Browsing by Subject "Leismaniasis"

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    Open Access
    Advances in the study of biomarkers related to canine leishmaniosis
    (Universidad de Murcia, 2024-06-28) Pardo Marín, Luis; Cerón Madrigal, José Joaquín; Martínez Subiela, Silvia; Escuela Internacional de Doctorado
    Esta tesis doctoral estuvo enfocada a aportar avances en el diagnóstico y seguimiento de la leishmaniasis canina desde un punto de vista de laboratorio. Por tanto, tiene los siguientes objetivos: - Avanzar en el uso de proteínas de fase aguda (PFA) para la clasificación y seguimiento de la enfermedad. Para ello, desarrollamos una guía sobre el uso de PFA para la caracterización y manejo de la leishmaniasis canina. Luego comparamos esta guía con las clasificaciones de Leishvet y Canine Leishmaniosis Working Group (CLWG). Finalmente, describimos cómo otras enfermedades como la piómetra, la pancreatitis o la obesidad tienen un patrón de cambio en las PFA totalmente diferente al de la leishmaniosis - Aplicar nuevos biomarcadores de daño renal en leishmaniosis canina (CanL) que ayuden a monitorizar el riñón durante el tratamiento de la leishmaniosis canina y que puedan aportar información sobre la respuesta al tratamiento. Para ello se han medido y comparado diversos marcadores de daño glomerular y tubular como el ratio IgG/creatinina en orina. - Avanzar en el uso de la saliva, como muestra no invasiva en esta enfermedad. Para ello validamos y utilizamos saliva, para la determinación de urea y creatinina en perros con leishmaniosis canina. - Detectar nuevos biomarcadores de esta enfermedad mediante el uso de técnicas proteómicas que sean muy sensibles para detectar proteínas y puedan proporcionar un análisis global detallado de las proteínas expresadas en suero de perro antes y después del tratamiento. Para ello, utilice el enfoque proteómico basado en marcaje isobárico de masas en grupo. Las conclusiones que se han obtenido en esta tesis doctoral son: 1. La concentración de PFA puede ser una herramienta clínica útil para caracterizar y gestionar CanL. El sistema de clasificación basado en la PFA creada en este doctorado se correlacionaba con sistemas de clasificación anteriores basados en signos clínicos y otros análisis de laboratorio. 2. La ferritina y la CRP muestran un perfil particular en la leishmaniosis canina con un aumento moderado de la CRP y un aumento mayor de la ferritina que de la CRP, a diferencia de otras enfermedades como la pancreatitis, la piómetra o la obesidad. Además, la ferritina y la CRP fueron útiles para controlar el tratamiento de la leishmaniosis. 3. El ratio IgG/creatinina urinario mostró una mayor precisión para monitorear la enfermedad renal durante el tratamiento de la leishmaniosis canina en perros con proteinuria que sSDMA o sCre. 4. La urea y la creatinina se pueden medir en la saliva de los perros y están aumentadas en la insuficiencia renal crónica producida por la leishmaniosis. 5. Los marcajes isobáricos de masas en grupo podrían usarse para identificar nuevas biomoléculas que permitan una mejor comprensión del mecanismo fisiopatológico involucrado en la leishmaniasis canina y que también podrían usarse potencialmente como biomarcador de esta enfermedad.
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    Avances en la leishmaniosis canina con énfasis en el uso de muestras de saliva
    (Universidad de Murcia, 2019-12-04) Cantos Barreda, Ana; Martínez Subiela, Silvia; Cerón Madrigal, José Joaquín; Escribano Tortosa, Damián; Escuela Internacional de Doctorado
    Esta tesis como compendio de publicaciones fue concebida para profundizar en el estudio del desarrollo de ensayos que permitieran el uso de muestras de saliva para diagnosticar leishmaniosis en perros. Los objetivos fueron: (1) desarrollar y validar un ensayo ultrasensible para la cuantificación de anticuerpos anti-Leishmania que permitiera su medición en suero y saliva de perro; (2) evaluar la utilidad del nuevo ensayo con muestras de suero y saliva para monitorizar el tratamiento frente a leishmaniosis canina (LCan); (3) evaluar la relación entre los niveles de anticuerpos anti-Leishmania en suero de perro medidos con el nuevo ensayo y por un ELISA comercial y la concentración de proteínas de fase aguda; (4) evaluar, mediante el nuevo ensayo, la cinética de los niveles de IgG2 e IgA anti-Leishmania en suero y saliva de perros infectados experimentalmente con L. infantum durante un año de seguimiento; (5) estudiar el posible ritmo circadiano en los niveles de IgG2 e IgA anti-Leishmania en suero y saliva de perros infectados experimentalmente; (6) y desarrollar y validar una PCR a tiempo real para la cuantificación de ADN de Leishmania spp. en saliva canina. La precisión, la exactitud y la sensibilidad analítica de cada ensayo fueron evaluadas mediante los coeficientes de variación intra- e inter-ensayo, la linealidad bajo dilución, el porcentaje de recuperación y el estudio de correlación, y los límites de detección y cuantificación. Para ello, se recogieron muestras de suero y saliva de perros seronegativos y seropositivos a Leishmania spp. Para evaluar la utilidad de los TR-IFMAs en suero en la monitorización del tratamiento se obtuvieron muestras de suero de 16 perros seropositivos a Leishmania spp. en el momento del diagnóstico y tras 30 y 180 días de tratamiento. Del mismo modo, para evaluar la utilidad de los TR-IFMAs en la monitorización del tratamiento con muestras de saliva, se recogieron muestras de suero y saliva de 20 perros con signos clínicos compatibles con LCan en el momento del diagnóstico y después de 30 días de tratamiento. También se usaron 205 muestras de suero para evaluar la correlación entre TR-IFMA y un ELISA comercial y la concentración de proteínas de fase aguda en el momento del diagnóstico de LCan y durante la monitorización del tratamiento. Para estudiar la cinética de los niveles de anticuerpos anti-Leishmania se tomaron mensualmente durante 1 año muestras de suero y saliva de 11 perros infectados experimentalmente con Leishmania infantum y se analizaron por TR-IFMA. Para evaluar el posible ritmo circadiano en los niveles de anticuerpos anti-Leishmania, muestras de suero y saliva de 6 perros infectados experimentalmente que presentaban signos clínicos compatibles con LCan se recogieron a intervalos de 4 horas durante un periodo de 16 horas en dos días consecutivos. Finalmente, para el desarrollo y validación de una PCR a tiempo real para la detección de ADN de Leishmania spp. en saliva de perro se recogieron salivas de 16 perros infectados experimentalmente pre-infección y 16 semanas post-infección. Las conclusiones de esta tesis doctoral son: 1. Los ensayos inmunofluorométricos desarrollados en esta tesis doctoral permiten la cuantificación de anticuerpos IgG2 e IgA anti-Leishmania en suero y saliva de perro, siendo los niveles más elevados en perros seropositivos. Se observó solapamiento en los niveles de IgA anti-Leishmania entre seropositivos y seronegativos. 2. Los ensayos desarrollados detectan disminuciones en los niveles de IgG2 e IgA anti-Leishmania en suero y saliva de perros después del tratamiento, asociado con mejoría clínica. 3. El ensayo desarrollado para detectar IgG2 anti-Leishmania mostró mayor correlación con los resultados de CRP y ferritina en perros tratados que el ELISA. 4. Los niveles de IgG2 e IgA anti-Leishmania en suero y saliva de perros aumentan por encima del punto de corte del ensayo TR-IFMA tras la infección experimental. Además, el TR-IFMA desarrollado para la detección de IgG2 anti-Leishmania ofrece mejor valor diagnóstico que el desarrollado para IgA anti-Leishmania. 5. No se ha observado ritmo circadiano en los niveles de IgG2 e IgA anti-Leishmania tanto en suero como en saliva de perros con LCan en un periodo de 16 horas en dos días consecutivos. Además, se han observado mayores variaciones en los niveles de estos anticuerpos en saliva que en suero. 6. La PCR a tiempo real desarrollada permite la cuantificación de ADN del cinetoplasto de Leishmania spp. en saliva de perros infectados experimentalmente con L. infantum. No obstante, hay que tener en cuenta que la sensibilidad del ensayo en saliva es menor que en médula ósea.