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Activación y diferenciación policlonal de células B por clones de linfocitos T. : papel del antígeno de diferenciación Kp43 en la activación y función de linfocitos T Gamma-Delta / Gonzalo Rubio Pedraza, director Pedro Aparicio Alonso
(Murcia : Universidad de Murcia, Facultad de Biología,, 1993) Rubio Pedraza, Gonzalo
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Adhesión, invasión y replicación intracelular de salmonella typhumurium en la línea de hepatocitos murinos tib 73 : mecanismos de acción antibacteriana / Francisco Javier Lajarín Barquero ; directora Pilar Garcia Peñarrubia
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Bioquímica, Biología Molecular "B" e Inmunología,, 1997) Lajarín Barquero, Francisco Javier
Open Access
Análisis bioeconómico de la valorización de subproductos de la industria cervecera en dietas funcionales para una acuicultura sostenible
(Universidad de Murcia, 2022-11-28) Vílchez-Gómez, Luciano; Fernández Pérez, Virginia; Esteban Abad, María de los Ángeles; Guardiola Abellán, Francisco Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
La presente tesis está enfocada en aportar nuevas soluciones en el campo de la alimentación en acuicultura, sin dejar de un lado la importancia que tiene realizar desde la ciencia económica una valoración de dichas soluciones respecto a su eficiencia o viabilidad. Esta investigación se ha llevado a cabo de manera multidisciplinar entre la economía y la biología. Junto con la investigación biológica se ha afrontado una necesaria revisión del concepto de sostenibilidad aplicado a la producción de alimentos para la acuicultura además de abordarse determinados aspectos económicos de la producción acuícola, y sin pretender ser una revisión exhaustiva del sector se ha puesto énfasis en aquellos aspectos que se consideran cuellos de botella para su crecimiento a futuro. Por un lado, la acuicultura como todas las producciones ganaderas es una actividad intensiva en el consumo de recursos naturales y energéticos. Si bien dentro de todos los tipos de ganadería que realizamos la acuicultura es quizás considerada la más eficiente, aunque de los costes de producción más de un 50 % corresponde al alimento y casi otro 20 % a la compra o producción de los alevines necesarios para su engorde. Por otro lado, la producción de cerveza es una actividad económica global con un volumen de producción a nivel mundial cada vez mayor, que tiene una faceta oculta por la enorme cantidad de desechos (levaduras, bagazos, o aguas residuales, etc.) que se producen durante el proceso de su fabricación. Tan solo en Europa se estiman que suponen entre ocho y nueve millones de toneladas anuales lo que conlleva un alto coste de gestión, eliminación y tratamiento para la industria, además de suponer un enorme desperdicio. Si bien, su alto grado de humedad (alrededor del 80 – 85 %) de su peso supone una limitación a su uso como materias primas y hasta la fecha no se había logrado incluir estas materias primas en cantidades significativas en los piensos, ni con unos resultados prometedores. Estos subproductos principalmente bagazos, y levaduras de desecho son producidos por la industria en cantidades suficientes como para que su uso en acuicultura sea viable. La validación de las dietas fabricadas con hasta un 89 % de subproductos del sector conservero y levaduras de desecho de la industria cervecera se han validado para la liseta o albur (Chelon labrosus), y la dorada (Sparus aurata) mediante la realización de cinco experimentos, en los cuales se ha analizado el crecimiento y el estado del sistema inmunitario de los animales. Los resultados de los experimentos biológicos y el análisis económico confirman que las levaduras de desecho de la industria cervecera son biológicamente una excelente materia prima utilizable en piensos para acuicultura, que puede utilizarse en inclusiones de hasta un 62,5 % del peso húmedo para la dorada o la liseta. Y además una opción económicamente viable, y ambientalmente son más sostenibles que el uso de otras materias primas alternativas. Contando además con el valor añadido de utilizar en su composición un 89 % de subproductos agroindustriales.
Open Access
Análisis de biomarcadores genómicos, celulares y serológicos como predictores de rechazo o tolerancia en el trasplante renal
(Universidad de Murcia, 2024-11-20) Jiménez Coll, Victor; Muro Amador, Manuel; Botella Martínez, Carmen; Escuela Internacional de Doctorado
Objetivos: El objetivo principal de esta tesis es identificar y analizar nuevos biomarcadores que mejoren la detección precoz del rechazo y optimicen la terapia inmunosupresora en el contexto del trasplante renal. Para alcanzar este objetivo global, se plantean tres objetivos específicos: 1) Destacar, de entre los biomarcadores serológicos, celulares y genómicos emergentes, aquellos con mayor potencial para la detección temprana y precisa del rechazo en trasplantes renales. 2) Analizar la relación entre la activación de subpoblaciones de linfocitos T CD8+ y la necrosis tubular aguda (ATN) en pacientes trasplantados, y determinar si esta activación puede servir como biomarcador predictivo para identificar a los pacientes con mayor riesgo de desarrollar ATN en el primer mes postrasplante. 3) Evaluar la relación entre los niveles de antígenos de maduración de células B (BCMA) antes del trasplante y la reactivación temprana del citomegalovirus (CMV) en pacientes trasplantados, y analizar si los niveles elevados de BCMA pueden predecir una mayor carga viral de CMV tras el trasplante. Metodología: Este trabajo incluyó una revisión bibliográfica y dos estudios observacionales prospectivos en pacientes que recibieron trasplante renal. La revisión bibliográfica se basó en estudios publicados en los últimos 10 años en revistas revisadas por pares, centrados en biomarcadores serológicos, celulares y genómicos con aplicaciones clínicas en el trasplante renal. Para la búsqueda se utilizaron bases de datos científicas reconocidas como PubMed, Scopus y Web of Science. El primer estudio experimental incluyó a 31 pacientes trasplantados renales y 17 controles sanos. Se recolectaron muestras de sangre periférica durante el primer año postrasplante en diversos momentos: semanas 1 y 2, y meses 1, 2, 3, 6 y 12. Las células mononucleares fueron aisladas mediante gradiente de densidad y analizadas por citometría de flujo para cuantificar subpoblaciones de linfocitos T CD8+, midiendo los marcadores de activación CD25, CD69 y CD95. El segundo estudio incluyó a 30 pacientes seropositivos para CMV-IgG, todos ellos con injertos funcionantes al menos un mes después del trasplante. Los pacientes fueron seguidos durante los tres primeros meses postrasplante para monitorizar la reactivación del CMV mediante qPCR. Se recolectaron muestras de sangre periférica con EDTA antes del trasplante y a los 3 y 6 meses postrasplante. Las células leucocitarias se aislaron y se evaluaron los niveles de transcripción de BCMA, BAFF-R, TACI y otros marcadores mediante qPCR. Además, se analizaron las subpoblaciones de linfocitos B mediante citometría de flujo. Conclusiones: Los biomarcadores serológicos, celulares y genómicos emergentes han demostrado un gran potencial para mejorar la detección temprana y precisa del rechazo en trasplantes renales, superando las limitaciones de los métodos tradicionales. En particular, la activación de los linfocitos T CD8+, evaluada a través de los marcadores CD25, CD69 y CD95, se asocia directamente con la aparición de ATN en receptores de trasplante renal, lo que sugiere que estas células desempeñan un papel crucial en la lesión inmunomediada del injerto durante las primeras etapas postrasplante. Los niveles elevados de estos marcadores demostraron ser altamente predictivos para identificar a los pacientes con mayor riesgo de desarrollar ATN. Además, los niveles elevados de transcripción de BCMA antes del trasplante en pacientes receptores de injertos renales están asociados con la reactivación temprana del CMV postrasplante. La medición de estos niveles podría ser utilizada como un biomarcador clínico para predecir el riesgo de reactivación viral, facilitando una mejor gestión de las complicaciones asociadas al CMV tras el trasplante renal.
Open Access
Análisis inmunobiológico en discrasias de células plasmáticas : utilidad diagnóstica y pronóstica
(2015-12-23) Periago Peralta, Adela; Minguela Puras, Alfredo; Álvarez López, María Rocío; Moraleda Jiménez, José María; Departamento de Medicina Interna
Objetivos: 1.- Analizar las características biológicas de las células plasmáticas (CP) en sangre periférica (SP) y en médula ósea (MO) en un grupo control sano y en pacientes con discrasias de células plasmáticas y relacionarlas con las características clínico-patológicas y la evolución de la enfermedad de los pacientes. 2.- Estudiar la presencia y fenotipo de CP clonales en SP (aCPs), para establecer una relación con las características biológicas de las células plasmáticas de MO, el diagnóstico y la evolución de la enfermedad. 3.- Analizar en SP la expresión de moléculas de activación/adhesión CD62L, HLA-DR y CD56 en linfocitos T y la expresión de moléculas KIR2DL en linfocitos T (CD4+ y CD8+) y células NK, en relación con las características biológicas de las células plasmáticas de sangre periférica y médula ósea, el tipo de gammapatía y la evolución clínica. Metodología: Se incluyeron un total de 164 pacientes procedentes de tres hospitales de la Región de Murcia de nuevo diagnóstico de discrasia de células plasmáticas (MGUS, SMM y MM) y aquellos que sin ser de nuevo diagnóstico no han recibido tratamiento, siguiendo los criterios del IMWG 2003. También se estudias 30 controles sanos. Las células fueron analizadas por histología, citometría de flujo (CMF) y por FISH. Resultados: Los diagnósticos fueron: 86 MGUS, 25 SMM y 53 MM. El porcentaje de CPs y la ratio proliferación/apoptosis de CPs, en MO, son de ayuda para orientar el diagnóstico de MGUS frente a Mieloma (SMM+MM) y tienen capacidad predictiva de progresión y SG. La combinación de ambos permite establecer un modelo de estimación de riesgo basado en parámetros de MO: CPs≥1.78% y ratios proliferación/apoptosis≥1.77 discriminan pacientes de bajo, intermedio y alto riesgo en SMM+MM. Incluso tiene capacidad pronóstica independientemente del tratamiento aplicado. De las alteraciones analizadas por FISH (aneuploidía, deleción 13q, rotura IHG, ganancia 1q y deleción p53), son estas dos últimas las que impactan de forma negativa en progresión y SG. La presencia de aCPs en SP ≥ 0.0035% son útiles para discriminar MGUS de mieloma y es un parámetro predictivo de progresión y supervivencia independiente a otros parámetros bien establecidos. Hemos establecido un modelo de estimación de riesgo basado en parámetros de SP como son edad, ISS y presencia de aCP en SP que identifica pacientes de bajo, intermedio y alto riesgo, reduciendo el porcentaje de pacientes de riesgo intermedio e incrementando los de alto riesgo en comparación al modelo propuesto por el IMWG-2014 con basado en citogenética e impacta con mayor fuerza en el riesgo de progresión y SG que el propuesto por IMWG-2014. Las células T CD8+ que expresan CD57, CD62L y/o HLA-DR, en SP, tiene una reducida utilidad en diagnóstico y/o pronóstico. La detección de la expansión de linfocitos T CD8+CD57+DR+, si se ha podido asociar tanto con la carga tumoral como con la frecuencia de aCPs en SP. Conclusiones: 1. El porcentaje de CPs en MO por CMF y el ratio proliferación/apoptosis son factores pronósticos que permiten establecer un modelo de predicción de riesgo en mieloma (SMM+MM). 2. La deleción de P53 y la amplificación de 1q (por FISH) son los principales marcadores de mal pronóstico para progresión y SG. 3. Cifras de aCPs en SP discriminan MGUS de mieloma y permiten establecer un modelo de predicción de riesgo en Mieloma 4. En ambos modelos de predicción de riesgo estimada con parámetros de CMF en SP o MO, mantiene su valor pronóstico con independencia del tratamiento administrado. 5. Los linfocitos T CD8+CD57+DR+, asocian tanto con la carga tumoral como con la frecuencia de aCPs en SP. 6. La presencia del ligando específico para KIR2DS1-HLA-C2 parece condicionar la susceptibilidad a padecer mieloma. Objectives: 1. To analyze the biological characteristics of the plasma cells (CP) in peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) in a healthy control group and patients with plasma cell dyscrasias and relate clinicopathological features and the evolution of the disease of patients. 2. Study the presence and phenotype in clonal CP SP (ACPs) to establish a relationship with the biological characteristics of the plasma cells in MO, diagnosis and disease progression. 3. Scan molecule expression SP activation / adhesion CD62L, HLA-DR and CD56 on T lymphocytes and KIR2DL molecule expression in T lymphocytes (CD4 + and CD8 +) and NK cells in relation to the biological characteristics of plasma cells in peripheral blood and bone marrow, gammopathy type and clinical outcome. Methodology: A total of 164 patients from three hospitals in the Murcia region of new diagnosis of plasma cell dyscrasias (MGUS, SMM and MM) and those that will be newly diagnosed untreated been included following criteria IMWG 2003. 30 healthy controls were also studying. Cells were analyzed by histology, flow cytometry (FCM) and by FISH Results: The diagnoses were: 86 MGUS, SMM 25 and 53 MM. The percentage of CPs and proliferation / apoptosis of CPs, MO, ratio are helpful to guide the diagnosis of MGUS versus myeloma (SMM + MM) and are predictive of progression and OS. The combination of both allows for a risk estimate model parameters based on MO: CPs≥1.78% and ratios proliferation / apoptosis≥1.77 discriminate patients at low, intermediate and high risk SMM + MM. It even has prognostic applied regardless of treatment analyzed by FISH abnormalities (aneuploidy, deletion 13q, gain 1q and deletion p53), the latter two are impacting negatively on progression and SG. The presence of ACPs in SP S ≥ 0.0035% are useful to discriminate myeloma and MGUS is a parameter predictive of progression and survival independent other well established parameters. We have established an estimation model based risk parameters SP as are age, ISS and presence of ACP SP identifies patients at low, intermediate and high risk, reducing the percentage of patients with intermediate risk and increasing high-risk compared to that proposed by the IMWG-2014 based on cytogenetic and impacts most strongly in the risk of progression and SG model proposed by IMWG-2014. CD8 + T cells and / or cells expressing CD57, HLA-DR CD62L, SP, has little use in diagnosis and / or prognosis. Detecting the expansion of CD8 + T lymphocyte CD57 + DR +, if it has been associated with both tumor burden as often as ACPS SP. Conclusions: 1. The percentage of CPs in MO by multiparametric flow cytometry and proliferation/apoptosis ratio are prognostic factors that allow to establish a risk prediction model Myeloma (SMM + MM). 2. Deletion of p53 and amplification of 1q (FISH) are the main markers of poor prognosis for the progression and OS. 3. aCPs figures MGUS to myeloma SP discriminate and allow for a prediction model Myeloma risk 4. In both models of risk prediction parameters estimated with either CMF or SP in MO, maintains its prognostic value regardless of the type of treatment given. 5. T CD8 + DR + CD57 + lymphocytes associated with both tumor burden as often as aCPS SP. 6. The presence of the ligand specific for HLA-C2-KIR2DS1 seems to condition susceptibility to myeloma
Open Access
Application of antimicrobial peptides for the control of betanodavirus in European sea bass
(Universidad de Murcia, 2024-11-22) Cervera Martínez, Laura; Chaves Pozo, Elena; Cuesta Peñafiel, Alberto; Esteban Abad, María de los Ángeles; Escuela Internacional de Doctorado
Esta Tesis Doctoral se centra en la caracterización de péptidos antimicrobianos (AMPs) de peces teleósteos y su implicación en la respuesta inmunitaria. Concretamente, nos planteamos evaluar la capacidad inmunomoduladora de los AMPs NK-lisina (Nkl), hepcidina (Hamp) y dicentracina (Dic) de lubina y su aplicación como agentes antivirales frente a nodavirus (NNV) en lubina. La primera fase de la experimentación fue comprobar la capacidad inmunomoduladora in vitro de dichos AMPs sintéticos, derivados de lubina, en leucocitos de riñón cefálico de dorada y lubina. Se estudió la capacidad fagocítica por citometría de flujo y el estallido respiratorio por quimioluminiscencia, sin detectar regulación por dichos AMPs. En cambio, se observó, mediante qPCR, el aumento significativo de la expresión de genes relacionados con la respuesta inmune antiviral en lubina y su descenso generalizado en dorada. Estos datos apuntaron a la idoneidad de los AMPs sintéticos derivados de lubina para su uso en lubina, pero no en dorada, indicando una especificidad de especie. Tras esto, se estudió la posible función y aplicación de estos AMPs en lubina mediante estudios in vivo. Al administrarlos en forma de plásmidos de expresión, estos se transcribieron en el músculo y aumentaron los niveles de dichasproteínas y la capacidad microbicida. Además, indujeron la expresión de marcadores proinflamatorios, aunque no consiguieron mejorar la supervivencia frente a infecciones con NNV. El siguiente paso fue testar los AMPs sintéticos Hamp y Dic in vivo en lubina ya que Nkl había sido previamente evaluada con resultados excelentes. Se comenzó analizando su potencial como inmunomoduladores, demostrándose una reducción en la expresión de marcadores proinflamatorios y un aumento de marcadores leucocitarios como neutrófilos, macrófagos y linfocitos B. Estas alteraciones se relacionan con una ventaja para el hospedador al luchar contra infecciones virales, por lo que se valoró su potencial como agente preventivo frente a NNV. Los resultados fueron muy satisfactorios mejorando en ambos casos la supervivencia frente al virus en un 30%. Este aumento de la supervivencia podría ser debido a la inducción de un estado antiinflamatorio en el tejido diana del virus, el cerebro, y la sobreexpresión del complejo Cxcr3/Cxcl9, que facilita la infiltración de células clave para la resolución viral como linfocitos T, neutrófilos o macrófagos. Curiosamente, la administración terapéutica de estos AMPs sintéticos tras la infección con NNV mostraron también una mejoría en la supervivencia de las lubinas tratadas con Hamp y Dic, y una inmunomodulación similar al tratamiento previo. Sin embargo, los niveles de virus no se vieron afectados, por lo que el efecto lítico directo de los AMPs sobre las partículas virales parece no ser relevante. Por el contrario, la administración de Nkl sintética solo logró retrasar la aparición de las mortalidades, pero no evitarlas, y únicamente estimuló la respuesta citotóxica, siendo esta claramente insuficiente para evitar la mortalidad por NNV. En conclusión, los péptidos sintéticos Hamp y Dic pueden ser considerados como excelentes herramientas para el control de NNV en granjas de lubina gracias a sus funciones inmunomoduladoras, tanto administrado de forma profiláctica como terapéutica.
Open Access
Biomarcadores celulares, moleculares y genéticos de linfocitos B para el rechazo y tolerancia del aloinjerto renal
(Universidad de Murcia, 2021-03-29) Alfaro González, Rafael; Muro Amador, Manuel; Escuela Internacional de Doctorado
OBJETIVOS: El objetivo general de la tesis es evaluar si los procesos que median el rechazo y tolerancia al aloinjerto renal están reguladores por diferentes biomarcadores genéticos, moleculares y celulares de linfocitos B. Para ello, se abordaran los siguientes objetivos específicos: 1) Monitorizar subpoblaciones de linfocitos B y evaluar su utilidad pronóstico para el post-trasplante. 2) Estudiar polimorfismos funcionales y cuantificar los niveles de moléculas del sistema BAFF para, posteriormente, correlacionar con la evolución del trasplante y la producción de anticuerpos anti-HLA específicos frente al donante. 3) Estudiar miARN implicados en el desarrollo y activación de linfocitos y establecer su relación con el rechazo agudo del injerto. 4) Búsqueda de biomarcadores y desarrollo de modelos diagnósticos de rechazo mediado por anticuerpos mediante técnicas bioinformáticas. METODOLOGÍA: En la presente tesis se incluyeron muestras de pacientes sometidos a trasplante renal realizados entre el año 2013 y el 2018 en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca de Murcia. La monitorización de subpoblaciones de linfocitos B se realizó mediante citometría de flujo. Los polimorfismos y la expresión génica de moléculas del sistema BAFF y de miARN se estudiaron mediante PCR cuantitativa, y las formas solubles mediante ELISA. Por último, se realizó un meta-análisis con estudios de la base de datos GEO y se emplearon diferentes aplicaciones bioinformáticas (xCell, Gene2Drug etc.) para el análisis de los datos. CONCLUSIONES: 1) Los perfiles inmunológicos basados en subpoblaciones de linfocitos B (LB) permiten agrupar a los trasplantados renales según el diferente riesgo de rechazo agudo. Los trasplantados que presentan niveles disminuidos de LB transicionales y plasmablastos se asocian a una peor función renal y mayor incidencia de rechazo agudo durante el primer año post-trasplante. Además, la elevación de LB transicionales durante el post-trasplante se asocia con un aumento de los linfocitos T reguladores en el mismo periodo, por tanto, la elevación de subpoblaciones de carácter inmunosupresor parece ejercer un efecto protector frente al rechazo del injerto. 2) El estudio de biomarcadores del sistema BAFF, muestra que el polimorfismo rs3803800 del gen TNFSF13, que codifica para APRIL, modifica el riesgo de sufrir rechazo agudo. Los análisis bioinformáticos sugieren que este polimorfismo podría alterar la regulación del splicing y de esta manera repercutir en los niveles de expresión de APRIL. Además, los niveles séricos de APRIL aumentan durante el rechazo agudo, por lo tanto, su cuantificación podría ser empleada para el diagnóstico no invasivo de rechazo. Por otra parte, la elevación de la expresión génica de los receptores R-BAFF y TACI se asocia con un mayor riesgo de desarrollo de anticuerpos anti-HLA donante específicos. 3) Los niveles de expresión de miR-150-5p están disminuidos en trasplantados renales con rechazo agudo. Los análisis bioinformáticos de los genes diana de miR-150-5p sugieren que la sobre-expresión de MBD6 y de genes de la vía de señalización del receptor EGF, podrían estar involucrados en la desregulación de la expresión de genes implicados en el rechazo agudo. 4) Los análisis bioinformáticos muestran la importancia de la vía de señalización IRF/STAT1 de respuesta a interferones durante el rechazo mediado por anticuerpos (RMA). A nivel celular, la infiltración de linfocitos NK y monocitos en el aloinjerto, así como el aumento de la maduración de células dendríticas, ejercen un papel central en la mediación del daño que sufre el injerto durante el RMA. Los modelos basados en algoritmos TSP muestran una alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico no invasivo del RMA, que junto con el bajo coste y facilidad de interpretación, hace de los modelos TSP idóneos para su utilización en laboratorios clínicos de rutina.
Open Access
Cicatrización de la piel de dorada (Sparus aurata L.)
(Universidad de Murcia, 2023-10-26) Albaladejo Riad, Nora; Cuesta Peñafiel, Alberto; Esteban Abad, María de los Ángeles; Escuela Internacional de Doctorado
Esta Tesis Doctoral se enfoca en el estudio del proceso de cicatrización de la piel de la dorada (Sparus aurata), una especie con gran importancia económica en el Mediterráneo. La investigación se divide en dos partes: la Parte I (Capítulos 1 y 2) se centra en el estudio celular del proceso de cicatrización de heridas cutáneas, estableciendo modelos in vitro para analizar el proceso de re-epitelización y la liberación de trampas extracelulares. Por otro lado, la Parte II (Capítulos 3 y 4) se enfoca en el uso de productos naturales, como inyecciones cutáneas o suplementos dietéticos, con el objetivo de mejorar la cicatrización de heridas en la piel de la dorada in vivo. En el Capítulo 1 se llevaron a cabo estudios microscópicos y genéticos del proceso de cicatrización de heridas en la piel de dorada in vitro. El explante de piel de aleta caudal de dorada presenta características de migración celular colectiva durante la fase inicial de cultivo de 3 días, caracterizada por la preservación de las uniones célula-célula y el movimiento celular dirigido. Los hallazgos presentados en este estudio proporcionan evidencia convincente de un proceso de Transición Epitelial-Mesenquimal (EMT) que ocurre durante un período de cultivo de 7 días de explantes de piel de aleta caudal de dorada, lo que lo convierte en un buen modelo in vitro para estudios de cicatrización de heridas. En el Capítulo 2 se investigó la formación de trampas extracelulares (ETs) por parte de los leucocitos del riñón cefálico de la dorada. Se usaron diferentes estimulantes (β-glucano de Saccharomyces cerevisiae (BG), lipopolisacárido de Escherichia coli (LPS), ionóforo de calcio A23187 (ICa), forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) y ácido poli-inosínico:poli-citidilico (Poli I:C)) y se observó la liberación de ETs, los cuales son estructuras fibrosas formadas por ADN, histonas y proteínas antimicrobianas. Todos los estimulantes usados en este estudio han inducido la liberación de trampas extracelulares y actividad mieloperoxidasa por parte de leucocitos de riñón cefálico de dorada, y cada estimulante ha generado una respuesta específica, siendo el más eficiente entre los usados el PMA (500 ng/mL) tras 1 hora de incubación. Además, las trampas extracelulares liberadas por los leucocitos de riñón cefálico de dorada exhibieron actividad mieloperoxidasa asociada. En el Capítulo 3, se evaluaron los efectos de los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) en la respuesta inflamatoria en la piel. Se encontró que el ácido acético era el AGCC más efectivo en la reducción de la inflamación inducida por carragenina, lo que sugiere su potencial uso como agente anti-inflamatorio en la cicatrización de heridas en peces. En el Capítulo 4, se estudió la suplementación dietética con micropartículas de fibroína de seda para mejorar la cicatrización de heridas en la piel de la dorada. Se observó que la dieta enriquecida con SF mejoraba la proporción de cierre de las heridas y promovía la proliferación celular, la fase inflamatoria y la expresión de genes relacionados con la reparación de tejidos. Estos hallazgos sugieren que la fibroína de seda podría tener potencial terapéutico en la mejora de la cicatrización de heridas en peces.
Open Access
Comorbilidades en pacientes psoriásicos : estudio retrospectivo y comparativo de cohortes
(Universidad de Murcia, 2021-11-15) Fatás Lalana, Belén María; Teresa Martínez Menchón; Ana Belén Pérez Oliva; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
La psoriasis es una enfermedad crónica e inflamatoria en piel que provoca el enrojecimiento, inflamación y descamación de ésta. Los objetivos de la presente tesis fueron el estudio de las comorbilidades asociadas a la psoriasis y la influencia de éstas en la respuesta al tratamiento con fototerapia de los pacientes, así como, el estudio del efecto de la glucemia y los fármacos antidiabéticos en la inflamación crónica en piel en modelos de pez cebra y organoides de epidermis humana. Para ello se realizó un estudio que incluyó a 300 sujetos, 200 pertenecieron al grupo de pacientes con psoriasis y 100 al grupo control. Todos los sujetos cumplieron los requisitos de ser mayores de 18 años, haber firmado el consentimiento informado y tener una analítica de menos de 12 meses desde el inicio del estudio. En el caso de los pacientes con psoriasis debieron ser diagnosticados de psoriasis en placas y generalizada y haber recibido tratamiento con fototerapia en los últimos 10 años. Asimismo, en el caso del grupo control los pacientes debían no padecer psoriasis. En todos los pacientes se estudiaron las comorbilidades presentadas mediante informes del médico de atención primaria, informes de especialistas y medicación crónica. Para el estudio de la fototerapia en pacientes con psoriasis se tuvo en cuenta el tipo de fototerapia administrada, el número de ciclos administrados, el PASI inicial y final y la mejoría de la psoriasis con el tratamiento. Además, se utilizó como modelo animal el pez cebra de la línea mutante spint1a y modelos organotípicos de epidermis humana en 3D. Los resultados mostraron una mayor incidencia de patología psiquiátrica, enfermedad hepática, enfermedad renal, hipertensión, patología cardíaca, patología vascular, diabetes, patología gastrointestinal, enfermedades autoinmunes e infecciosas, dislipemia y artritis psoriásica en pacientes con psoriasis frente al grupo control. Sin embargo, no se mostró una diferencia estadísticamente significativa de la incidencia de osteoporosis, enfermedades dermatológicas, hiperuricemia, artritis y anemia entre ambos grupos. La incidencia de las comorbilidades mostró una diferencia significativa a partir de los 40 años de edad en los pacientes con psoriasis pudiendo ser indicativo de un envejecimiento prematuro. La fototerapia resultó ser un tratamiento eficaz en la psoriasis moderada-grave logrando un blanqueamiento total en más de 3 de cada 10 pacientes, mostrando las mujeres una mejor respuesta al tratamiento frente a los hombres. La UVBBE fue el tipo de fototerapia más eficaz. La enfermedad hepática, hipertensión, patología cardíaca, patología vascular y diabetes mostraron un peor pronóstico para lograr un PASI100 en el tratamiento con fototerapia. Los pacientes que padecieron anemia o enfermedad hepático presentaron un riesgo incrementado de fracaso terapéutico. Finalmente, el pez cebra y los modelos organotípicos de psoriasis humana en 3D demostraron el influjo de la comorbilidad diabética en psoriasis. En concreto, demostraron la influencia tanto de los niveles de glucemia, como del transporte a través de su receptor GLUT1 en la inflamación en piel. Además, se observó un efecto directo antiinflamatorio de la inhibición de DPP-4 en los queratinocitos.
Open Access
Estudio de HLA de clase I y KIR en artritis reumatoide
(Universidad de Murcia, ) Mesa del Castillo Bermejo, Pablo; Linares Ferrando, Luis Francisco; Gimeno Arias, Lourdes; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCION La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad crónica de causa desconocida y naturaleza autoinmune. Hasta ahora se han encontrado locus de susceptibilidad en región del complejo mayor de histocompatibilidad humano (HLA) de clase I y fundamentalmente de clase II. Los receptores KIR (Killer immunoglobulin like receptors) reconocen fundamentalmente moléculas HLA de clase I entre otros ligandos, y son capaces de activar la célula NK y provocar una respuesta inmune inicialmente innata pero con posibilidad de derivar en una respuesta adaptativa persistente, típica de la AR. Los receptores KIR se heredan de una manera compleja, agrupándose en dos haplotipos fundamentales, el haplotipo A que codifica para un número limitado de receptores principalmente inhibidores y el haplotipo B que presenta mayor variabilidad y más genes que codifican para receptores activadores. Cada individuo dispone de dos copias de genes KIR, compuestos por una porción centromérica y otra telomérica. MATERIAL Y METODOS Estudio caso control de frecuencias alélicas de HLA de clase I, genes KIR y haplotipos KIR en 151 pacientes con AR y 150 controles. Se extrajo ADN de muestras de sangre periférica y se genotipo utilizando técnica PCR-SSP. Se buscaron diferencias en frecuencias alélicas entre casos y controles así como asociaciones de alelos en los pacientes con características clínicas, de actividad inflamatoria, calidad de vida, resultados de laboratorio y perfil de tratamiento. RESULTADOS Se encontró asociación significativa de la AR con haplotipo KIR B, el gen KIR2DS3 presente a este haplotipo y también con el haplotipo centromérico B01 respecto a la población control. Los pacientes con haplotipo B centromérico presentaron asociación con el grupo homocigoto para Bw6 del HLA de clase I respecto a controles, menos nódulos reumatoides, menor positividad de FR y menor proporción de doble positividad (FR más ACPA) en pacientes. También se asoció a menores valores medios de FR, ACPA, C3 y C4. En pacientes con KIR 2DS3 se obtuvo un valor medio menor de FR. HLA-A*03 se asoció a seropositividad para FR o ACPA en pacientes. CONCLUSIONES Los resultados del estudio del binomio HLA de clase I-KIR en artritis reumatoide apuntan a una mayor influencia de los genes KIR y haplotipo KIR en nuestra población, sobre todo en pacientes seronegativos sin nódulos reumatoides; sería interesante explorar la influencia del grupo Bw6 y otros ligandos KIR en la patogenia de la artritis reumatoide.
Open Access
Estudio de la interleucina-18 y otras citoquinas en el líquido sinovial de pacientes con artritis idiopática juvenil
(Universidad de Murcia, 2023-06-20) Lorente Sánchez, María José; Sánchez Solís de Querol, Manuel; Pelegrín Vivancos, Pablo; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCIÓN: El inflamasoma es un complejo multiproteico citoplasmático que induce una reacción inflamatoria tras liberar citoquinas como la interleucina (IL)-1β y la IL-18. La IL-18 puede ser bloqueada por una proteína con alta afinidad denominada proteína de unión a IL-18 o IL-18 binding protein. El disbalance IL-18/IL-18BP con aumento de IL-18 libre se ha asociado a enfermedades inmunomediadas y se correlaciona con la gravedad y la actividad, proponiéndose como posible diana terapéutica. OBJETIVOS: Estudiar la implicación de productos del inflamasoma y otras citoquinas en artritis idiopática juvenil mediante su detección en el líquido sinovial. MATERIAL Y MÉTODOS: Se recogieron desde enero 2019-enero 2021 muestras de líquido sinovial de una cohorte de pacientes con diagnóstico de Artritis Idiopática Juvenil, infección articular y artrosis del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) de Murcia, previa firma del consentimiento informado y aprobación del Comité de Ética. Se estudiaron variables clínicas como edad, sexo, marcadores autoinmunitarios, articulación afecta, debut o brote, citobioquímica y microbiología del líquido sinovial, antecedentes personales y familiares, y tratamiento; y se analizaron un total de 16 citoquinas/quimiocinas en el líquido sinovial (IL-18, IL-18BP, INFγ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-6, RANKL, TNFα, MIP-1α y MIP-1β). La proteína de unión a la IL-18 (IL-18BP) se estudió mediante enzimoinmuno análisis de absorción (ELISA), y el resto mediante un ensayo múltiple tipo multiplex. También se calculó el ratio entre la concentración de IL-18 e IL-18BP para cada paciente. Se realizó análisis estadístico. RESULTADOS: Se recogieron un total de 61 muestras de líquido sinovial, que correspondían a 46 pacientes con AIJ (1 AIJ sistémica, 34 AIJ oligoarticular, 1 AIJ poliarticular FR positivo, 6 AIJ poliarticular FR negativo, 2 AIJ psoriásica y 2 artritis asociada a entesitis) y se compararon con 11 pacientes con artrosis y 4 pacientes con artritis infecciosa. En el grupo AIJ, el 84,78% de las muestras se recogieron en brote, sobre todo en rodilla (91,3%). La citobioquímica del líquido presentaba un recuento leucocitario medio de 9653 células/μL (62,81% mononucleares), con cultivo negativo. Presentaban antecedentes personales de otras enfermedades autoinmunes el 43,48% y familiares del 28,26%. La mitad recibía tratamiento previo a la recogida, sobre todo combinación de FAMEs clásicos y FAMEs biológicos. El aumento significativo de IL-18 e IL-18BP de AIJ frente a artrosis no se objetivó al calcular el ratio. Sin embargo, sí se obtuvo un aumento significativo del ratio IL-18/IL-18BP en AIJ oligoarticular frente a AIJ poliarticular (p=0,002). El resto de citoquinas presentaron concentraciones mayores en el grupo AIJ frente al resto, pero no fueron significativas. En AIJ, la IL-18 (p=0,04), IL-10 (p= 0,01), IL-1RA (p= 0,04), y MIP-1β (p= 0,001) estaban significativamente elevadas en los pacientes de debut frente a brote. Sin embargo, la IL-12p70 (p= 0,02), IL-2 (p= 0,01) y RANKL (p= 0,04) estaban significativamente más elevadas en brote. El ratio IL-18/IL-18BP se encontraba significativamente elevado en los pacientes sin tratamiento en el momento de la recogida (p=0,002). CONCLUSIÓN: Nuestro estudio analiza por primera vez la concentración de IL-18, IL-18BP y el ratio de ambas en líquido sinovial. El ratio IL-18/IL-18BP estaba elevado significativamente en AIJ oligoarticular frente a AIJ poliarticular y en los pacientes sin tratamiento previo a la recogida, lo que puede significar una mayor concentración de IL-18 libre en esos casos. La medición del ratio IL-18/IL-18BP o la IL-18 libre en líquido sinovial podría emplearse como marcador de severidad y diferenciador entre artropatías y terapias encaminadas a bloquear IL-18 podrían ser de utilidad para tratar a los pacientes con AIJ.
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Evaluación inmunológica en pacientes con fibromialgia Tipo 1
(Universidad de Murcia, 2019-12-04) Salgado Cecilia, María Gema; Martínez García, Pedro; García Alonso, Ana Mª; Gimeno Arias, Lourdes; Escuela Internacional de Doctorado
OBJETIVOS. 1. Determinar el papel de los mecanismos autoinmunes en la patogenia de la fibromialgia. Evaluar la presencia de anticuerpos anti-serotonina, anticuerpos anti-gangliósidos y otros autoanticuerpos en sangre periférica de pacientes con fibromialgia y controles sanos así como analizar la variación de estos anticuerpos en función del estado clínico de los pacientes. 2. Evaluar la presencia de disbalances entre citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias y estudiar la asociación de los polimorfismos genéticos de estas citoquinas con la susceptibilidad y manifestaciones clínicas de la fibromialgia. 3. Analizar el polimorfismo de los genes KIR y HLA de clase I y clase II en pacientes con fibromialgia y controles sanos con el objetivo de conocer su posible asociación con la susceptibilidad y manifestaciones clínicas de la enfermedad. METODOLOGÍA Determinación de anticuerpos IgG e IgM anti-serotonina: ELISA tipo sándwich y anticuerpos anti-Gangliósidos mediante dot-blot. Los niveles de serotonina en suero se determinaron mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La determinación de citoquinas en suero se realizó con tecnología Luminex, con la excepción del TGF-β1 que se realizó mediante ensayo ELISA tipo sándwich. El polimorfismo de los genes de las citoquinas se determinó mediante un ensayo de discriminación alélica con sondas Taqman específicas. El estudio del polimorfismo VNTR del gen de la IL-4 se realizó PCR convencional empleando cebadores específicos para amplificar la región de interés El tipaje de los genes HLA-A, B, C, y KIR se realizó mediante las técnicas de PCR-SSO y PCR-SSP. CONCLUSIONES: 1. Los niveles de serotonina se encuentran disminuidos en el suero de los pacientes con FM pero no parecen asociarse con la severidad de las manifestaciones clínicas. 2. La prevalencia de anticuerpos anti-serotonina IgG e IgM y los niveles séricos de estos anticuerpos se encuentran aumentados en pacientes con FM respecto a la población sana. 3. La prevalencia de anticuerpos anti-serotonina IgG e IgM es mayor en pacientes de FM con niveles de ansiedad moderada, severa o grave que en pacientes con niveles de ansiedad leve, lo que sugiere una asociación de estos anticuerpos con formas más severas de la enfermedad. 4. Los niveles séricos de las citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias estudiadas son similares en pacientes con FM y en la población sana. 5. Los SNPs de los genes de las citoquinas pro-inflamatorias y anti-inflamatorias estudiadas no parecen asociarse con la susceptibilidad al desarrollo de FM. 6. El genotipo AA del SNP rs16944 del gen de la IL-1β se asocia con una manifestación grave o muy grave de la enfermedad según el test FIQ en pacientes con FM, por el contrario, la presencia del genotipo GA de este SNP se asocia con una manifestación más leve de la enfermedad. 7. El genotipo AA del SNP rs1143634 del gen de la IL-1β se asocia con una manifestación moderada o grave de la FM según el test CGI. 8. El genotipo 3R/3R de la región VNTR del gen de la IL-4 se asocia con una peor calidad de vida en pacientes con FM, por el contrario el genotipo 2R/3R se asocia a una mejor calidad de vida de los mismos. 9. El genotipo GG del SNP rs1800469 del gen del TGF-β se asocia a una mejor calidad de vida de los pacientes con FM, por el contrario el genotipo AG se asocia con niveles de ansiedad severa o grave en estos pacientes. 10. El polimorfismo de los genes KIR y HLA no se asocia con la susceptibilidad a desarrollar FM ni con las manifestaciones clínica de la misma. 11. Este trabajo confirma que la FM, además de estar condicionada por factores genéticos, desde el punto de vista inmunológico puede tener mecanismos etiopatogénicos diferentes como son los fenómenos autoinmunes o los fenómenos de desregulación de los mecanismos inflamatorios, hecho que puede tener relevancia clínica a la hora de evaluar adecuadamente a los pacientes así como para poder diseñar tratamientos más personalizados.
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Formas moleculares de acetilcolinesterasa de fracciones microsomales de músculo esquelético : diferencias en su glicosiliación e interacción con anticuerpos / Francisco Javier Campoy Menéndez ; director Cecilio Jesús Vidal Moreno.
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular,, 1992) Campoy Menéndez, Francisco Javier
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Funcionalidad de las poliaminas sobre el desarrollo del sistema inmune y la microbiota intestinal durante el periodo de lactancia: influencia del procesado de las fórmulas infantiles en el contenido en poliaminas y en la liberación de péptidos durante la digestión: ensayo de funcionalidad empleando como modelo ratones BALB/cOlaHsd lactantes
(2014-12-15) Gómez Gallego, Carlos; Ros Berruezo, Gaspar Francisco; Periago Castón, María Jesús; Collado Amores, Mª Carmen; Facultad de Veterinaria
Introducción: La lactancia materna es la forma de alimentación recomendada, siempre que sea posible, al menos durante los primeros seis meses de vida. Si esto no es posible, existen fórmulas artificiales con las que poder cubrir los requerimientos nutricionales de los recién nacidos. La exposición a determinados factores ambientales, incluidos factores nutricionales, durante el periodo intrauterino y los meses posteriores al nacimiento podría determinar la susceptibilidad a determinadas enfermedades en etapas posteriores de la vida. Se ha demostrado una menor susceptibilidad a determinadas enfermedades en niños alimentados con leche materna frente a aquellos que lo han sido con fórmulas infantiles, incluyendo menor riesgo de enfermedades gastrointestinales y respiratorias, y menor riesgo de obesidad y diabetes en la edad adulta. El hecho de que estos cambios se prolonguen hasta la edad adulta sugiere que la exposición temprana a factores nutricionales podría estar asociada a cambios epigenéticos. Las poliaminas son policationes orgánicos presentes en todas las células de mamíferos. Su interés es debido a su función, siendo esenciales para la proliferación y la diferenciación celular. Su presencia ha sido demostrada en la leche humana siendo las poliaminas más abundantes la espermidina y la espermina. Objetivos: El objetivo de la presente Tesis ha sido evaluar si la adición de poliaminas tras el procesado podría mejorar el desarrollo del sistema inmune y producir un patrón de colonización microbiana similar al obtenido mediante lactancia materna utilizando como modelo ratones BALB/cOlaHsd. Métodos: 60 crías de ratón de 14 días de edad fueron distribuidas aleatoriamente en cuatro grupos: 1) ratones sin destetar con lactancia normal; 2) ratones destetados precozmente alimentados con fórmulas infantiles; y 3) tres grupos distintos de ratones destetados precozmente alimentado con una fórmula infantil suplementada con concentraciones crecientes de poliaminas. Se analizó la microbiota intestinal mediante fluorescent in situ hybridization (FISH) y detección por citometría de flujo y PCR cuantitativa. Además, se analizaron poblaciones linfocitarias mediante citometría de flujo y la expresión de genes relacionados con la activación, proliferación y diferenciación de linfocitos T y B. Resultados y Conclusiones: En relación a la microbiota, nuestros resultado muestran, por primera vez que nosotros sepamos, que la suplementación de las fórmulas infantiles con poliaminas modula las poblaciones bacterianas de Bacteroides-Prevotella, Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. y bacterias similares a Akkermansia, incluida A. muciniphila, hasta niveles parecidos a los del grupo alimentado con lactancia normal en un efecto que parece ser dependiente de la dosis de poliaminas administrada. De forma similar a lo que ocurría con la microbiota intestinal, la suplementación de la fórmula infantil con poliaminas induce cambios en las poblaciones linfocitarias y la expresión génica, incrementándose el porcentaje de linfocitos B en sangre, y linfocitos CD4+, CD8+ y B en bazo, en una proporción dependiente de la dosis de poliaminas; y reduce las diferencias en la expresión de los genes Cd1d1, Cd40, Hdac5, Hdac7, Clcf1 y Tlr4 cuando se compara con lactancia normal. Los resultados obtenidos de este estudio ayudan a comprender la compleja interrelación entre la nutrición, el sistema inmune y la microbiota intestinal durante el periodo de lactancia. Los resultados obtenidos deberían ser estudiados en humanos, ya que de demostrarse efectos similares, la suplementación de las fórmulas infantiles con poliaminas podría contribuir a un mejor desarrollo, con un efecto beneficioso sobre la salud, de niños alimentados con fórmulas. ABSTRACT Introduction: As has been recommended by a large number of health or breastfeeding organisations, whenever feasible, infants should be fully breastfed for at least six months. If full breastfeeding is not possible, safe and suitable infant formula should be used. According to the early programming theory, environmental exposure, including nutritional exposure during the intrauterine stage and during the perinatal months of life, might make children more susceptible to some diseases later in life. Indeed, it has been demonstrated that infants who have been breastfed have a lower susceptibility to some diseases than infants who were fed with artificial manufactured formulas. The fact that these changes are extended into adult life suggests than early exposure to nutritional factors are associated with epigenetic changes. Polyamines are organic polycations that are present in all mammalian cells. They have significant interest due to their reported biological roles in eukaryotic cells, because they are essential to cell proliferation and differentiation. Their presence has been demonstrated in human milk as being the most abundant spermidine and spermine polyamines. Objectives: the main objective of the present thesis was to evaluate whether the addition of polyamines after processing could improve immune system development and the microbial colonization pattern in a similar way that breast feeding do. Methods: A total of 60 mice pups (14-days old) were randomly assigned to four-day intervention groups as follows: 1) breastfed unweaned pups; 2) early weaned pups fed with infant formula; and 3) three different groups of early weaned pups fed with infant formula supplemented with increasing levels of polyamines. After a four-day diet intervention, samples were obtained. Microbiota composition was analysed by fluorescent in situ hybridization (FISH) coupled with flow cytometry detection, and by quantitative PCR targeted at 14 bacteria genus and species. The lymphocyte populations in the blood, spleen and mesenteric lymph nodes were analysed by fluorescence activated cell sorting (FACS); moreover, the expression of genes encoding T-cell and B-cell activation, proliferation and differentiation, as well as Toll-like receptors (TLRs), in the small intestinal tissues was assessed using a 96-well RT-PCR arrays. Results and Conclusions: Regarding the microbiota composition, independently of the analysis methods, our results showed, for the first time to our knowledge, that supplementation of infant formula with polyamines modulates Bacteroides-Prevotella, Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. and Akkermansia-like bacteria groups, including A. muciniphila, to levels closely related to normal lactation group, in a dose-dependent manner and immune system parameters in infant formula feeding compared to mice with normal lactation. Similar to microbiota, the supplementation of manufactured infant formula in polyamines induces changes in lymphocyte populations and gene expression, increasing the percentage of B-cells in blood and CD4+, CD8+ and B-cells in the spleen in a dose-dependent manner, and it reduces differences in the expression of Cd1d1, Cd40, Hdac5, Hdac7, Clcf1 and Tlr4 genes compared with normal lactation. The results obtained from this study highlight the complex interplay between nutrition, the immune system and microbial colonization patterns during lactation. Such an effect requires further investigation in human infants because supplementation of an infant formula in polyamines might contribute to healthy gastrointestinal tract development in children fed with commercial formula.
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Functional characterization of purinergic receptors in the differentiation and activation of macrophages = Caracterización funcional de recptores purinérgicos en la diferenciación y activación de macrófagos
(2016-02-12) Barberá Cremades, María; Pelegrín Vivancos, Pablo; Facultad de Biología
Resumen Esta Tesis estudia la caracterización de diferentes receptores purinérgicos, principalmente P2X7, en células presentadoras de antígeno de la estirpe mieloide mononuclear fagocítica (monocitos, macrófagos peritoneales y macrófagos derivados de médula ósea). En concreto, se determina como la señalización purinérgica afecta a la diferenciación de los macrófagos, la producción de eicosanoides y de TNF-α, en estados tanto pro-inflamatorias y como de inmunosupresión. Para ello, se emplearon diferentes estímulos celulares; señales de patógenos, principalmente lipopolisacarido (LPS) bacteriano, señal que activa a los macrófagos a través de los receptores tipo toll 4; y señales de daño celular, principalmente ATP y adenosina. Siendo los objetivos concretos de esta Tesis: 1) Estudiar cómo afecta la señalización purinérgica a la diferenciación de los macrófagos; 2) Analizar la relación entre la activación del receptor P2X7 en macrófagos y la producción de eicosanoides; 3) Determinar cómo el receptor P2X7 regula la liberación del factor de necrosis tumoral (TNF)-α en macrófagos extenuados. La metodología empleó macrófagos peritoneales humanos y monocitos de sangre periférica de donantes sanos y pacientes con un proceso séptico severo de origen abdominal; muestras de ratones de la cepa C57BL/6 y deficientes para los receptores a estudio (P2rx7-/- y P2rx4-/-) que se emplearon para estudios tanto in vivo como in vitro. En la mayoría de ensayos se emplearon macrófagos derivados de médula ósea de ratón. Los diferentes macrófagos fueron sometidos a distintos protocolos de estímulo según el objetivo abordado: diferentes dosis de LPS para estudiar la respuesta ante situaciones inflamatorias, o polarización de macrófagos a M1 con LPS e interferon-o a M2 con interleuquina (IL)-4, para en todos los casos estimular con un nucleótido. De los estudios in vitro se analizó la cantidad de IL-1β, TNF-α, prostaglandina (PG) E2, tromboxano A2 y leucotrieno B4 liberada al medio mediante la técnica ELISA, la muerte celular cuantificando la actividad de lactatodehidrogenasa en los sobrenadantes celulares; la viabilidad celular mediante ensayos de reducción meatabólica del bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol; la cuantificación de la expresión relativa de los genes que codifican para los diferentes receptores y marcadores citoquímicos de interés, empleando la técnica de PCR-transcriptasa reversa a tiempo real, la cuantificación de marcadores de membrana específicos de macrófagos mediante citometría de flujo, y finalmente la actividad de la enzima convertidora de TNF-α (TACE) y la actividad catepsina B, mediante técnicas fluorométricas. Los estudios in vivo realizados en ratón analizaron la actividad del receptor P2X7 tras la administración intraperitoneal de LPS, cuantificando IL-1β y TNF-α en lavados peritoneales empleando la técnica ELISA, la presencia de ATP extracelular en peritoneo se cuantificó mediante bioluminiscencia, y la medición de la temperatura rectal en un modelo inducido de sepsis mediante una sonda térmica. Resultados y conclusiones: En esta Tesis se demuestra que la señalización purinérgica es capaz de reducir el número de macrófagos diferenciados de médula ósea, resultando en una regulación positiva de ciertos marcadores M2, derivando en un fenotipo específico de macrófago. En los macrófagos maduros, la activación de P2X7 induce la liberación del mediador lipídico PGE2, siendo P2X7 importante en la respuesta febril, un signo clásico asociado con el proceso inflamatorio. Además, la señalización mediante el receptor P2X7 en macrófagos M1 extenuados es capaz de controlar la liberación clásica de TNF-α. Estos resultados tienen implicaciones clínicas, ya que el receptor P2X7 emerge como una diana terapéutica prometedora para la fiebre y su potenciación durante inmunosupresión podría aumentar la inmunidad en los procesos sépticos. Summary This Thesis studies the characterization of different purinergic receptors, mainly P2X7, analyzing their functions in antigen presenting cells of mononuclear phagocytic myeloid lineage (monocytes, peritoneal macrophages and bone marrow derived macrophages). Precisely, the Thesis determine how purinergic signaling affects macrophage differentiation, eicosanoids and tumor necrosis factor (TNF)-α release, during both proinflammatory and immunosuppressive conditions. Therefore, cells were treated with bacterial products, mainly lipopolysaccharide (LPS), which specifically activates Toll-like receptor 4, and signals of cell damage, mainly ATP and adenosine. Objectives: 1) To study how purinergic signaling affects macrophage differentiation; 2) To analyze the association between the activation of P2X7 in macrophages and the production of eicosanoids; 3) To identify how P2X7 receptor regulates TNF-α release during immune extenuation. Methods: The experiments were performed using peritoneal human macrophages and peripheral blood monocytes of healthy subjects and patients with severe sepsis; mice samples from strain C57BL/6 and the knockout for the genes encoding the receptors to study (P2rx7-/- and P2rx4-/-), these mice were used for both in vivo and in vitro studies. Mice bone marrow derived macrophages were used in almost all the experiments of this thesis. The different macrophages were stimulated with different protocols to address the different objectives: different doses of LPS to mimic inflammatory conditions; LPS and interferon- to polarize macrophages to M1 and with interleukin (IL)-4 to polarize to M2. The amount of IL-1β, TNF-α, prostaglandin (PG) E2, thromboxane A2 and leukotriene B4 released, were measured by ELISA; cell death quantification was measured by the activity of lactate dehydrogenase in cells supernatants; macrophage viability was measured by the metabolic reduction of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide; relative expression of genes encoding for the desired receptors and markers was quantified by real-time reverse-transcription PCR; the quantification of specific macrophage membrane markers was analyzed by flow cytometry; the converting TNF-α enzyme (TACE) and cathepsin B activity were measured by fluorometric techniques. In vivo mouse studies to study P2X7 receptor activity after intraperitoneal administration of LPS was analyzed by ELISA, measuring IL-1β and TNF-α in peritoneal lavage; detection of extracellular ATP in peritoneum was quantified by bioluminescence; rectal temperature was measured in a sepsis model. Results and Conclusions: this Thesis demonstrates that purinergic signaling is able to reduce the number of differentiated macrophages from bone marrow, which display upregulation of certain M2 markers, resulting in a specific phenotype of macrophage. In mature macrophages, ATP activating P2X7 receptor induces the release of the lipid mediator PGE2, being P2X7 important for the febrile response, a classical signal associated with the inflammatory process. Furthermore, P2X7 receptor signaling in extenuated M1 macrophages is able to control the classical release of TNF-α. These findings have important clinical implications, since P2X7 receptor emerges as a promising target for fever, however its potentiation during immunosuppression could boost immunity in septic processes.
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Impacto de la exposición al plomo sobre la bioacumulación, el estrés oxidativo y la inmunotoxicología en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss)
(Universidad de Murcia, 2025-11-24) Pérez Mesa, Henry Javier; Guardiola Abellán, Francisco Antonio; Sin departamento asociado; Escuela Internacional de Doctorado
El Plomo (Pb) es un metal con gran toxicidad, que representa una amenaza crítica para sistemas acuáticos pudiendo bioacumularse, causar estrés oxidativo y provocar alteraciones biológicas en peces teleósteos. Es de vital importancia conocer sus efectos negativos y el impacto que puede producir para la salud tanto de la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss), como la de los seres humanos. Por otro lado, la trucha arcoíris es una de las especies más pescadas con fines comerciales, que se encuentra en la mayoría de los lagos de países como Ecuador, Perú, Argentina y Colombia. Sin embargo, es considerada en España como una especie invasora por la amenaza que representa al alterar la pureza genética de especies silvestres autóctonas. En el Capítulo 1 de este estudio se expuso a la trucha arcoíris frente al Pb mediante la dieta, para los experimentos se utilizaron 72 ejemplares de trucha arcoíris con un peso promedio de 160 g, los peces fueron mantenidos en tanques de 750 L, con fotoperiodos de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad a temperatura de 4°C. La exposición al Pb se llevó a cabo durante 21 días, el animal fue alimentado a diferentes concentraciones en tres grupos experimentales como sigue: grupo control: (no expuesto, 0 mg Pb kg dieta -1), grupo Pb-120: (120 mg Pb kg dieta -1) y grupo Pb-240: (240 mg Pb kg dieta -1). Las muestras de los tejidos fueron tomadas a los 15 y 21 días del experimento. Posteriormente se examinó los efectos del Pb provocado en trucha arcoíris, analizando índices organosomáticos en hígado y bazo. Además, se analizó el impacto del Pb a nivel sanguíneo donde se valoró parámetros hematológicos y metabolitos bioquímicos. También se analizó expresión de genes claves de desintoxicación en el higado (mt-a, mt-b, cyp1a, cyp2k1, cyp2m1 y cyp3a27), e inflamación en bazo, y riñón cefálico (il-21, tnf-α, ifn-1 e il-6). El Capítulo 2 de esta tesis se centra en evaluar la respuesta inmunitaria innata mediada por tejido linfoide asociado a mucosas (MALT, en inglés mucosa-associated lymphoid tissue) en trucha arcoíris tratadas con una dieta con diferentes concentraciones de Pb. Se evaluaron cambios en la expresión de varios genes (igm, igt, ctsD, tlr3 y tlr9) relacionados con las vías de defensa de este animal en órganos importantes como el intestino, la piel y las branquias. Las dietas utilizadas y suplementadas con plomo fueron: dieta 0 (no expuesta, grupo control), dieta 120 (120 mg kg dieta-1) y dieta 240 (240 mg kg dieta-1) durante 15 y 21 días. En resumen, la dieta con Pb causó alteraciones patológicas en los niveles de glóbulos rojos, glóbulos blancos, hemoglobina (Hb), hematocrito (Hct), hemoglobina media (MCH), volumen corpuscular medio (MCV) y hemoglobina media (MCHC). El nivel de toxicidad fue directamente proporcional al aumento de biomarcadores séricos como CHO, BILT y BILD, mientras que, el aumento de TGO y la disminución de TGP podrían indicar daño hepático. Además, la dieta con Pb modificó genes de desintoxicación e inflamación Por otro lado, en intestino se observó una sobreexpresión de igm, igt, y ctsD. Contrariamente, en piel se mostró disminución de la expresión de igt. En branquias la expresión de igt con la expresión de ctsD, tlr3 y tlr9 se correlacionaron positivamente. Estos hallazgos destacan la importancia de comprender tanto los mecanismos moleculares de toxicidad del Pb así, como las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas influenciadas por los efectos del este metal. Nuestros resultados sugieren la importancia de establecer protocolos que eviten la contaminación por metales pesados.
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Implicación pronóstica de la infiltración linfocitaria ovárica y peritoneal y de la respuesta inflamatoria sistémica en el cáncer epitelial de ovario
(Universidad de Murcia, 2024-10-17) Álvarez Abril, Beatriz Cristina; Ayala de la Peña, Francisco; García Martínez, Elena; Escuela Internacional de Doctorado
El cáncer de ovario epitelial avanzado presenta una elevada tasa de resistencia al tratamiento y una elevada mortalidad. Los últimos avances terapéuticos y la identificación de biomarcadores pronóstico y predictivos de respuesta han mejorado esta situación, aunque sólo en algunos grupos de pacientes. A pesar de los diversos estudios publicados sobre el impacto pronóstico de la relación entre el sistema inmunológico y el cáncer de ovario, los ensayos con inmunoterapia han presentado una eficacia muy limitada en el cáncer de ovario. No obstante, la mayoría de estos estudios carece de una selección de pacientes basada en el fenotipo inmunitario del tumor y, por otra parte, existe poca evidencia sobre el grado de heterogeneidad en el nivel de infiltración linfocitaria o respuesta inmune entre el tumor primario y las metástasis peritoneales o de otra localización, así como sobre su impacto pronóstico. El objetivo principal de esta tesis fue determinar el valor pronóstico y predictivo de respuesta al tratamiento en pacientes con cáncer de ovario avanzado de dos biomarcadores inmunes: la infiltración linfocitaria intratumoral (TIL) en tejido peritoneal y ovárico, y la inflamación sistémica determinada mediante la relación neutrófilo-linfocito (RNL). Como objetivo secundario se analizó la relación de la infiltración linfocitaria en ambos tejidos, así como con la inflamación sistémica. Se ha realizado un estudio retrospectivo y unicéntrico, con 143 pacientes diagnosticadas de carcinoma epitelial de ovario estadio III-IV con características representativas del diagnóstico y tratamiento actual de la enfermedad. Se obtuvieron muestras histológicas de tejido ovárico y tejido peritoneal con las que se construyeron microarrays de tejido (TMA). Para la determinación de TIL, se realizaron tinciones inmunohistoquímicas para CD3+ y CD8+ del TMA y se llevó a cabo un análisis cuantitativo morfométrico. Los valores de RNL se recogieron de los análisis de sangre previos a la cirugía o a la quimioterapia neoadyuvante. El nivel de infiltración de TIL se correlacionó con las características clínico-patológicas de las pacientes y con el nivel de RNL. Para el análisis de supervivencia se utilizó el método de Kaplan Meier y, para determinar el valor pronóstico y predictivo de las variables clínicas y biológicas se generaron modelos de regresión de riesgos proporcionales de Cox uni- y multivariantes. Como resultados, el tejido peritoneal mostró una mayor infiltración linfocitaria de TIL CD3 y TIL CD8 respecto al tumor primario, con una correlación positiva débil. Los niveles de TIL CD3+, de TIL CD8+ o ambos en tejido ovárico se asociaron positivamente con la situación funcional de las pacientes, con la edad inferior a 50 años, con las variantes patogénicas germinales o somáticas en BRCA. Los niveles de TIL en tejido peritoneal se asociaron positivamente con la cirugía de intervalo tras quimioterapia neoadyuvante. La RNL presentaba una relación inversa y significativa con el nivel de infiltración por TIL CD8+ en tejido ovárico. El nivel de TIL en tejido peritoneal no se asoció con la supervivencia global ni libre de progresión ni la respuesta a platino en las pacientes con cáncer de ovario avanzado, sugiriendo un valor inferior para evaluar la respuesta inmune. Por último, en modelos multivariantes que incluían características clínicas, se confirmó el valor independiente de la infiltración por TIL CD3+ y TIL CD8+ para la supervivencia global y el valor independiente de la RNL para la supervivencia libre de progresión y el intervalo libre de platino en el cáncer de ovario. La combinación de ambos biomarcadores inmunes, TIL en tejido ovárico y RNL, podría contribuir a una mejor identificación de pacientes consideradas de peor pronóstico con el fin de optimizar su tratamiento. .
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Implication of the NLRP3, NLRC4 and Pyrin inflammasomes in inflammatory diseases and sepsis
(2024-01-30) Hurtado Navarro, Laura; Pelegrín Vivancos, Pablo; Escuela Internacional de Doctorado
Los receptores llamados NLRP3 y NLRC4 y la proteína Pirina están en las células del sistema inmunitario innato. Su activación en los monocitos desencadena la liberación de factores proinflamatorios denominados citoquinas a través de un tipo especial de muerte celular que se conoce como piroptosis. Fallos en la correcta activación de los inflamasomas o mutaciones en los genes que los codifican resultan en un cambio en la estructura de los mismos y en la formación de complejos autoactivos. Esto desemboca en el desarrollo de enfermedades o síndromes autoinflamatorios. La sepsis es una enfermedad con una elevada prevalencia y mortalidad, siendo una de las principales causas de muerte en las unidades de cuidados intensivos de los hospitales. Sin embargo, actualmente no existen indicadores fiables que le indiquen a los médicos al evolución y pronóstico del paciente a tiempos tempranos. Tampoco existe una terapia eficaz dirigida contra los mecanismos fisiopatológicos de la sepsis. Por ello, uno de los objetivos principales de esta Tesis Doctoral ha sido avanzar en el estudio sobre los mecanismos de regulación de NLRP3 y Pirina en pacientes críticos con sepsis de origen abdominal. Se encontró que el receptor NLRP3 es un nuevo marcador pronóstico que predice la supervivencia de pacientes con sepsis. Además, se ha comparado el patrón de marcadores inflamatorios entre pacientes sépticos de origen intraabdominal y pacientes con COVID-19. Otro objetivo perseguido por esta Tesis Doctoral ha sido determinar la función de las mutaciones patogénicas que afectan a NLRP3, NLRC4 y MEFV en la activación de los inflamasomas. Por último, también se ha analizado la activación de los inflamasomas NLRP3 y Pirina en pacientes con leucemia monocítica crónica y esclerosis múltiple antes y después del tratamiento farmacológico. A nivel de metodología, en esta Tesis se ha caracterizado la función de los inflamasomas NLRP3, NLRC4 y Pirina en muestras de sangre humana. Concretamente, se recogieron muestras de pacientes con sepsis durante las primeras 24 horas de desarrollo de la sepsis y pacientes controles sometidos a una cirugía abdominal sin desarrollo de sepsis. Asimismo, se han estudiado pacientes portadores de mutaciones asociadas a enfermedades autoinflamatorias. Además, se ha evaluado el uso de terapias inhibitorias de los componentes del inflamasoma NLRP3 en pacientes con esclerosis múltiple recurrente-remitente y pacientes con leucemias mielomonocíticas crónicas. Cada estudio se ha acompañado con el análisis de donantes sanos. De las muestras de sangre completa se obtuvieron las células mononucleares de sangre periférica, que se cultivaron in vitro, y el plasma. Para obtener los resultados de cada uno de los estudios in vitro se emplearon diferentes técnicas, entre las que destacan: técnica ELISA (determinación de citoquinas liberadas por las células estimuladas) y la citometría de flujo (determinación de porcentaje de monocitos con oligómeros de ASC). Además, se generó una batería de vectores portadores de mutaciones patogénicas de NLRP3 y NLRC4. Para el estudio de su funcionalidad, se transfectaron en células HEK293T y se evaluó su expresión, el grado de autoactivación (oligomerización) y la conformación de los inflamasomas mediante electrotransferencia, citometría de flujo y la técnica BRET, respectivamente. En cuanto al estudio de los inflamasomas NLRP3 y Pirina en los pacientes sépticos de origen intraabdominal: nuestro estudio confirmó los resultados previos de nuestro grupo de investigación en los que se identificó un grupo de pacientes sépticos con una respuesta comprometida del inflamasoma NLRP3, pero no del inflamasoma Pirina. Sin embargo, ningún parámetro analizado, como los marcadores bioquímicos o los parámetros de severidad, permitió identificar este grupo de pacientes inmunocomprometidos. Los pacientes con una actividad comprometida del inflamasoma NLRP3 que sobrevivieron y se recuperaron de la sepsis, mejora-ron la respuesta del inflamasoma al alta hospitalaria, lo que indicó que la inmunosupresión de NLRP3 es un estado transitorio. Por tanto, hemos podido concluir que la supervivencia de los pacientes sépticos de origen intraabdominal a día uno se asocia con un incremento en la activación canónica del inflamasoma NLRP3 en los monocitos estimulados con LPS y ATP. El estudio de la cohorte de pacientes con COVID-19 mostró que las proteínas de fase aguda, procalcitonina y proteína C-reactiva, así como el indicador de desregulación inmune, ferritina, aumentaban acorde al incremento de la gravedad clínica. Además, cuando se evaluó la concentración en plasma de las citoquinas IL-6, IL-1Ra, IL-15 e IL-18 también se encontró un incremento dependiente de la severidad de la infección por COVID-19. Por tanto, nuestros resultados indican que la señalización mediada por IL-1 y de las citoquinas mediadas por ésta favorecen la respuesta inmunitaria frente a las infecciones bacterianas como la sepsis. Además, durante el desarrollo de esta Tesis se tuvo acceso a muestras de sangre de doce pacientes con EMRR en tratamiento con fingolimod. Tras evaluar la activación del inflamasoma NLRP3 en dichos pacientes, se observó que el tratamiento farmacológico redujo el porcentaje de monocitos con oligómeros de ASC en los pacientes respondedores a los seis meses de tratamiento. Sin embargo, en pacientes no respondedores, no sólo se encontró un aumento en el número de células con oligómeros de ASC, sino también un incremento de muerte celular por piroptosis. Además, en los sobrenadantes de las células mononucleares de sangre periférica sin estimular de los pacientes no respondedores se observó un aumento en la producción de TNF-α e IL-6 tras seis meses de tratamiento. En el caso de los pacientes respondedores, el nivel secretado de estas citoquinas fue incluso menor. Estos resultados sugieren que el tratamiento farmacológico con fingolimod no sólo inhibe la activación del inflamasoma NLRP3, sino que disminuye la ruta de señalización de NF-κB. Por tanto, la falta de inhibición de la activación del inflamasoma NLRP3 en pacientes con EMRR tratados con fingolimod podría identificar individuos refractarios al trata-miento, emergiendo así NLRP3 como un biomarcador. Por último, en esta Tesis hemos analizado una cohorte de pacientes con LMMC portadores o no de mutaciones en el oncogén KRAS. En los pacientes LMMC KRAS-mut se observó un porcentaje elevado (alrededor del 60%) de monocitos con oligómeros de ASC de forma basal. Además, tras la estimulación del inflamasoma NLRP3 con LPS y ATP no se produjo ningún incremento en la liberación de IL-1β. El inhibidor específico de NLRP3, MCC950, redujo significativamente los niveles de IL-1β secretados, pero no la formación de oligómeros de ASC. También, se observó que la activación basal de NLRP3 no estaba asociada a un aumento de muerte por piroptosis. Asimismo, se ha demostrado que el tratamiento con anakinra en un paciente con LMMC y mutación G12D en KRAS, no sólo redujo ex vivo el número de monocitos con oligómeros de ASC, sino también la concentración plasmática de ASC y la liberación de las citoquinas proinflamatorias IL-1β e IL-18. En conjunto, nuestro estudio demostró que los pacientes con LMMC y mutación en KRAS presentan una activación basal de inflamasoma NLRP3. Además, el tratamiento con inhibidores de la ruta de señalización de IL-1 podría considerarse como una opción terapéutica en aquellos pacientes refractarios a las terapias convencionales.
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Migración terapeútica de la quimiotaxis de células T CD4+ y T CD8+ mediante el uso de FTY720 / Claudia Giovanna Peñuelas Rivas; director, Antonio Muñoz Luna.
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Producción Animal,, 2005) Peñuelas Rivas, Claudia Giovanna
Open Access
Modelo de interacción célula NK-célula tumoral en la leucemia aguda en la infancia
(Universidad de Murcia, 2020-01-30) Martínez Sánchez, María Victoria; Minguela Puras, Alfredo; Escuela Internacional de Doctorado
Introducción: La leucemia aguda es el cáncer más frecuente en la infancia, representa el 27,1 % de todas las neoplasias que se diagnostican en niños de cero a catorce, entre ellas la leucemia linfoblástica aguda (LLA) comprende el 80 % de todas las leucemias, mientras que la leucemia mieloblástica aguda (LMA) representa el 16,5 %. La mejora de los tratamientos ha permitido el aumento de la tasa de supervivencia a cinco años de estos pacientes, situándolas en el 84 % en la LLA y en el 61 % en la LMA. Pero un 20 % de los pacientes con LLA y hasta un 50% de los pacientes con LMA recae y en estos casos la tasa de curación disminuye drásticamente, por lo que para estos pacientes son necesarias nuevas estrategias y aproximaciones terapéuticas que permitan conocer y seleccionar a aquellos con mayor riesgo de recaída. En este sentido cabe destacar que las células Natural Killer (NK) tiene una potente actividad antitumoral innata, tanto las células NK autólogas (del propio paciente) como las alogénicas en el contexto del trasplante de progenitores hematopoyéticos (TPH), debido a que determinadas combinaciones genéticas entre donante y receptor regulan la función de las células NK favoreciendo la lucha del injerto frente a la leucemia. A esto se une que las células NK son las más resistentes a la quimioterapia citotóxica, por lo que parece apropiado profundizar en el estudio de estas células y su interacción con las células leucémicas, para un mejor conocimiento de los mecanismos que regulan la función de la respuesta antitumoral que podría contribuir al desarrollo de nuevas terapias antitumorales personalizadas sin efectos secundarios indeseables. Objetivos: El objetivo principal de esta tesis es analizar el papel de la interacción entre la célula NK y la célula tumoral en pacientes pediátricos diagnosticados de leucemia aguda. Para ello se propone: 1) analizar el perfil genético los receptores KIR de células NK y la de sus ligandos HLA en pacientes y controles sanos para determinar su relación con la patología leucémica; 2) analizar el fenotipo de las células malignas en los diferentes tipos de leucemias agudas y su expresión de ligandos para receptores activadores (CD112, CD155, MICA/B y ULBP-1) e inhibidores (HLA-I y HLA-C) de las células NK, tratando de establecer su relación con la susceptibilidad y evolución de los pacientes; y 3) estudiar en pacientes y controles sanos la expresión de receptores inhibidores (KIR2DL1, KIR2DS1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR3DL1 y NKG2A) y activadores (CD16 y DNAM-1) en células NK de sangre periférica (SP), para investigar su papel en la susceptibilidad y la evolución de los pacientes. Metodología: La metodología utilizada en esta tesis ha sido, la tipificación de los genes KIR y HLA en muestras de ADN con sistema Luminex mediante PCR-SSO. Para analizar el inmunofenotipo y la expresión de ligandos en muestras de MO se ha utilizado un citómetro BD FACSCanto-II (de 3 láseres y 8 detectores) y para analizar la expresión de receptores de células NK en muestras de SP se ha utilizado un citómetro BD LSR-II (de 3 láseres y 13 detectores). Todas las variables analizadas se incluyeron en una base de datos Excel 2003 anonimizando la identidad de los pacientes y para el análisis estadístico se utilizó el programa SPSS v20.0. Conclusiones: 1. En nuestra serie de pacientes no se evidencia asociación entre los diferentes genotipos KIR y HLA o sus potenciales interacciones y el riesgo de padecer leucemia aguda en la infancia. 2. En pacientes pediátricos con LLA-B, la interacción KIR2DL2/C1 se asocia a SG y SLE más cortas. Esta asociación es independiente de la presencia de alteraciones citogenéticas de mal pronóstico, pero está relacionada con la presencia de un mayor número de interacciones iKIR/ligando, por lo que podría ser la suma de interacciones inhibidoras la que impacte negativamente en la supervivencia. 3. Las LLA-B y -T de nuestra serie presentan un patrón de expresión de ligandos de receptores de células NK opuesto. Las LLA-B conservan la expresión de ligandos inhibidores (HLA-I y HLA-C) y aumentan la de ligandos activadores (CD112 y ULBP-1), mientras que las LLA-T sin excepción, muestran pérdidas muy significativas de la expresión de ligandos inhibidores, sin incremento de la expresión de ligandos activadores. Esta diferencia, de ser confirmada, sugiere que los mecanismos que regulan la inmunovigilancia frente a ambos tipos de leucemias son diferentes, y podría ser de utilidad para potenciar la respuesta antitumoral en la selección de donantes de progenitores hematopoyéticos. 4. En la LLA-T infantil la pérdida de expresión de HLA-C en la población patológica se asocia a supervivencias prolongadas, lo que sugiere que el reconocimiento de pérdida de lo propio por parte de las células NK podría contribuir a la inmunovigilancia en este tipo de leucemia. 5. La expresión basal elevada de HLA-C en los linfocitos sanos residuales de los pacientes con LLA-B infantil se asocia aparentemente a supervivencias más reducidas, lo que podría indicar un estado de menor respuesta de las células citotóxicas de estos pacientes, posiblemente inducido por un exceso de señales inhibidoras. Estos resultados deberían ser demostrados en ensayos in vitro. 6. Las interacciones educadoras iKIR/ligando favorecen ratios elevados de expresión CD226/iKIR en las células NK de pacientes pediátricos y controles sanos. Sin embargo, la interacción educadora NKG2A/HLA-E, induce ratios reducidos de CD226/NKG2A en las células NK de los niños con leucemia aguda, pero no en los controles sanos de nuestro estudio. Esta disminución podría ser un mecanismo supresor de células NK desarrollado específicamente en la leucemia aguda infantil, importante al tratarse de la subpoblación de células NK mayoritaria en niños.