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El adaptador de membrana LAT como regulador de la transmisión de señales intracelulares asociadas a TCR : función de diversas secuencias consenso no basadas en tirosina / Mario Martínez Florensa, directores Enrique Aguado Vidal y Pedro Aparicio Alonso
(Murcia : Universidad de Murcia, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular B e Inmunología, 2008., 2013-05-10) Martínez Florensa, Mario
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Archivos de datos en formato Flow Cytometry Standard (FCS) para analizar con software de citometría de flujo
(2017-01-24) Rubio Pedraza, Gonzalo; Bioquímica y Biología Molecular "B" e Inmunología; Facultad de Química
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Búsqueda de nuevas opciones terapéuticas para el tratamiento de la endometriosis
(Universidad de Murcia, 2026-05-25) García Izquierdo, Mª Laura; Martínez-Esparza Alvargonzález, María Concepción; Sin departamento asociado; Escuela Internacional de Doctorado
La endometriosis es una enfermedad inflamatoria crónica que afecta aproximadamente al diez por ciento de las mujeres en edad reproductiva y se asocia a dolor pélvico persistente e infertilidad, con un impacto significativo en la calidad de vida. Las opciones terapéuticas actuales se basan principalmente en tratamientos hormonales y cirugía, con eficacia variable, riesgo de recurrencia y limitaciones derivadas de efectos secundarios o del deseo gestacional. Estas circunstancias ponen de manifiesto la necesidad de nuevas aproximaciones dirigidas a los mecanismos fisiopatológicos implicados en la enfermedad. En los últimos años, se ha consolidado la consideración de la endometriosis como una patología inflamatoria compleja en la que la alteración del sistema inmunitario innato desempeña un papel relevante. En particular, los macrófagos peritoneales y su interacción con las células endometriales contribuyen al mantenimiento de un microambiente inflamatorio persistente asociado a la progresión de las lesiones y al dolor. El objetivo general de esta tesis fue integrar el análisis crítico de la evidencia terapéutica disponible para el tratamiento del dolor asociado a la endometriosis con la evaluación preclínica de estrategias no hormonales basadas en la modulación de la respuesta inflamatoria innata. Para ello, se llevó a cabo una revisión estructurada de las opciones terapéuticas actuales y de las alternativas emergentes, así como estudios experimentales in vitro empleando modelos celulares humanos para analizar la activación funcional de macrófagos y su interacción con células endometriales. Los resultados obtenidos respaldan la relevancia de los mecanismos inmunológicos en la fisiopatología de la endometriosis y apoyan la exploración de estrategias no hormonales orientadas a la modulación de la inflamación como aproximación terapéutica potencial.
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Caracterización de Caiap y Wdr90 como nuevos componentes del inflamasoma implicados en la resistencia a Salmoella enterica serovar Typhimurium
(Universidad de Murcia, 2018-11-22) Valera Pérez, Ana; Pérez Oliva, Ana Belén; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
Los inflamasomas son plataformas moleculares citosólicas que alertan al Sistema inmunitario de la presencia de infecciones. Como complejos multiproteicos, están constituidos por NLRs (Receptores tipo NOD), proteínas adaptadoras (ASC) y caspase-1. El ensamblaje de los complejos requiere una señal activadora y depende de interacciones homotípicas. Nuestro laboratorio ha encontrado que la proteína 4 que une a guanilato (Gbp4), una GTPasa inducible por IFNγ con un dominio CARD C-terminal, se necesita para la eliminación de Salmonella Typhimurium (ST) dependiente de inflamasoma realizada por los neutrófilos in vivo. Aunque muchos de los componentes clave del inflamasoma ya han sido caracterizados, aun se conoce muy poco acerca de otros componentes potenciales. En esta Tesis Doctoral se describen dos nuevos componentes del inflamasoma y se han desarrollado además anticuerpos en alpacas contra componentes del inflamasoma como una herramienta para clarificar el ensamblaje del inflamasoma y su función. Por un lado, describimos la identificación de una proteína evolutivamente conservada, a la que nombramos como Caiap (proteína adaptadora del inflamasoma con dominio CARD y ANK), que presenta un dominio CARD N-terminal, 16 dominios ANK C-terminales y que se necesita para la resistencia a ST dependiente de inflamasoma en pez cebra. Enigmáticamente, Caiap está muy conservada desde peces cartilaginosos hasta marsupiales, pero se encuentra ausente en mamíferos placentarios. El mecanismo de actuación de Caiap ocurre aguas debajo de flagelina e interacciona con Caspa catalíticamente activa, el homologo funcional de caspasa-1 humana, a través de sus dominios ANK, mientras que los dominios CARD promueven su oligomerización. Nuestros resultados apuntan por tanto a que proteínas con dominios ANK son adaptadores clave necesarios para la estabilización funcional de caspasa-1 en complejos de alto peso molecular. Por otro lado, se describe cómo wdr90 en pez cebra se induce por Gbp4 de manera independiente de la activación del inflamasoma. Este gen codifica para una proteína de alto peso molecular con numerosos dominios WD40, que están involucrados en coordinar el ensamblaje de complejos multiproteícos, cuya función era desconocida hasta la fecha. Se ha visto como su sobreexpresión aumenta los niveles de actividad caspasa-1 y la resistencia a ST en larvas infectadas de pez cebra, actuando aguas arriba de Caspa y Asc. Además, se muestra como su expresión en HEK293T es capaz de alterar la distribución de NLRC4, pero no de NLRP3 y AIM2. Por último, hemos generado un knockout de WDR90 en líneas inmortalizadas de macrófagos de ratón y herramientas CRISPR para generar un knockin con el fin de marcar el WDR90 con un epítopo FLAG para facilitar su detección. Asimismo, se han producido anticuerpos en alpaca contra Asc de pez cebra y WDR90 humano, lo que facilitará en un futuro a comprender en mayor detalle el ensamblaje, activación y la función biológica del inflamasoma. Inflammasomes are cytosolic molecular platforms that alert the immune system about the presence of the infection. As multiprotein complexes, they consist of NLRs (NOD-like receptors), adaptor proteins ASC and caspase-1. The assembly of the complexes requires the activation signal and depends on the homotypic interactions. Our laboratory has found that zebrafish guanylate-binding protein 4 (Gbp4), an IFNγ-inducible GTPase harbouring a C-terminal CARD domain, is required for the inflammasome-dependent clearance of Salmonella Typhimurium (ST) by neutrophils in vivo. Although several key components of the inflammasome have already been characterized, little is known about other potential components. In this Thesis we describe two new inflammasome components and we developed antibodies against inflammasome components in Alpacas as tools to shed light in to inflammasome assembly and function. On one hand, we report the identification of an evolutionarily conserved protein, that we term Caiap (from CARD- and ANK-containing Inflammasome Adaptor Protein), which has an N-terminal CARD domain and 16 C-terminal ANK domains, and is required for the inflammasome-dependent resistance to Salmonella Typhimurium in zebrafish. Intriguingly, Caiap is highly conserved from cartilaginous fish to marsupials but is absent in placental mammals. Mechanistically, Caiap acts downstream flagellin and interacts with catalytic active Caspa, the functional homolog of mammalian caspase-1, through its ANK domain, while its CARD domain promotes its self-oligomerization. Our results therefore point to ANK domain-containing proteins as key inflammasome adaptors required for the stabilization of active caspase-1 in functionally stable, high molecular weight complexes. On the other hand, we found that zebrafish wdr90 is highly induced by Gbp4 independently of inflammasome activation. This gene encodes a large protein of unknown functions until date that contains several WD40 domains, which are involved in coordinating multi-protein complex assembly. Its overexpression increased caspase-1 activity and the resistance of the larvae to ST infection, acting upstream of Caspa and Asc. In addition, it was able to alter the distribution of NLRC4, but not of NLRP3 or AIM2, when expressed in HEK293T cells. Finally, we have generated WDR90 knockout immortalized bone marrow-derived macrophages and the CRISPR tools to generate KI cell lines to tag endogenous WDR90 with the FLAG epitope to facilitate its detection. In addition, we have produced alpacas antibodies against zebrafish Asc and human WDR90, which will help to shed light into inflammasome assembly, activation and biological functions
Open Access
Caracterización del receptor purinérgico P2X7 y el inflamasoma LNRP3 en la respuesta inflamatoria inducida por péptidos antimicrobianos e infecciones
(2018-09-12) Martínez García, Juan José; Aparicio Alonso, Pedro; Pelegrín Vivancos, Pablo; Escuela Internacional de Doctorado
En esta Tesis se describe como el péptido antimicrobiano melitina induce la activación canónica del inflamasoma NLRP3 debido a una permeabilización de la membrana plasmática y una reducción de la concentración de K+ intracelular. Tras el tratamiento con melitina, la proteína ASC fue necesaria para activar caspasa-1 e inducir liberación de IL-1β. Sin embargo, la muerte celular inducida directamente por melitina permeabilizando la membrana plasmática evitó la amplificación de la activación de caspasa-1, la liberación de IL-18, y la ejecución de piroptosis. Por lo tanto, la activación del inflamasoma NLRP3 inducida por melitina resultó en una respuesta atenuada del inflamasoma que no indujo la muerte celular dependiente de caspasa-1. Además, se estudió una cohorte de pacientes con sepsis de origen intra-abdominal (n=35), donde se encontró que la activación del inflamasoma NLRP3 mediada por ATP estaba alterada en un grupo de pacientes entre las primeras 24h del desarrollo de sepsis. Estos pacientes presentaron una respuesta inmune inmunocomprometida y acumularon la mayor parte de muertes asociadas al proceso séptico. En pacientes sépticos immunocomprometidos P2X7 se asoció a la disfunción mitocondrial en monocitos, pero no a la activación del inflamasoma NLRP3. La activación del receptor P2X7 en monocitos antes de la estimulación microbiana dio lugar a una inhibición del inflamasoma NLRP3 por un daño mitocondrial. Se determinaron varios marcadores para gravedad en sepsis y citoquinas circulantes en plasma en el primer día del desarrollo de sepsis, que no fueron capaces de mostrar dicha estratificación de este grupo de pacientes sépticos con una alta mortalidad. Nuestros datos revelaron un mecanismo molecular iniciado por P2X7 que contribuye a la inmunosupresión en monocitos con sepsis, que podría ser un nuevo biomarcador temprano de la mortalidad. No menos importante, se encontró que los macrófagos y las células HEK293 activadas a través de P2X7, redujeron su capacidad de adhesión al sustrato en un tiempo reducido y de una forma dosis-dependiente. Estos datos indicaron que la adhesión celular al sustrato en macrófagos no activados es más alta que la adhesión a células HEK293 a la placa de cultivo y a distintas matrices extracelulares (ECMs). Este fenómeno es a través de la liberación celular de la integrina 1 inducida por la activación del receptor P2X7, haciendo que perdieran la adhesión al sustrato plástico y a colágeno tipo I, pero no a fibronectina o laminina. Aunque la adhesión celular aumentó rápidamente después de tratar los macrófagos con LPS bacteriano, tras la estimulación con ATP, la adhesión disminuyó radicalmente independientemente del sustrato dónde estuvieran plaqueados. En estas condiciones la muerte celular inducida por piroptosis tras la activación del receptor P2X7 induce de forma no selectiva la pérdida de la adhesión celular. Estos resultados revelaron que el receptor P2X7 está activamente asociado en el proceso de adhesión de macrófagos. This Thesis describes how the antimicrobial peptide melittin induces the canonical activation of NLRP3 inflammasome by a membrane permeabilization and a decrease of the intracellular K+ concentration. After melittin treatment, ASC protein was necessary to activate caspase-1 and induces IL-1release. However, cell death induced directly by membrane permeabilization induced by melittin inhibited the caspae-1 activation amplification, IL-18 release and pyroptosis. Thus, the NLRP3 inflammasome activation induced by melittin resulted in an attenuated response of the inflammasome without caspase-1 dependent cell death induction. In addition, a cohort of intra-abdominal origin septic patients (n=35) was studied, where we found that a NLRP3 inflammasome activation mediated by ATP was defected in a group of patients between the first 24h od sepsis development. These patients presented an immunocompromised immune response and they accumulated the major part of death associated to sepsis. In immunocompromised septic patients, P2X7 receptor was associated with mitochondrial dysfunction in monocytes, but not to the NLRP3 inflammasome activation. P2X7 receptor activation in monocytes without microbial stimulation resulted in an inhibition of the NLRP3 inflammasome mediated by a mitochondrial damage. Several markers for sepsis severity and circulating cytokines were determined without this high-risk of mortality group of patients’ stratification. Our data revealed a molecular mechanism initiated by P2X7 receptor, which contributes to the immunosuppression in monocytes from septic patients that could be considered as a new early biomarker to predict the mortality in sepsis. Not least important, we found that P2X7-activated macrophages and HEK293 cells reduced its ability to adhere to substrate in a short time and a dose-dependent manner. These data indicated that cell adhesion to a substrate by non-activated macrophages is higher than cell adhesion of non-treated HEK-cells, into the culture plate and different extracellular matrix (ECMs). This phenomenon was carried out the cellular release of the 1 integrin, induced by the P2X7 receptor activation, resulting in a loss of cell adhesion to the tissue culture plate and type I collagen, but not to fibronectin and laminin. Although cell adhesion rapidly increased after macrophages were treated with Escherichia coli LPS , after ATP stimulation, cell adhesion radically decreased independently of the adherent substrate where macrophages were plated. Under these conditions, cell death induced by pyroptosis after P2X7 receptor activation, induced non-selectively the loss of cell adhesion. These results revealed that the P2X7 receptor is actively associated to the macrophages adhesion process.
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Células y factores solubles implicados en el mantenimiento y ruptura de la tolerancia en el trasplante hepático / Alfredo Minguela Puras ; directora Rocío ALvarez López.
(Murcia : Universidad, Departamento de Bioquímica, Biología Molecular-B e Inmunología,, 1998) Minguela Puras, Alfredo
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Cruzando el cuerpo. Dispositivos de frontera y procesos de subjetivación
(Universidad de Murcia. Servicio de Publicaciones, 2016) Domenech de la Lastra, Pablo
En este texto buscamos la posibilidad de comprender al cuerpo del migrante como un límite político y ontológico a la construcción de dispositivos fronterizos contemporáneos, centrándonos fundamentalmente en la frontera sur de Europa. Primeramente, daremos cuenta de la emergencia ontológica del migrante como objeto-cuerpo por el poder soberano. Posteriormente, bosquejaremos las formas de aprehensión de este objeto-cuerpo por los poderes gubernamentales, que construyen nuevas formas de sujeción-subjetivación. Finalmente, apuntaremos algunas formas de desbordamiento de los dispositivos fronterizos, para poder hablar de la aparición de un sujeto emancipado, que ejerce de fuerza límite contra las dinámicas globales de vallado.
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Detección, caracterización y titulación de Isohemaglutininas
(2014-01-29) Rubio Pedraza, Gonzalo; Bioquímica y Biología Molecular "B" e Inmunología; Facultad de Química
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Efectividad, tolerabilidad, evolución de parámetros in vitro y calidad de vida en pacientes sensibilizados a proteínas transportadoras de lípidos (LTPs) tras 3 años de tratamiento con inmunoterapia específica
(Universidad de Murcia, 2021-11-12) González Pérez, Alejandra; Antonio Carbonell Martínez; Ana Isabel Escudero Pastor; Fabio Camacho Alonso; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCIÓN: Las proteínas transportadoras de lípidos (LTP) son actualmente una de las causas más importante de alergia alimentaria grave inducida por alimentos vegetales, que se engloba dentro de lo que se conoce como síndrome LTP. La variabilidad que presenta el síndrome LTP a nivel clínico y su gran heterogeneidad a nivel molecular, hacen de esta patología un amplio terreno de estudio. El síndrome LTP es una enfermedad cada vez más prevalente sobre todo en la población joven en la que se ve afectada su calidad de vida por la importancia del cuadro y los síntomas relacionados. Desde 2015 existe un tratamiento específico para el síndrome LTP (SLIT-melocotón®) pero hasta la actualidad no se disponían de estudios de efectividad a largo plazo ni controles sobre la calidad de vida de los pacientes, por lo que se ha llevado a cabo este estudio donde se ha relacionado la evolución clínica de los pacientes con datos analíticos y con test de calidad de vida específicos de alergia alimentaria. OBJETIVOS: El objetivo principal de este estudio es valorar la efectividad a largo plazo de SLIT-melocotón® y relacionar la evolución clínica de los pacientes con parámetros analíticos y test de calidad de vida específicos. MATERIAL Y MÉTODOS: Se trata de un estudio observacional y ambispectivo durante un periodo de 3 años de tratamiento y un año posterior de seguimiento. Se han seleccionado 25 pacientes del servicio de Alergología del Hospital General Reina Sofía de Murcia diagnosticados de síndrome LTP, los cuales recibieron tratamiento con SLIT-melocotón® durante 3 años. Se les realizó una prueba de provocación con alimentos al año y reintrodujeron alimentos que previamente les producían síntomas. También se les realizaron determinaciones analíticas de IgE específica a Pru p 3 e IgG4 específica a Pru p 3 al inicio, al año de inicio y al final del tratamiento y test de calidad de vida específicos de alergia a alimentos (S- FAQLQ-AF) al inicio, al final y al año de suspender el tratamiento. Todos estos datos fueron comparados con el grupo control, formado por 14 pacientes con síndrome LTP que no habían recibido tratamiento. RESULTADOS: Los pacientes del grupo activo fueron sometidos a una prueba de provocación con alimentos, al año de tratamiento, con resultado negativo para todos ellos, pudiendo reintroducir sin problemas, alimentos que previamente les producían síntomas. Se observó además una disminución de IgE específica a Pru p 3 y un aumento de IgG4 específica a Pru p 3 estadísticamente significativos, en el grupo activo, en relación con la tolerancia a alimentos con LTP. Los pacientes del grupo activo presentaron también una mejoría significativa en la puntuación de los test de calidad de vida tras el tratamiento, progresiva al año de finalizar el tratamiento, no observándose dicha mejoría en el grupo control. CONCLUSIÓN: El tratamiento con SLIT-melocotón® durante 3 años resulta eficaz para los pacientes con síndrome LTP, evitando la evolución de la enfermedad, permitiendo a los pacientes reiniciar una dieta con alimentos vegetales con los que previamente presentaban síntomas graves de alergia alimentaria y por consiguiente mejorando su calidad de vida de manera global.
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Estrogens regulate the innate and the adaptive immune response = Regulación de la respuesta inmunitaria innata y adaptativa por los estrógenos
(2017-05-15) Ródenas Bleda, María del Carmen; Meseguer Peñalver, José; García Ayala, Alfonsa; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Facultad de Biología
Abstract Endocrine disrupting chemicals (EDCs) are a class of heterogeneous chemicals present in the environment that bind to estrogen receptors (ERs) and interfere with the estrogen-dependent control of body homeostasis. In the present thesis, we present evidence that EDCs modulate the immune system of gilthead seabream (Sparus aurata L.) even when exposure to these chemicals has ended. We evaluate the effect of 17α-ethinylestradiol (EE2), a bio-active estrogen used in oral contraceptive pills, and tamoxifen (Tmx), a drug used worldwide for the treatment of ER-positive breast cancer. Both have become a widespread problem in the environment due to their high resistance to degradation. The gilthead seabream is a marine teleost fish of significant economic value in the Mediterranean area and has been extensively used in research as a protandrous hermaphrodite fish. Furthermore, during the development of the thsesis we identified a membrane-anchored receptor called G protein-coupled estrogen receptor (GPER1) in human neutrophils. The thesis was carried out in four stages. First of all, we confirmed that EE2 and Tmx, incorporated in the diet, promote an estrogenic response in adult fish although the effect of Tmx was seen to be much less pronounced. We also investigated the capacity of both compounds to modulate the immune response induced by an antigenic challenge and its capacity to recover its functionality when the treatments ceased. Both EE2 and Tmx transiently inhibited the induction of interleukin-1β (il-1β) gene expression and transiently increased reactive oxygen species (ROS) in head kidney leukocytes from vaccinated fish. Moreover, EE2 and Tmx increased the antibody titer but only the fish exposed to Tmx showed a higher IgM titer and a higher percentage of IgM+B lymphocytes during the recovery period. After observing that EE2 and Tmx affected the immune response of adult specimens, we attempted to ascertain whether these effects are also produced in juveniles. Moreover, it was seen that treatment with G1, a GPER-selective agonist, also altered the immune response of adult specimens. Only EE2 and Tmx differently increased vtg mARN levels during the treatment and the expression returned to basal levels during recovery. Although none of the three compounds affected ROS production, they all inhibited the induction of il1b gene expression after priming. Significantly, Tmx increased the percentage of IgM+ cells in both head kidney and spleen during the recovery period. More importantly, the antibody response of vaccinated fish was modified by the three compounds but the exact effects depended on the time when the immunization was performed. The previous results led us to investigate the influence of EE2 on the innate immune response, focusing on lymphocytes and in the humoral activity when exposure to this EDC ceased. Significantly, EE2 affects the percentage and proliferation of T and IgM+-B lymphocytes. For the first time it was seen that EE2 significantly induces the production of antibodies, an effect mediated through GPER1 signalling pathway. Finally, we functionally characterized GPER1 in human neutrophils. These cells express a functional GPER1 in the plasma membrane and stimulation of the neutrophils with G1 resulted in a dose-dependent increase in transcript levels of CFOS, a marker of GPER1 activation. Besides, G1 significantly primed the production of O2- and drastically altered their gene expression profile. G1 treatment regulated the activation and life span of human neutrophils through several signaling pathways. To sum up, our results show for the first time that GPER1 activation promotes the polarization of human neutrophils towards a pro-inflammatory phenotype and identify GPER1 as a potential therapeutic target in immune diseases where neutrophils play a key role. Resumen En el transcurso de esta Tesis Doctoral se ha explorado el efecto del 17α-etinilestradiol (EE2) y del tamoxifeno (Tmx) sobre el sistema inmunitario de la dorada (Sparus aurata L.) durante y después de la exposición a estos compuestos. El primero es un estrógeno sintético siendo el principal ingrediente activo de la píldora anticonceptiva, mientras que el Tmx es un modulador selectivo de los receptores de estrógenos con efecto anti-proliferativo en el tejido mamario. Debido al amplio uso y a la incompleta degración, son contaminantes habituales de los medios acuáticos. La dorada es un pez teleósteo marino y una de las especies por excelencia de la acuicultura marina, con un gran valor en la acuicultura mediterránea. Además se ha determinado el papel del receptor de estrógenos asociado a proteína G, GPER1 en la biología de neutrófilos humanos. En primer lugar, hemos evaluado el efecto del EE2 y del Tmx administrados mediante dieta en determinados marcadores de disrupción estrogénica en doradas adultas. Hemos confirmado que el EE2 provoca una respuesta estrogénica y que el Tmx también altera estos marcadores, aunque el efecto fue menos pronunciado. También hemos investigado la capacidad de ambos compuestos de modular la respuesta inmunitaria inducida tras una vacunación así como su capacidad de recuperación tras el cese de la exposición. Los resultados indican que el EE2 y el Tmx inhiben de manera transitoria la inducción de la expresión del gen inteleuquina 1β (IL)-1β e incrementan la producción de intermediarios de oxígeno reactivos (ROIs) en leucocitos de riñón cefálico (RC) de peces vacunados. Por otro lado, el EE2 y el Tmx estimulan la producción de anticuerpos en peces vacunados aunque sólo en los expuestos a Tmx se produjo una alteración del porcentaje de linfocitos (Ly) B inmunoglubulina M positivos (IgM+) en peces durante el periodo de recuperación. Tras observar que el EE2 y el Tmx alteran la respuesta inmunitaria de ejemplares adultos, nos planteamos determinar si estas consecuencias se producen también en juveniles. Además introdujimos el compuesto G1, agonista específico de GPER ya que también altera la respuesta inmunitaria de adultos de dorada. El EE2 y el Tmx, pero no el G1, promueven una respuesta diferente y transitoria en la expresión del gen hepático de la vtg. Aunque estos tres compuestos no afectan la producción de ROIs, provocan la inhibición de la inducción de la expresión del gen il1b, al igual que ocurría en adultos. Destacamos, que a pesar de que el Tmx incrementa el porcentaje de Ly B-IgM+ RC y en bazo durante el periodo de recuperación, la producción de anticuerpos en peces vacunados varía dependiendo del compuesto utilizado y de cuando se produjo la vacunación. Los resultados previos nos llevaron a investigar la influencia del EE2 en la respuesta inmunitaria centrándonos en los Ly y en la actividad humoral tras el cese de la exposición. En concordancia con lo anteriormente observado, el EE2 incrementa la expresión del gen hepático de la vtg. De manera significativa, afecta al porcentaje y a la capacidad de proliferación de los Ly T y B-IgM+. Además, describimos por primera vez que el EE2 induce la producción de anticuerpos y que este efecto está mediado a través de la señalización por GPER1. Finalmente, dado que los estrógenos son capaces de modular funciones de granulocitos en dorada a través de la señalización por GPER, hemos realizado la caracterización funcional de GPER1 en neutrófilos humanos. Estas células expresan GPER1 de manera funcional en la membrana plasmática, ya que tras la activación in vitro con el agonista especígico G1, produjo el incremento de los niveles de transcripción de CFOS, marcador de activación de GPER1. Además incrementa la producción ROIs y altera de manera drástica el perfil de expresión de genes, además de incrementar la viabilidad de neutrófilos humanos a través de diferentes mecanismos de señalización. En definitiva, nuestros resultados muestran por primera vez que la activación de GPER1 produce la polarización de neutrófilos humanos hacia un fenotipo pro-inflamatorio y pone de manifiento la potencia de GPER1 como diana terapéutica en enfermedades inmunitarias en los que los neutrófilos juegan un papel fundamental.
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Estudio comparativo de los fármacos Anti-TNF (Infliximab, Adalimumab y Etanercept) en el tratamiento de patologías reumatoides de origen inflamatorio en pacientes mayores y menores de 65 años
(Universidad de Murcia, 2019-07-23) Ruiz Jiménez, María del Mar; Campos Aranda, Matilde; García Molina, Olga; Martínez Martínez, José Antonio; Escuela Internacional de Doctorado
OBJETIVO: 1. Describir las características demográficas y clínicas de los pacientes con enfermedades reumatoides de origen inflamatorio en tratamiento con fármacos anti-TNFα. 2. Establecer las causas de suspensión de los tratamientos en función de los fármacos y la edad de los pacientes. 3. Comparar la duración de los 3 fármacos anti-TNFα en pacientes mayores y menores de 65 años. 4. Determinar los principales efectos adversos de cada fármaco en pacientes mayores y menores de 65 años. METODOLOGÍA: Se trata de un estudio observacional longitudinal retrospectivo que fue realizado con un horizonte temporal de 4 años (2013-2017) de los pacientes que acudieron a las consultas externas del servicio de Farmacia Hospitalaria y al Hospital de día de Reumatología del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca. Se realizó una revisión de las bases de datos disponibles para obtener información actualizada de los pacientes con Artritis Reumatoide (AR), Espondilitis Anquilosante (EA) y Artritis Psoriásica (APSo). Se obtuvieron los registros de dispensación de los pacientes mediante el programa de dispensación de Pacientes Externos del servicio de Farmacia para el tratamiento subcutáneo (etanercept, adalimumab) y del programa de mezclas intravenosas para el tratamiento intravenoso (infliximab). Se recogió la información de las historias clínicas, informes de alta y de los formularios de hospital de día. CONCLUSIONES: 1. Más de la mitad de los pacientes que se tratan con un fármaco anti-TNFα se ven obligados a cambiar de línea, de manera que los pacientes que inician una primera línea de tratamiento con el fármaco adalimumab, cambian más veces de línea que los que inician con infliximab tanto en mayores como en menores de 65 años. El porcentaje de pacientes con dos o más líneas de tratamiento para el fármaco adalimumab es superior en los mayores de 65 años. Por el contrario, el porcentaje de pacientes con dos o más líneas de tratamiento para el fármaco infliximab es superior en los menores de 65 años. 2. Adalimumab es el fármaco que más se suspende por ineficacia en ambos grupos de edad, por el contrario, etanercept es el fármaco que más de suspende por reacciones adversas y neoplasias en los menores de 65 años, mientras que en los mayores de 65 años, adalimumab es el fármaco que más se suspende por reacciones adversas e infliximab por neoplasias. 3. El tiempo de duración del tratamiento es muy distinto entre los tres fármacos, siendo infliximab el que más dura en el global de la población y en el grupo de pacientes menores de 65 años (p<0,05). Por el contario, en el grupo de pacientes mayores de 65 años, la media de duración fue mayor para etanercept (no se obtuvo significación estadística). 4. El perfil de efectos adversos es distinto en función del fármaco y de la edad de los pacientes. En mayores de 65 años los fármacos subcutáneos se asocian con la aparición de trastornos cardíacos, trastornos del tracto urinario y trastornos de la sangre, mientras que en menores de 65 años dichos fármacos se asocian con la aparición de trastornos del sistema nervioso y neoplasias.
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Estudio de la respuesta inflamatoria en el sistema nervioso central tras el aplastamiento completo del nervio óptico en ratón
(Universidad de Murcia, 2023-07-21) Cabrera Maqueda, José María; Vidal Sanz, Manuel; Galindo Romero, Caridad; Escuela Internacional de Doctorado
Objetivos El aplastamiento del nervio óptico (ApNO) produce una reacción inflamatoria que se extiende a la retina lesionada y la contralateral. Sin embargo, la propagación de la inflamación en la vía visual o fuera, en regiones remotas del SNC (RRSNC), ha sido menos caracterizada. Nuestro objetivo fue estudiar la respuesta glial y los cambios moleculares subyacentes en ambas retinas, colículos superiores (CS), principal área retino-recipiente en ratón, o en RRSNC. Material y métodos Los animales experimentales fueron ratones macho pigmentados (C57Bl/6) adultos. Se diferenciaron 3 grupos: ApNO a 0,5 mm del disco óptico; animales en los que se realizó toda la cirugía salvo el aplastamiento (Sham) e intactos. Se hicieron dos estudios: Estudio molecular: Se realizó la disección en fresco de ambas retinas, CS e hipocampos (H), bulbos olfatorio (BO), cerebelo (CE) y médula espinal (ME) como RRSNC a los días 1, 3, 9 ó 30 tras el ApNO o cirugía Sham. Se extrajo su ARN y, mediante qPCR, se determinaron los niveles de expresión de Tgf-β1, Il-1β, Tnf-α, Iba1, Gfap, Mhc II y Tspo en las retinas y el resto de regiones del SNC. En extractos de CS, H, BO, CE y ME, se determinó también Caspasa-3, Cxcr1, Lcn2, Il-6, Cd206, Il-4 y Aq4. Los genes se clasificaron como marcadores de apoptosis (Caspasa-3), pro-inflamatorios (Cxcr1, Il-1, Il-1β, Lcn2, Tnf-α, Il-6), antinflamatorios (Cd206, Il-4, Tgf-β1) y gliosis (Aq4, Gfap, Iba1, Mhc II, Tspo). Se usaron Hprt y Gapdh como genes housekeeping. Estudio anatomo-patológico: Se realizó en secciones sagitales de cerebro a los 3, 9 ó 30 días tras el ApNO o cirugía Sham. Se cuantificó el área ocupada por señal GFAP y la detección de MHC II (macroglía), así como la densidad de células Iba1+ y la expresión de CD68 (microglía), en CS y algunas RRSNC (H y BO). Se analizó la respuesta de animales ApNO vs. intactos o Sham, entre regiones ipsi- vs. contralaterales a la lesión y entre los diferentes tiempos de supervivencia. Resultados La cirugía Sham fue suficiente para modificar la expresión de los marcadores inflamatorios y gliales en las retinas y el resto de las regiones estudiadas del SNC. La retina cuyo nervio óptico fue expuesto pero no aplastado presentó una reacción pro-inflamatoria más precoz y mayor que la contralateral. En el resto del SNC, hubo un incremento generalizado de densidad de células Iba1+ o sobrexpresión de Iba1 pero sin cambios histológicos; sobrerregulación de Gfap junto con incremento del área ocupada por GFAP en ambos CS; y sobrexpresión de marcadores pro-inflamatorios y Caspasa-3. El ApNO no cambió de forma sustancial la reacción apoptótica, glial e inflamatoria ya obtenida por la cirugía Sham en RRSNC, es decir, fuera de la vía visual (retina y CS). La respuesta inflamatoria y glial fue evidente desde el primer día tras el ApNO en ambas retinas, aunque más larga y duradera en la lesionada. La reacción macroglial ocurrió solamente en la retina lesionada mientras que la respuesta microglial se encontró en ambas. El ApNO generó una respuesta mayor en el CS contralateral: se observó una intensa activación microglial junto con una respuesta pro-inflamatoria que condujo a la apoptosis. Conclusiones Tras el ApNO, la respuesta glial e inflamatoria en la vía visual ocurre en relación a la conexión entre las CGR axotomizadas y ambas retinas o CS. Fuera de la vía visual, la reacción es más global y podría seguir un gradiente según su disposición anatómica y la lesión. Para el análisis experimental de cualquier tejido del SNC donde sea de interés aislar la respuesta del ApNO del efecto de la cirugía en sí, se debería usar un animal Sham como control.
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Estudo do desempenho reprodutivo e da resposta imunológica em zebrafish (Danio rerio) alimentados com dietas enriquecidas com pólen apícola
(Universidad de Murcia, 2021-12-14) Martins Di Chiacchio, Isabela; Solis Murgas, Luis David; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
El polen de abeja es un producto natural recolectado de las plantas por las abejas y almacenado en la colmena mezclado principalmente con enzimas salivales. Es una fuente rica de diversos nutrientes, por lo que puede ser un excelente complemento alimenticio. Este producto ha sido descrito con múltiples propiedades beneficiosas, como efectos antimicrobianos, inmunoestimulantes y antioxidantes. El pez cebra Danio rerio es un pez teleósteo de agua dulce tropical, ampliamente utilizado como modelo experimental para estudiar la biología compleja de los vertebrados, ya que permite una fácil manipulación genética. La identificación de los mecanismos implicados en las respuestas fisiológicas de los peces sometidos a un tratamiento complementario con polen de abeja puede aportar información importante para la recomendación de este producto en la dieta de ésta y otras especies. El presente trabajo tuvo como objetivo estudiar la adición de polen de abeja a la dieta del pez cebra, focalizando su efecto en la reproducción, los parámetros de crecimiento, la modulación intestinal y la respuesta frente al desarrollo tumoral. Los peces cebra adultos fueron alimentados con diferentes dietas, tres veces al día durante 60 días, en el mismo período utilizando alimento comercial, artemia y polen de abeja. Se analizaron semanalmente los siguientes parámetros reproductivos: número total de huevos, producción de huevos por hembra, tasa de viabilidad embrionaria a 72 horas tras la fecundación, tasa de supervivencia de larvas después de la exposición al virus de la viremia primaveral de la carpa, tasa de supervivencia larvaria después de la exposición a Salmonellae enterica serovar Typhimurium y análisis del reclutamiento de neutrófilos en larvas después de la herida en la cola. Después de esto, los peces de cada tratamiento fueron analizados en busca de aumento de peso y longitud, y se recogieron los intestinos para evaluar la microbiota intestinal a través del análisis metagenómico. Además, se determinó los niveles de mRNA del gen que cifra la proteína amiloide A (Saa) en los órganos abdominales de pez cebra y de intestinos, ya que esta proteína es producida en el intestino y el hígado y tiene efectos sobre las células inmunes y algunas bacterias inducen fuertemente su producción. Después de 120 días de dieta, se evaluó el crecimiento tumoral de los peces restantes de cada uno de los tratamientos después del procedimiento de alotrasplante con melanoma, una forma muy agresiva de cáncer de piel. Nuestros resultados muestran que la suplementación con polen de abeja no logró mejorar la producción de huevos y la viabilidad del embrión en los peces cebra reproductores. En cambio, la descendencia de los reproductores alimentados con dietas suplementadas con polen de abeja mostró una mayor supervivencia tras la exposición al virus y una mayor migración de neutrófilos a las heridas. Estos resultados indican que el polen de abeja puede influir en la inmunidad vertical a través de importantes mecanismos relacionados con la inmunidad de la descendencia en las primeras etapas de vida. La dieta de polen de abeja también reveló una abundancia microbiana intestinal diferente a nivel de familia, género y especie en comparación con los peces del grupo de control; e, inesperadamente, los peces alimentados con polen de abeja mostraron una mayor tasa de crecimiento tumoral y tumores de mayor tamaño. Aunque algunos estudios atribuyen al polen de abeja actividades antitumorales, principalmente experimentos in vitro, nuestros resultados muestran que este vínculo debería ser cuestionado.
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Experiencias de Docencia Virtual en Facultades de Medicina Españolas durante la pandemia COVID-19 (II): Farmacología, Inmunología
(Centro de Estudios en Educación Médica de la Universidad de Murcia (CeuEM) y Editum (Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia), 2020) Sanz Alvarez, Emilio; Vicente Romero, Jorge; Prieto Martín, Alfredo
Presentamos un resumen de las actividades que algunos profesores deFacultades de Medicina españolas han llevado a cabo durante las 3 semanas previasa las vacaciones de primavera. Durante este tiempo, debido a la pandemia provocadapor la COVID-19, la docencia presencial tuvo que ser sustituída por actividades enlínea o virtuales, a causa de la implantación del estado de alarma en España quemotivó el cierre completo de las Universidades desde el 13 de marzo de 2020. Lasexperiencias son de Farmacología y de Inmunología.
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Factores genéticos, moleculares y células implicadas en la aceptación del injerto hepático : relevancia de las moléculas coestimuladoras (CD86) y pro-apoptóticas (CD95 y CD95L)
(2012-06-13) Marín Rubio, Luis Alberto; Álvarez López, María Rocío; Muro Amador, Manuel; Miras López, Manuel; Bioquímica y Biología Molecular B e Inmunología
El objetivo principal del presente trabajo de tesis es profundizar en el conocimiento de los mecanismos inmunológicos implicados en el desarrollo de tolerancia o rechazo en los receptores de un injerto hepático. Para ello se realizó un estudio multifactorial que contemplara factores inmunológicos del receptor pre- post-trasplante, factores genéticos, patología de base, edad, sexo o tratamiento inmunosupresor. Entre los hallazgos mas relevantes del presente trabajo cabe destacar cómo el polimorfismo genético del receptor en las moléculas implicadas en la respuesta alogénica (CD86, CD95) y citocinas como IL-6 e IL-10 puede condicionar la aceptación del injerto hepático. Asimismo, los niveles en el periodo pretrasplante de ciertos factores solubles (CD86s y CD95Ls) parecen influir en la evolución del injerto hepático. Además, describimos un nuevo método citométrico que permite estudiar la cinética de proliferación y apoptosis en cultivo mixto linfocitario y así confirmar los hallazgos detectados in vivo por citometría de flujo. The main objective of this study is to deep in the knowledge of the immunological mechanisms implicated in the development of tolerance and rejection in liver transplant receptors. In this sense, they were analized the immunological factors of the receptor in the pre and post- transplants period, primary indication for liver transplant, genetic factors, sex , and immunosuppressive treatment. Among the most relevant findings of this study include how the gene polymorphism of the receptor in those molecules involved in immune response (CD86, CD95) and cytokines such as IL-6 and IL-10 could condition the liver graft acceptance. Moreover, the levels in the pre-transplant period of certain soluble factors (CD86s and CD95Ls) could influence in the liver transplant outcome. In addition, we described a new cytometric method that allow the study of the kinetics of proliferation and apoptosis in mixed lymphocyte cultures letting us to confirm those results obtained in vivo by flow cytometry methods.
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From Clinical Inflammatory Profiling to Translational Experimental Modeling of Endometriosis : Peritoneal Macrophages as a Therapeutic Target
(Universidad de Murcia, 2025-10-13) Ramírez Pávez, Tamara Nadira; Martínez-Esparza Alvargonzález, María Concepción; Machado Linde, Francisco; Sin departamento asociado; Escuelas::Escuela Internacional de Doctorado
Objetivos Esta tesis tiene como objetivo profundizar en la comprensión del entorno inmunológico y molecular de la endometriosis mediante un enfoque experimental multifacético, que integra modelos clínicos, inmunológicos y preclínicos. Los objetivos específicos incluyeron: optimizar protocolos de recogida de muestras peritoneales; caracterizar el microambiente inmunológico, en particular los macrófagos y mediadores solubles; correlacionar estos hallazgos con parámetros clínicos; e implementar un modelo murino de endometriosis para estudios in vivo. Metodología Se reclutaron 322 mujeres entre 2014 y 2025, de las cuales 197 fueron confirmadas con endometriosis mediante histología y 72 eran mujeres sanas. Se diseñó un protocolo estandarizado para la recogida de líquido y lavados peritoneales, junto con biopsias quirúrgicas. Las poblaciones de macrófagos peritoneales se caracterizaron mediante citometría de flujo y marcadores fenotípicos asociados a activación M1/M2, reparación tisular y otras subpoblaciones. Se midieron mediadores inflamatorios solubles humanos y microbianos en líquido peritoneal y plasma mediante ELISA. Por último, se desarrolló un modelo murino homólogo de endometriosis con implante de tejido endometrial GFP en ratones C57BL/6, evaluando la formación de lesiones, cambios de conducta tipo ansiedad y persistencia celular. Conclusiones Se optimizaron los protocolos de recogida de muestras, mejorando la recuperación celular en lavados peritoneales, especialmente en mujeres con obesidad. Se observó una infiltración generalizada de macrófagos, incluso en tejidos sin lesiones visibles, con una expansión significativa de subpoblaciones no-clásicas y un fenotipo complejo de marcadores proinflamatorios, reguladores y reparativos. A nivel sistémico, se detectaron alteraciones en leucocitos y citocinas, incluyendo elevación de galectina-1 y descenso de sCD163, así como un incremento moderado de β-glucanos. El índice de masa corporal se asoció con mediadores inflamatorios y mayor severidad de la enfermedad, subrayando el papel del peso en su progresión. El análisis detallado de subpoblaciones de macrófagos reveló correlaciones con la percepción de salud física y posibles vínculos con síntomas. Se identificaron asociaciones entre marcadores tumorales (CEA, HE4) y perfiles inmunológicos, lo que resalta su potencial como biomarcadores sensibles. El modelo murino homólogo aportó información útil aunque con limitaciones en la formación y detección de lesiones, destacando la necesidad de perfeccionar los sistemas preclínicos.
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Generación de microquimerismo prenatal para donantes en xenotrasplante
(2017-03-01) Abellaneda Cuadrado, Juana María; Ramis Vidal, Manuel Guillermo; Pallarés Martínez, Francisco José; Escuela Internacional de Doctorado
No hay duda que el poder disponer de órganos animales para trasplante solucionaría el problema de su escasez. Pero para que los xenotrasplantes puedan llegar a ser una realidad clínica, se deben superar varias barreras, siendo una de la más importante la barrera inmunológica. Durante los últimos años las líneas de investigación han estado dirigidas a la creación de estrategias para la inducción de tolerancia inmunológica tanto de las células T como B. Una estrategia especialmente prometedora para acercarnos a la xenotolerancia es conseguir tolerancia de las células B, mediante la obtención del quimerismo mixto hematopoyético. El objetivo de este trabajo ha sido generar lechones con quimerismo mixto mediante la inyección ecoguiada intrauterina de un número bajo de diferentes estirpes celulares humanas y determinar posteriormente la resistencia al rechazo hiperagudo in vitro mediante técnicas clásicas. Para lograr este objetivo se procedió a la puesta a punto de una técnica ecográfica ecoguiada intrauterina, incluyendo pruebas de citotoxicidad de un contraste sonográfico mediante análisis celular en tiempo real. Finalmente se procedió a la inyección ecoguiada de 15 cerdas, usando distintas densidades de células STEM humanas CD34+, células mononucleares totales de sangre de cordón umbilical y células mesenquimales de médula ósea. Cuatro de las cerdas inyectadas parieron lechones vivos. En estos animales se determinó la presencia de quimerismo mixto in vitro mediante diferentes técnicas clásicas: PCR, citometría de flujo (CF), inmunocitoquímica y técnica ELISA para determinación de albúmina humana. Además, se realizaron pruebas de hemólisis in vitro mediante sistema RTCA xCELLigence y el método clásico (APA). Utilizando CF para identificar células con HLA I A, B o C en sangre periférica de todos los lechones nacidos vivos a los 15 días de edad, se encontraron 13 positivos de 58 lechonestestados, procedentes de dos de las inyecciones realizadas. La presencia de más animales positivos de los inyectados nos indica que hubo tránsito de dichas células humanas entre hermanos de camada. Estos 13 animales positivos fueron testados de nuevo a los dos meses de edad y ninguno fue positivo, demostrando la desaparición de las células quiméricas o humanas con el paso del tiempo. Mediante q-PCR para la detección del gen AluYb8 humano, se analizaron las muestras sanguíneas y tejidos de animales muertos perinatalmente (N=8), así como el tejido hepático (n= 59), cardiaco (n=53), renal (n=54) e intestino grueso y delgado (n=63) de los animales nacidos vivos procedentes de cerdas inyectadas. En los animales muertos perinatalmente se encontró el gen humano en distintos tejidos y en mayor cantidad que en los animales nacidos vivos (p<0,001). En sangre periférica de lechones nacidos vivos se encontró ADN humano en más animales de los que fueron inyectados en cada camada, al igual que sucedía en la CF. Esto confirmaría que habría tráfico celular entre los lechones durante la gestación. En cuanto a los tejidos de estos lechones, se determinó la presencia de Aluhumano en el 37,74% de las muestras cardiacas, el 54,2% de las muestras hepáticas y el 16,7% de las muestras renales y no se pudo determinar la presencia de células humanas en ninguna muestra de intestino delgado o grueso. En los animales positivos por CF se detectó este gen en PBMCs, hígado y corazón, con una frecuencia significativamente mayor que en los que fueron negativos para HLA I en sangre. Se observó una diferencia significativa al comparar la densidad de Aluen animales positivos y negativos a HLA I, pero para interpretar estos resultados hay que tener en cuenta que los datos de CF utilizados fueron aquellos obtenidos en la primera prueba realizada, cuando los animales tenían 15 días de edad, mientras que los resultados de Aluen tejidos son los que se obtuvieron a los 80 y 175 días de edad para los animales negativos y positivos por CF, respectivamente. El hecho de que los animales negativos a CF, sacrificados con anterioridad a los animales positivos, muestren valores medios superiores a los segundos,indicaría que se ha ido perdiendo el quimerismo y que en los animales sacrificados más tarde la cantidad de ADN humano detectable es menor. Mediante inmunocitoquímica, no se observaron células teñidas en ninguno de los tejidos valiosos para trasplante (hígado, riñón, corazón o pulmón). Sin embargo, en algunas de las muestras de bazo se observaron hematíes inmunorreactivos al anticuerpo anti-HLA. Tampoco se encontró albumina humana mediante ELISA. Finalmente, se determinó la resistencia al RHA mediado por anticuerpos y complemento mediante la técnica clásica de hemólisis (APA) y se evaluó la hemólisis mediante la puesta a punto y uso de una técnica de análisis celular en tiempo real (RTCA). Se encontró que mediante APA clásica se apreciaba un nivel de hemólisis significativamente creciente al comparar animales CF+, CF- y no modificados. Se observaron también diferencias entre los hematíes tomados a los 15 y a los 80 días de vida, con un mayor nivel de hemólisis en estos últimos. La presencia de hematíes con HLA I humano en superficie, como se demostró con la técnica de la inmunocitoquímica, podría explicar la protección frente a la reacción de APA. Además, corroboraría que aquellos animales en los que se observó quimerismo mediante CF tienen menos hemólisis mediada por anticuerpos y complemento, puesto que habría un porcentaje de hematíes que serían humanos, por tanto, no tendrían antígenos α-gal en superficie y no sufrirían la reacción detonada por los xenoanticuerpos preformados y el complemento. Esta capacidad de protección disminuiría con el tiempo, de forma paralela a la reducción de las copias de ADN humano o de la presencia de células con HLA I en superficie. There is no doubt that having animal organs for xenotransplantation will solve the shortage of human tissues for transplantation. But for xenotransplatation to become a clinical reality have to overpass different barriers, such as immunological rejection. During years the research has been focused on different strategies to get donors avoiding this kind of rejection. Among them is the generation of B cells xenotolerance, inducing immunological tolerance against T and B cells. Thus, the aim of this work has been to generate piglets with mixed chimerism through ecoguidedin utero cellular injection with a low number of different types of human cells and to determinate the ability of these animals to overpass hyperacute rejection by means of different analytical technics. To achieve this aim, firstly a percutaneous ecoguided technic was designed and refined, including the assessment of cytotoxicity against human and pig cells of an ultrasonographic contrast agent. STEM CD34+ cells, total mononuclear cells from umbilical cord blood and cultured mesenchymal human cells from marrow bone were injected into 15 sows. Four injected sows produced alive piglets. Mixed chimerism was determined in samples from these piglets using flow cytometry (CF), immunohistochemistry, and ELISA to detect human albumin. Moreover, hemolysis assays were performed in a double way: classical APA and APA based in real time cells analysis (RTCA). Using CF the presence of cells having HLA I molecules on surface of Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) obtained from piglets on 15th and 80th days was identified. Thirteen out of 58 piglets resulted positive and these animals were born only from two sows. The number of positive piglets higher than injected piglets confirms the cell trafficking among litter matters in utero.By means of real time PCR to detect Aluhuman gene, human DNA was researched in blood samples, tissue samples from death born piglets (n=8) and liver (n=59), heart (n=53), kidney (n=54) and small and large intestine (n=63) from alive born piglets coming from injected sows. Human DNA was found in higher frequency and quantity in death born piglets (p<0,001). The Alugene was identified in PBMCs from 33 piglets, confirming thus the cellular trafficking. This gene was also identified in 37.73% of heart samples, 54.2% of liver samples, 16.7% of kidney samples and none of gut and intestine samples. The animals CF+ showed higher frequency of samples with human DNA than CF- animals. There was higher density of Alucopies in CF- animals than in CF+ but it should be taken into account that samples from CF- were obtained 2 months before CF+ samples. All these data point out to a progressive decrease in the number of human cells with the age of the animals. There was no positive immunostained cells for HLA I, except for red blood cells in spleen. There was not found human albumin in sera samples by ELISA. As regards protection against hyperacute rejection, using the hemolysis assays (classical APA and RTCA assay) there was difference comparing CF+ and CF- animals. By means of APA assay, there was significant higher hemolysis percentage comparing CF+, CF- and wild phenotype pigs. There was also higher hemolysis in the second blood sampling compared to the first one. The presence of red blood cells in tissue samples could explain this effect. So, in the CF+ animals would have a certain number of red blood cells of human origin avoiding the effect of anti-alpha-gal antibodies. The difference between the first and the second blood sampling would corroborate again the decrease of the human origin cells in the chimeric animals.
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Inmunotoxicología producida por metales pesados y caracterización del moco de piel en peces= Heavy metal immunotoxicology and skin mucus in fish
(2014-09-02) Guardiola Abellán, Francisco Antonio; Guardiola Abellán, Francisco Antonio; Meseguer Peñalver, José; Cuesta Peñafiel, Alberto; Esteban Abad, María de los Ángeles; Facultad de Biología
Durante la presente Tesis Doctoral se han estudiado los efectos inmunotoxicológicos de la exposición mediante baño a arsénico, cadmio y mercurio en la dorada (Sparus aurata L.), la cual es una especie que posee la mayor tasa de producción en la acuicultura mediterránea. Por otra parte, también se han estudiado los parámetros inmunológicos y físico-químicos del moco de la piel de cinco especies de peces teleósteos marinos. En el caso de la dorada los parámetros inmunológicos en el moco se compararon con los presentes en el suero. Por último, se evaluaron los efectos de estos metales pesados en la inmunidad de la mucosa de la piel de la dorada. Por otra parte, los peces ocupan una posición filogenética clave en la evolución de los vertebrados representando el primer grupo animal que tiene un sistema inmunitario innato y adaptativo bien estructurado, en este sentido, el estudio de la inmunología de este grupo de vertebrados tiene un doble interés científico y filogenético básico. En primer lugar, hemos evaluado los efectos de la exposición mediante baño a concentraciones sub-letales de arsénico (As), cadmio (Cd) y mercurio (Hg) en la dorada, con especial énfasis en la respuesta inmunitaria innata. En el caso del As, se observaron alteraciones histológicas en el hígado, así como acumulación de este metal en este órgano después de 30 días de exposición. Los parámetros inmunitarios humorales (niveles de IgM, actividades del complemento y la peroxidasa) no se vieron afectados, mientras que los parámetros innatos celulares del riñón cefálico (peroxidasa, explosión respiratoria y las actividades fagocíticas en los leucocitos) se incrementaron significativamente después de 10 días de exposición en comparación con los peces control. Del mismo modo, con respecto a la exposición a Cd, se observaron alteraciones morfológicas progresivas en el hígado y en el páncreas exocrino que se correlacionaron con la acumulación hepática de Cd, la reducción en la actividad del complemento en el suero y la explosión respiratoria en los leucocitos en un grado significativo después de 10 y 30 días de exposición. La actividad de la peroxidasa en el suero y la fagocitosis de los leucocitos aumentaron en diferentes momentos del muestreo, mientras que los niveles de IgM en el suero y la actividad de la peroxidasa en los leucocitos resultaron inalterados. Finalmente, se confirmaron los efectos toxicológicos del Hg porque los ejemplares de dorada expuestos mediante baño mostraron un aumento de las enzimas antioxidantes en el hígado después de 2 días, alteraciones histopatológicas en el hígado y la piel, así como la sobre-expresión de genes relacionados con el metabolismo de xenobióticos, el estrés celular y la apoptosis en la piel. Además, las actividades del complemento y la peroxidasa en el suero se incrementaron, así como la peroxidasa, la explosión respitaroria y las actividades fagocíticas en los leucocitos de riñón cefálico que se incrementaron en diferentes tiempos de exposición. En segundo lugar, se identificaron y caracterizaron los diferentes mecanismos de defensa humorales constitutivos de la mucosa de la piel de la dorada (Sparus aurata) y se compararon con los presentes en el suero. Por lo tanto, se demostró que el moco de la piel de la dorada contiene niveles más bajos de IgM, niveles similares de lisozima, fosfatasa alcalina y proteasas, y más altos en actividades como la esterasa, peroxidasa y antiproteasa que en el suero. Asimismo, el moco de la piel reveló una fuerte actividad bactericida contra bacterias patógenas de peces testadas en comparación con la actividad encontrada en el suero, mientras que las bacterias no patógenas pueden incluso crecer mejor en la presencia de moco. Además, se evaluaron los mecanismos de defensa humoral y parámetros físico-químicos en el moco de la piel de cinco especies de teleósteos marinos. Se observaron varias correlaciones entre los parámetros como el pH, la conductividad y el potencial redox, así como, entre la densidad y la osmolaridad. Centrándose en la respuesta inmunitaria, los resultados mostraron que mientras que algunas de las actividades inmunitarias fueron muy similares en los peces estudiados, otras, tales como las actividades de la proteasa, antiproteasa, fosfatasa alcalina, esterasa y peroxidasa variaron dependiendo de las especies de peces. Por último, se investigó si los parámetros de la inmunidad innata de las mucosas de la piel determinados en la dorada se ven afectados o no por los metales pesados ensayados anteriormente. De este modo, se detectaron algunos cambios en la composición del moco y en las funciones inmunitarias después de la exposición a estos metales. En general, el perfil de carbohidratos sufrió pequeñas variaciones y la mayoría de las actividades enzimáticas se incrementaron después de la exposición. Curiosamente, el Hg provocó los incrementos más importantes en la mucosa de la piel, mientras que los perfiles de proteínas obtenidos por SDS-PAGE y HPLC mostraron poca variación en el moco de la dorada después de la exposición a estos metales. En conclusión, estos resultados podrían ser útiles para una mejor comprensión de los efectos de la exposición a metales pesados en el sistema inmunitario de la dorada y como podrían afectar a la biología marina, la acuicultura o a los consumidores humanos. Por otra parte, el estudio de la función y el comportamiento de la inmunidad de las mucosas en la piel, como un componente clave del sistema inmunitario innato, podría ayudar a comprender la resistencia de los peces, así como la presencia y distribución de los patógenos y la magnitud de las infecciones y el uso de los parámetros como biomarcadores en la toxicología de los peces, los cuales serían los aspectos de mayor importancia para la acuicultura. During the present PhD Thesis, we have studied the immunotoxicological effects of waterborne exposure to arsenic, cadmium and mercury in the gilthead seabream (Sparus aurata L.), which is a species with the highest rate of production in Mediterranean aquaculture. Furthermore, the immunological and physico-chemical parameters of the skin mucus from five marine teleost fish species have been also studied. In the case of gilthead seabream the immunological parameters in mucus were compare with those present in serum. Finally, the effects of these heavy metals in the skin mucosal immunity of gilthead seabream were evaluated. Moreover, fish occupy a key phylogenetic position in the evolution of vertebrates representing the first animal group that has a well structured innate and adaptive immune system; in this sense, the study of the immunology of this group of vertebrates has a dual basic scientific and phylogenetic interest. Firstly, we have evaluated the effects of waterborne exposure to sub-lethal concentrations of arsenic (As), cadmium (Cd) and mercury (Hg) in the teleost fish gilthead seabream, with special emphasis in the innate immune response. In the case of As, we observed histological alterations in the liver as well as As-accumulation in this organ after 30 days of exposure. The humoral immune parameters (seric IgM, complement and peroxidase activities) were not affected while the cellular innate parameters of head-kidney (leucocyte peroxidase, respiratory burst and phagocytic activities) were significantly increased after 10 days of exposition compared to the control fish. Similarly, regarding Cd exposure, it was observed progressive deleterious morphological alterations in liver and exocrine pancreas that correlated with the hepatic Cd-accumulation, reduction in the serum complement activity and leucocyte respiratory burst to a significant extent after 10 and 30 days of exposure. The serum peroxidase activity and leucocyte phagocytosis were increased at different sampling times while serum IgM levels and leucocyte peroxidase activity resulted unaltered. Finally, toxicological effects were confirmed for Hg because waterborne-exposed seabream specimens showed increased liver antioxidant enzymes after 2 days, histopathological alterations in the liver and skin as well as up-regulation of the expression of genes related to xenobiotic metabolism, cellular stress and apoptosis in the skin. Further, serum complement and peroxidase activities were increased, as well as head-kidney leucocyte peroxidase, respiratory burst and phagocytic activities were increased in different exposure time. Secondly, different constitutive humoral defence mechanisms of the skin mucus of gilthead seabream (Sparus aurata) were identified and characterized and compared with those present in the serum. Thus, it was demonstrated that gilthead seabream skin mucus contains lower levels of IgM, similar levels of lysozyme, alkaline phosphatase and proteases, and higher esterase, peroxidase and antiprotease activities than serum. Skin mucus revealed stronger bactericidal activity against tested fish pathogen bacteria compared to the serum activity, whilst non-pathogen bacteria can even grow better in the presence of mucus. In addition, humoral defence mechanisms and physico-chemical parameters in the skin mucus of five species of teleosts were evaluated. Several correlations were observed between parameters as pH, conductivity and redox potential, as well as, density and osmolarity. Focusing on the immunological response, results showed that while some immune activities were very similar in the studied fish other such as protease, antiprotease, alkaline phosphatase, esterase and peroxidase activities varied depending on the fish species. Finally, we investigated whether the skin mucus innate immune parameters determined in the gilthead seabream are affected or not by the heavy metals assayed above. Thus, some changes in the mucus composition and immune functions after heavy metal exposure were detected. Overall, carbohydrate profile suffered little changes and most of the enzymatic activities were increased after exposition. Interestingly, Hg evoked the most important increments in the skin mucus and protein profiles obtained by SDS-PAGE and HPLC showed little variations in the seabream mucus after exposure to heavy metals. In conclusions, these results could be useful for better understanding the effects of exposition to heavy metals in the seabream immune system and as could interfere with fish biology, aquaculture management or human consumers. Moreover, the study of the role and behaviour of the mucosal immunity in skin, as a key component of the innate immune system, could help to understand the fish resistance as well as the presence and distribution of pathogens and magnitude of infections and use of parameters as biomarkers in fish toxicology, which would be aspects of major importance for the aquaculture industry.
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Intervenciones de enfermería en la prevención de infecciones del enfermo oncohematológico
(Murcia : Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2004) Cauqui Calderón, Alberto Javier
Los enfermos oncohematológicos presentan una característica común, la inmunosupresión. En parte, de nuestros cuidados va a depender que se presenten o no infecciones. El uso de catéteres centrales intravenosos se hace prácticamente imprescindible para la administración de medicamentos, transfusión de hemoderivados, transplantes hemopoyéticos, extracciones sanguíneas frecuentes... Es enfermería la responsable de su mantenimiento y cuidados, debiendo extremar las precauciones para evitar su contaminación. Los cuidados del paciente irán encaminados a mantener en óptimas condiciones la piel y mucosas, asegurar una nutrición adecuada y evitar, en la medida de lo posible, técnicas invasivas.
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Los microbios y el premio Nobel de medicina en 1908 (Ehrlich y Mechnikov).
(Murcia, Universidad de Murcia, Servicio de Publicaciones, 2008) Argüelles Ordóñez, Juan Carlos; Facultad de Biología

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