, se desarrolló un método valido para la detección y cuantificación de Alicyclobacillus acidoterrestris por impedancia eléctrica indirecta para un valor de %M= -10, logrando unos coeficientes de correlación y varianza corregida elevados, superiores al 0,8 tanto para el experimento realizado con una cepa aislada de un zumo de melocotón y uva comercial e identificada como Alicyclobacillus acidoterrestris, como el efectuado con una cepa de referencia de Alicyclobacillus acidoterrestris. La validación de este método comparando con el método de microbiología clásica con BAM Agar resultó satisfactoria con valores de R2 > 0,9 para cada una de las matrices mencionadas. Sin embargo, para el zumo concentrado de piña este método no permitió una adecuada cuantificación, ya que se obtuvo baja correlación entre las variables tiempo de detección por impedancia y logaritmo de las unidades formadoras de colonias cuantificadas por siembra tradicional en placa con BAM Agar, tanto para el estudio realizado con la cepa aislada como en el realizado con la cepa de referencia. Además, este método tampoco pudo ser validado con el método clásico de microbiología con BAM Agar por obtener un valor muy bajo de varianza explicada, R2= 0,366. Con la técnica de RTi-PCR es posible determinar la concentración de Alicyclobacillus acidoterrestris en todas las materias primas utilizadas en este estudio destinadas a la elaboración de zumos y bebidas de frutas, obteniendo unos valores de coeficientes de correlación y varianza corregida superiores a 0,9; y estableciendo un límite de detección, cuantificado por fluorescencia, de CT < 40 que corresponde a límite de detección de 200 ufc/mL en recuento en placa, para todos los casos, incluso en el zumo concentrado de piña a diferencia de la técnica por impedancia eléctrica. Las características intrínsecas de composición química analizadas en las muestras: ºBrix, pH, glucosa, fructosa, sacarosa, pectinas solubles en agua, ácidos orgánicos, compuestos fenólicos y flavonoides no influyeron en el crecimiento de Alicyclobacillus spp., al no observar diferencias en el crecimiento del microorganismo entre las muestras, a excepción del zumo concentrado de piña. En el caso del zumo de piña, los resultados obtenidos en el método de impedancia eléctrica indirecta, pueden estar relacionados con la composición fenólica de este zumo que se caracteriza por un alto contenido en lignanos, compuestos considerados como antimicrobianos de hongos y algunas bacterias patógenas, que pudiera inhibir el crecimiento de Alicyclobacillus y por consiguiente la síntesis de guayacol y formación de CO2. Summary Alicyclobacillus acidoterrestris is a thermoacidophilic, spore-forming bacterium that grows to a temperature between 26 and 60 ºC (with an optimal rank of temperature 42-53 ºC) and in a pH rank of 2,0 to 6,0 with optimal values between 3,5 and 5,0. It is a thermoresistant bacterium that can grow in acidic food, including fruit juices and drinks, and it means a great problem for the industry of this sector, since the deterioration in the juices by this microorganism is not noticeable on the final product as it grows without gas formation but it originates unpleasant tastes modifying the product, like "a taste of medicine". Its detection gives rise to difficulties at the quality departments, given that several days are necessary for the obtaining of results by the traditional microbiological methods. For that reason, it is highly important the development of quick methods which allow to control Alicyclobacillus in the raw materials used in the food industry, guaranteeing in this way the absence of this microorganism on the final products, fruit juices and drinks. At the present Doctoral Thesis the general aim has been to study the application of two quick methods (electrical impedance and RTi-PCR) for the detection of Alicyclobacillus spp. in different raw materials used in the juice industry. For that, the raw materials (concentrated grape juice, concentrated apple juice, concentrated pineapple juice, concentrated orange juice, peach-nectarine purée, pear purée and orange pure juice) were inoculated with spores Alicyclobacillus acidoterrestris isolated from a peach and grape juice, and with a reference strain of the same. At the first experience, different heat treatments were tried out (80 ºC/10 minutes, 70 ºC/20 minutes and 60 ºC/30 minutes) for the spore germination to vegetative forms, with no significant differences in the Alicyclobacillus counts to the different concentrations of inocula nor in the recovery percentages. It is for that reason that it was selected the heat treatment of 80 ºC/10 minutes in order to employ in this way less time of analysis. The electrical impedance technique valid for Alicyclobacillus acidoterrestris detection was the indirect method, which registered the changes in the impedance of the environ (%M) via the transformation of CO2 derived from the metabolic pathway of the guaiacol by Alicyclobacillus, being the BAT broth the most adequate culture medium for the determination of this microorganism. On the contrary, it was not detected growth by direct electrical impedance. For each one of the raw materials, concentrated grape juice, concentrated apple juice, concentrated orange juice, peach-nectarine purée, pear purée and orange pure juice, it was developed a valid method for the detection and quantification of Alicyclobacillus acidoterrestris by indirect electrical impedance for a value of %M = -10, achieving high correlation coefficients and corrected variance, higher to the 0,8, not only for the experiment carried out with an isolated strain from a commercial peach and grape juice and identified as Alicyclobacillus acidoterrestris, but also for that one carried out with a reference strain of Alicyclobacillus acidoterrestris. The validation of this method compared to the method of classical microbiology with BAM Agar resulted satisfactory with values of R2 > 0,9 for each one of the matrixes mentioned. However, for the concentrated pineapple juice this method didn’t allow an adequate quantification, as it was obtained low correlation between the variables detection time by impedance and logarithm of the colony-forming units quantified by traditional plating with BAM Agar, as for the study carried out with the isolated strain as in that one carried out with the reference strain. In addition to this, this method either could be validated with the classical method of microbiology with BAM Agar for obtaining a very low value of variance, R2 =0,366. With the RTi-PCR technique is possible to determine the concentration of Alicyclobacillus acidoterrestris in all the raw materials used in this study and destined to the manufacturing of fruit juices and drinks, obtaining values of R2 > 0,9 with an established value of CT < 40 and with a detection limit of 200 ufc/mL in all the cases, even in that of the concentrated pineapple juice, as opposed to the technique by electrical impedance. The intrinsic characteristics of chemical composition analysed in the samples: ºBrix, pH, glucose, fructose, sacarose, water soluble pectins, organic acids, phenolic compounds and flavonoids, had no influence in the growth of Alicyclobacillus spp., not observing differences in the growth of the microorganism among the samples, with the exception of the concentrated pineapple juice. In the case of the pineapple juice, the results obtained in the indirect electrical impedance method could be related to the phenolic composition of this juice that is characterized by a high content in lignans, compound considered as fungi antimicrobial and some pathogenic bacteria, which could inhibit the growth of Alicyclobacillus and, therefore, the synthesis of guaiacol and the CO2 formation.