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Acción de validamicina A y los antifúngicos de uso clínico, micafungina y anfotericina B, sobre Candida albicans
(2016-05-31) Guirao Abad, José Pedro; Argüelles Ordóñez, Juan Carlos; Martínez-Esparza Alvargonzález, María Concepción; Facultad de Medicina
Summary Validamycin A (Val. A) has been used successfully in the fight against phytopathogenic fungi in crops. Here, its putative antifungal effect against the human pathogen Candida albicans is examined. Val. A acts as a potent non-competitive inhibitor of the cell wall-linked acid trehalase (Atc1p). The estimated MIC50 for the C. albicans parental strain CAI-4 was 0.5 mg/ml. A homozygous atc1Δ mutant lacking functional Atc1p activity showed greater resistance to the drug. However, the antifungal power of Val. A was limited compared with the lethal action of amphotericin B (AmB). The endogenous content of trehalose rose significantly with both drugs although no synergistic effect was observed between them. It seems therefore that inhibition of the trehalases is not lethal in C. albicans. Catalase activity was not affected by Val. A, so that this antioxidant activity does not play a major part in protecting the cell integrity in the case of treatment with Val. A. The drug did not impair the formation of germ-tubes, confirming that trehalose hydrolysis is not essential for morphogenesis. In addition, C. albicans cells and human macrophages showed a similar sensitivity to the compound. Therefore, Val. A cannot be considered a clinically useful antifungal against C. albicans. On the other hand, recent evidence suggests that the lethal effect induced by some clinical antifungals depends on previously unknown targets. In this study, we also examine the hypothetical role played by the intracellular formation of ROS in the fungicidal action of AmB and micafungin (MF) on C. albicans. The clinical MIC90 for MF and AMB were 0.016 and 0.12 mg/L, respectively (SC5314 strain), although CAI-4 cells showed a similar sensitivity to both drugs in YPD medium. The polyene AMB strongly induced ROS production in parallel with a severe degree of cell killing in both CAI-4 and SC5314 strains, whether grown in PBS or YPD. However, the fungicidal effect of MF was more effective in YPD, when it showed a higher degree of ROS generation and cell toxicity than in PBS. Preincubation with rotenone or thiourea reduced ROS production and caused a marked increase on cell viability, regardless of the antifungal applied. In contrast, AMB promoted higher intracellular synthesis of trehalose, which acts as a specific protector against oxidative stress in C. albicans. In C. albicans, the MAP-kinase Hog1 pathway plays an essential protective role against oxidative stress. The hog1Δ mutant showed a high degree of sensitivity to AmB, but no differences were observed with MF compared to its parental strain, RM-100. These results firmly support the involvement of Hog1 in the resistance of C. albicans to AmB, and point to the induction of an internal oxidative stress in C. albicans through the release of ROS as a contributory factor to the antifungal action of AMB but not MF. The simultaneous measurement of several antioxidant enzymes (catalase, glutathione reductase and superoxide dismutase) showed that these activities were strongly induced in cells treated with AmB and MF, such activation being especially pronounced in the hog1Δ mutant. We also investigated the in vitro correlation between the fungicidal effect of AMB and its hypothetical inhibitory action on hypha formation in C. albicans. The inhibitory effect of AmB on germ-tube formation was due to the high toxicity of AmB, whereas the regulatory elements involved in the dimorphic transition were not involved. Fungicidal concentrations of MF also supressed hypha formation and altered the morphology of C. albicans cells. In addition, MF increased the recognition and activation of macrophages of the innate immune system by increasing the production of the proinflammatory cytokine, TNF-α, and the anti-inflammatory, IL-10, that facilitate removal of the fungal infection. Resumen La validamicina A (Val. A) se ha empleado satisfactoriamente para combatir hongos fitopatógenos que afectan a las cosechas. En esta Memoria hemos analizado su posible acción antifúngica contra Candida albicans. Val. A se comportó como un inhibidor no competitivo de la trehalasa ácida de pared (Atc1p), con una CMI50 de 0,5 mg/ml para la cepa parental CAI-4 de C. albicans. El mutante homocigótico nulo atc1Δ, carente de la actividad Atc1p, mostró una mayor resistencia al efecto de la droga. Sin embargo, el poder antifúngico de la Val. A fue limitado en comparación con anfotericina B (AmB), mucho más tóxica. El contenido intracelular de trehalosa aumentó significativamente al aplicar ambas drogas, aunque no se observó un efecto sinérgico entre ellas, por tanto, parece que la inhibición de las trehalasas no es letal para esta levadura. La actividad catalasa resultó alterada, por lo que no parece jugar un papel crucial en la defensa de la integridad celular tras el tratamiento con Val. A. Del mismo modo, este compuesto no afectó a la formación de tubos germinativos, confirmando que la hidrólisis de trehalosa no es esencial durante la morfogénisis. Además, los macrófagos humanos mostraron una sensibilidad a Val. A similar a la observada en C. albicans, lo que descarta su utilidad clínica. Por otra parte, estudios recientes indican que parte del efecto letal de ciertos antifúngicos clínicos se debe a su acción sobre dianas moleculares secundarias, aún desconocidas. En este estudio, hemos analizado la producción de ROS y su implicación en el efecto fungicida de AmB y micafungina (MF) sobre C. albicans. La CMI90 para MF y AmB fue de 0,016 y 0,12 µg/ml, respectivamente (cepa SC5314), mostrando la cepa CAI-4 un comportamiento similar en medio YPD. AmB indujo una fuerte producción de ROS junto a una elevada letalidad en células CAI-4 y SC5314, en YPD y PBS. Sin embargo, MF fue más letal en YPD y con una mayor producción de ROS que en PBS. No obstante, al preincubar las células con rotenona o tiourea, se redujo el nivel de ROS intracelular y se incrementó la viabilidad con ambas drogas. Además, AmB aumentó la síntesis de trehalosa endógena, que actúa como un protector frente a estrés oxidativo en C. albicans. La ruta de las MAP-Quinasas, Hog1, cumple un papel protector esencial contra estrés oxidativo en C. albicans. El mutante homocigótico nulo, hog1Δ, mostró una elevada sensibilidad a AmB respecto a la cepa parental RM-100, a diferencia de MF, cuya acción fue similar en ambas cepas. Estos resultados ponen de manifiesto la importancia de Hog1 en la resistencia de C. albicans a AmB, y el papel de ROS intracelular como factor implicado en la acción antifúngica de AmB, aunque no de MF. No obstante, los dos antifúngicos provocaron una fuerte inducción de las enzimas antioxidantes: catalasa, glutatión reductasa y superóxido dismutasa, especialmente en el mutante hog1Δ. También se analizó la correlación in vitro entre el efecto fungicida de AmB y su hipotética acción sobre la formación de hifas en C. albicans. El efecto inhibitorio producido por AmB sobre la transición dimórfica fue causado por su elevada toxicidad y no por su acción sobre componentes implicados en la morfogénesis. Por su parte, MF también inhibió la formación de hifas y alteró la morfología de C. albicans. Además, MF incrementó el reconocimiento y la activación de los macrófagos, manifestado mediante el incremento en la producción de la citoquina proinflamatoria TNF-α y la antiinflamatoria IL-10, lo que facilita la eliminación de la infección fúngica.
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Caracterizació molecular y funcional de Gbp4 de pez cebra : un nuevo componente del inflamasoma= Molecular and functional chraterization of zebrafish Gbp4: a new inflammasome component
(2015-09-08) Tyrkalska, Sylwia Dominika; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
INTRODUCCIÓN: La señalización a través de los NOD-like receptors (NLRs), que son una familia de receptores citosólicos de reconocimiento de patrones (PRRs), da lugar al procesamiento y activación de las citoquinas pro-inflamatorias IL-1 β e IL-18 mediados por caspasa-1, así como de la inducción de una forma de muerte celular recientemente descrita llamada piroptosis. Para ello, los NLRs median la formación de plataformas multiproteicas de señalización llamadas inflamasomas, que alertan al sistema inmune de la presencia de infección o daño tisular. OBJETIVOS: (1) Establecimiento de un modelo de infección de Salmonella Typhimurium en pez cebra para estudiar la activación, el ensamblaje y el funcionamiento del inflamasoma; (2) Caracterización del papel de la flagelina de S. Typhimurium en el mecanismo de infección en pez cebra; (3) Caracterización del papel de Gbp4 de pez cebra en la activación y ensamblaje del inflamasoma, así como en la eliminación de S. Typhimurium; (4) Caracterización del papel de los neutrófilos en la eliminación de S. Typhimurium dependiente de Gbp4 en pez cebra; (5) Caracterización del papel de Gbp4 en la producción de prostaglandinas dependiente del inflamasoma, y del de las prostaglandinas en la eliminación de S. Typhimurium. METODOLOGÍA: Los métodos utilizados en la tesis doctoral son: Ensayos de infección con S. Typhimurium, ensayos de actividad caspasa-1, toma de imágenes de larvas de pez cebra, reclutamiento de neutrófilos y análisis de la muerte celular, ensayos de luminescencia, citometría de flujo, análisis de expresión génica, Western blot, ensayo de reconstitución del inflamasoma en células HEK293. RESULTADOS: Aquí demostramos que la proteína Gbp4 de pez cebra, una enzima GTPasa inducible por IFNγ que alberga un dominio C-terminal CARD, se expresa en los neutrófilos y es necesaria para la eliminación de Salmonella Typhimurium in vivo dependiente del inflamasoma. A pesar de la presencia del dominio CARD, Gbp4 requiere la presencia de la proteína adaptadora Asc para desempeñar su función antibacteriana. Además, la actividad GTPasa de Gbp4 es indispensable para la activación del inflamasoma, el reclutamiento de neutrófilos al lugar de la infección, y la eliminación de S. Typhimurium. La reconstitución de los complejos Gbp4-Asc en células embrionarias humanas de riñón (HEK293) en cultivo, nos mostró que forman complejos macromoleculares con un anillo exterior de Asc y un núcleo de Gbp4. Mecanísticamente, Gbp4 es esencial para la liberación de prostaglandinas dependiente del inflamasoma, de las cuales PGD2 se asocia con la eliminación de bacterias mediada por Gbp4. Por tanto, nuestros resultados señalan a las proteínas de unión con GTPasa como los adaptadores clave del inflamasoma necesarios para la biosíntesis de prostaglandinas y la eliminación de bacterias intracelulares por los neutrófilos in vivo. CONCLUSIONES: (1) El pez cebra es un excelente modelo para estudiar la activación y la función del inflamasoma en respuesta a una infección por S. Typhimurium; (2) El reconocimiento intracelular de S. Typhimurium en pez cebra depende altamente de la producción de flagelina; (3) La activación del inflamasoma dependiente de Gbp4 mejora la resistencia de las larvas de pez cebra e incrementa la actividad caspasa-1 después de la infección con S. Typhimurium; (4) Tanto Gbp4 mutante que carece de la actividad GTPasa, como el doble mutante al que también le falta el dominio CARD, se comportan como dominantes negativos, incrementando la susceptibilidad a S. Typhimurium y, en paralelo, reduciendo la actividad caspasa-1; (5) El mutante de Gbp4 sin el dominio CARD actúa, al igual que GBP5 de mamíferos, rescatando la elevada susceptibilidad de las larvas deficientes en Gbp4, pero no aumenta la actividad caspasa-1 después de la infección con S. Typhimurium en pez cebra; (6) Gbp4 regula el reclutamiento de neutrófilos al lugar de infección y, además, la eliminación de S. Typhimurium dependiente de Gbp4 esta mediada por los neutrófilos; (7) El inflamasoma dependiente de Gbp4 activa la biosíntesis de las prostaglandinas, que a su vez fomentan la eliminación de S. Typhimurium. INTRODUCTION: The nucleotide-binding domain leucine-rich repeats (NLRs) constitute a family of cytosolic pattern recognition receptors (PRRs), which are the responsible for the caspase-1-mediated processing and activation of pro-inflammatory cytokines, such us IL-1 β and IL-18, and the induction of a recently described form of cell death called pyroptosis. NLRs achieve these functions by forming multiprotein signaling platforms, called inflammasomes, which alert the immune system about the presence of infection or tissue damage. OBJECTIVES: Taking that into consideration, the objectives of the present work are: (1) Establishment of a zebrafish – Salmonella Typhimurium infection model to study inflammasome activation, assembly and function; (2) Characterization of the role of flagellin of S. Typhimurium in the infection mechanism in zebrafish; (3) Characterization of the role of zebrafish Gbp4 in inflammasome activation, assembly and clearance of S. Typhimurium; (4) Characterization of the role of neutrophils in the Gbp4-dependent clearance of S. Typhimurium in zebrafish; (5) Characterization of the role played by the Gbp4 inflammasome in prostaglandin production and S. Typhimurium clearance. METHODOLOGY: The following methods were used in this doctoral thesis: yolk sac or ear infection assays with S. Typhimurium, caspase-1 activity assays of infected larvae, counting of neutrophils using different zebrafish transgenic lines with fluorescent neutrophils using live imaging, neutrophil recruitment assays, cell death analysis, luminescence assays for the measurement of Il1-β contents, flow cytometry and FACS-sorting of fluorescent cells, gene expression analysis, western blot, inflammasome reconstitution assays in HEK293 cells. RESULTS: Here we report that zebrafish Gbp4, an IFNγ-inducible GTPase harboring a C-terminal CARD domain, is expressed in neutrophils and is required for the inflammasome-dependent clearance of Salmonella Typhimurium in vivo. Despite the presence of the CARD domain, Gbp4 requires the universal inflammasome adaptor protein Asc for mediating its antibacterial function. In addition, the GTPase activity of Gbp4 is indispensable for the inflammasome activation, the neutrophil recruitment and the clearance of S. Typhimurium. Reconstitution of Gbp4-Asc complexes in human embryonic kidney cells (HEK293) revealed a macromolecular complex with an outer ring of Asc and an core of Gbp4. Mechanistically, Gbp4 is essential for the inflammasome-dependent release of prostaglandins, of which PGD2 is associated with the Gbp4-mediated bacterial clearance. Our results, therefore, point to GTPase-binding proteins as the key inflammasome adaptors required for prostaglandin biosynthesis and intracellular bacterial clearance by neutrophils in vivo. CONCLUSIONS: The above results suggest that: (1) Zebrafish is an excellent model to study inflammasome activation and function upon S. Typhimurium infection; (2) Intracellular recognition of S. Typhimurium in zebrafish highly depends on flagellin production; (3) Gbp4-dependent inflammasome activation improves zebrafish larvae resistance and increases caspase-1 activity upon S. Typhimurium infection; (4) A Gbp4 mutant lacking GTPase activity, as well as a double GTPase and CARD mutant, behave as dominant negatives by increasing the susceptibility to S. Typhimurium and, in parallel, decreasing caspase-1 activity; (5) A Gbp4 mutant lacking the CARD domain acts as mammalian GBP5; that is, rescues the higher susceptibility of Gbp4-deficient larvae but fails to increase caspase-1 activity upon S. Typhimurium infection in zebrafish; (6) Gbp4 regulates neutrophil recruitment to the site of the infection. In addition, the Gbp4-dependent clearance of S. Typhimurium is mediated by neutrophils; (7) The Gbp4-dependent inflammasome activates prostaglandin biosynthesis, which in turn promotes S. Typhimurium clearance.
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Colonización por ESKAPES y características clínicas de pacientes en estado crítico
(Universidad de Murcia, 2020) Santos Zonta, Franciele do Nascimento; da Silva Roque, Márcia; Soares da Silva, Ruan Gabriel; Gabrieli Ritter, Amanda; Tondello Jacobsen, Fernanda
Identificar la colonización por ESKAPES y las características clínicas de los pacientes hospitalizados en una Unidad de Cuidados Intensivos para Adultos de un hospital mixto en Paraná. Método: Investigación de campo, descriptiva, documental y experimental con enfoque cuantitativo, desarollada en una Unidad de Cuidados Intensivos adultos de un hospital mixto en el suroeste de Paraná, Brasil. La población del estudio consistió en pacientes con ingreso de 48 horas en la Unidad de Cuidados Intensivos, de abril a agosto de 2018 y de abril a agosto de 2019. La muestra totalizó 102 individuos. Para la recopilación de datos clínicos, se utilizó un Checklist y para el análisis microbiológico se recogieron muestras de las cavidades nasales y orales y la secreción traqueal. El análisis de los datos clínicos se produjo a través del software Statistical Package for the Social Sciences. Se realizaron pruebas de frecuencia y chi-cuadrado, teniendo en cuenta la p<0,05 significativa.Resultados: Se evaluaron un total de 102 pacientes ingresados en la Unidad de Cuidados Intensivos durante el período estudiado. De ellos, 57 (55,8%) fueron colonizados por microorganismos patógenos. En cuanto a la colonización por microorganismos, predominan Staphylococcus aureus (61,4%), seguido de Klebsiella pneumoniae (40,4%), Pseudomonas aeruginosa (26,3%) y Staphylococcus epidermidis (21,1%). Cabe destacar que Klebsiella pneumoniae y Staphylococcus aureus estuvieron presentes en las tres regiones evaluadas.
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Colonización/infección por Acinetobacter baumannii multirresistente y resistente a carbapenémicos: epidemiología y factores predictivos de infección
(Elsevier, 2010-06-11) Hernández-Torres, Alicia; García-Vázquez, Elisa; Gómez, Joaquín; Canteras, Manuel; Ruiz, Joaquín; Fernández-Rufete, Ana; Herreroa, José Antonio; Yagüe, Genoveva; Medicina
RESUMEN:Fundamento y objetivo: Estudio de un brote de colonización/infección nosocomial por Acinetobacter baumannii multirresistente y resistente a carbapenémicos (ABMDR-C). Pacientes y método: Estudio prospectivo de pacientes con aislamiento de ABMDR-C entre enero de 2007 y junio de 2008. Se analizaron las características epidemiológicas y clínicas de los pacientes y los factores predictivos de infección frente a colonización. Resultados: De 101 casos, 24 presentaban colonización y 77 presentaban infección (27 bacteriemia); la mortalidad global (colonizaciones e infecciones) fue del 42% (4 colonizaciones y 38 infecciones [18 bacteriemias]). La incidencia de colonización/infección fue de 3,2/1.000 ingresos/día; un 29% tenía antecedente de ingreso previo y un 79% había recibido antibióticos previos (carbapenémicos [29%], piperacilina-tazobactam [34%] y ambos [12,5%]). El 78% tenía enfermedades de base, un 81% ingreso en la unidad de cuidados intensivos/reanimación, un 90% tuvo algún tipo de manipulación y un 65% presentaba coinfección por otros microorganismos. En el análisis multivariante fueron factores predictivos de infección frente a colonización: aislamiento de ABMDR-C en las muestras respiratorias (odds ratio [OR]: 5,406; intervalo de confianza [IC] del 95%: 1,419–20,599); sexo masculino (OR: 8,842; IC del 95%: 1,988– 39,325); ingreso previo (OR: 9,720; IC del 95%: 1,383–68,291) y gravedad clínica inicial (OR: 30,897; IC del 95%: 5,533–172,543). Conclusiones: Nuestra cohorte de pacientes con colonizaciones/infecciones por ABMDR-C está constituida por pacientes con enfermedad de base crónica, a los que se les realizó distintas manipulaciones instrumentales, con ingresos hospitalarios previos y uso previo de betalactámicos de amplio espectro, especialmente carbapenémicos. Los pacientes tienen una alta gravedad clínica al comienzo y el aislamiento respiratorio es un importante factor predictor de infección frente a colonización.
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Estudio de la susceptibilidad antibiótica en el Área VII de la Región de Murcia (2011-2014)
(2016-02-25) Núñez Trigueros, María Luz; Torres Cantero, Alberto Manuel; Departamento de Ciencias Sociosanitarias
Desde el desarrollo de la penicilina, los antimicrobianos han supuesto un gran avance en la medicina moderna, disminuyendo la mortalidad y morbilidad asociadas a infecciones y permitiendo el uso de cirugía, procedimientos invasivos y otros tratamientos imprescindibles hoy día. Muchos son los grupos de antimicrobianos que se han desarrollado con una mejor actividad frente a microorganismos productores de esos cuadros infecciosos. Desafortunadamente, y fundamentalmente por el uso abusivo de antimicrobianos, desde las últimas dos décadas se ha producido un aumento importante de las resistencias a los antimicrobianos que, debido a su rápida adquisición y dispersión, se ha convertido en un grave problema global. Objetivo. Estudiar la epidemiología de las infecciones del Área de Salud VII de la Región de Murcia. Método. Utilizamos la base de datos de los sistemas informáticos (Servolab y Gestlab entre los años 2011-2014 de nuestra área. Resultados. El microorganismo más frecuentemente aislado fue Escherichia coli, (36,7%, 37%, 39,3% y 41,5%) en los cuatro años de estudio (p<0.001). Klebsiella pneumoniae también aumentó su frecuencia desde 6,1% en 2011 a 9,1% en 2014 (p<0.001), situándose desde 2013 por encima de Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus y Enterococcus faecalis, hasta entonces los más microorganismos más frecuentes. El mayor número de aislamientos procedieron de muestras de orina, donde E. coli también fue el patógeno más frecuente seguido por K. pneumoniae desde 2012. Estos dos microorganismo, junto a Proteus mirabilis y E. faecalis fueron responsables de más del 90% de todos los aislamientos origen urinario. Salmonella spp. fue el microorganismo más frecuente en las infecciones gastrointestinales, fundamentalmente el serogrupo B, excepto en 2012, donde el serogrupo C7 se aisló en más ocasiones. En infecciones del tracto respiratorio inferior (TRI), P. aeruginosa se aisló en el 30% de los casos, aproximadamente, y junto a Haemophilus influenzae, supusieron el 43-47% de todos los aislamientos de origen respiratorio Stenotrophomonas matophilia se aisló en el 7,3% en 2014, al igual que Streptococcus. pneumoniae. Staphylococcus epidermidis disminuyó considerablemente en las bacteriemias (28,3% en 2011 y 15,3% en 2014) (p<0.001), al igual que S. aureus. E. coli, por el contrario, fue el microorganismo más frecuente a partir de 2012. E. faecalis se aisló en más ocasiones, desde el 3,7% al 7%, y supone una amenaza para el tratamiento de estas infecciones. S. aureus fue el microorganismo más aislado en exudados (30% en 2014), seguido por E. coli y P. aeruginosa excepto en 2014, donde K. pneumoniae supuso hasta el 28% de todas las enterobacterias. La sensibilidad de Salmonella spp a cefotaxima y quinolonas fue casi del 100%. La resistencias a cefotaxima de E. coli y K. pneumoniae fueron en ambos casos del 77,5% al 85,5% a lo largo del estudio, y las resistencias a carbapenems fueron menores del 1%. Enterobacter spp presentó resistencias elevadas a carbapenems, especialmente E. aerogenes (15% en 2014). Por otra parte, meropenem sólo fue activo en el 45%-55% de los casos frente a Acinetobacter baumannii. La sensibilidad de P. aeruginosa a ceftazidima fue de 84,1%, 91,3%, 84,2% y 86,6% desde 2011 a 2014 y la resistencia a meropenem aumentó hasta el 18,8% al final del estudio. Desde 2011 a 2014, el 22,4%, 19,8%, 27,2% y 23,4% de los aislamientos de S. aureus fueron resistentes a meticilina (SARM). Linezolid fue activo frente a S. aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes. No se detectaron resistencias a vancomicina ni a daptomicina en ninguna de las bacterias grampositivas aisladas. E. coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa, S. aureus y E. faecalis fueron menos sensibles en las muestras procedentes de hospital. Los aislamientos de muestras del TRI fueron los que presentaron mayor resistencia antibiótica, en algunos casos con cifras muy elevadas. SARM fue más frecuente en muestras de orina (2011 y 2013) y en TRI (2012 y 2014). En hemocultivos se aisló entre el 11% y 12% desde 2011 a 2013 aunque aumentó su frecuencia en 2014 (21,1%). Enterococcus spp elevó su resistencia a aminoglucósidos a altas dosis en hemocultivos durante todo el estudio. Conclusiones. Las resistencias antimicrobianas aumentaron a lo largo del estudio y han afectado a la mayoría de microorganismos y antibióticos. E. coli fue el microorganismo más frecuentemente aislado durante todos los años y K. pneumoniae aumentó en cifras globales y muestras de orina, TRI, sangre y exudados. Los aislamientos de SARM se mantuvieron estables aunque aumentaron en 2014 en muestras invasivas. No se aislaron microorganismos resistentes a vancomicina. Since the development of penicillin, antimicrobial agents have been a breakthrough in modern medicine, decreasing the mortality and morbidity associated with infections and allowing the use of surgery, invasive procedures and other essential treatments nowadays. Many antimicrobial agents are being developed with improved activity against those microorganisms producing infectious diseases. Unfortunately, mainly due to the misuse of antimicrobials, since the last two decades there has been a significant increase in antimicrobial resistance that due to rapid acquisition and dispersion, has become a serious global problem. Objective. The aim of this study was to review the Area de Salud VII Region de Murcia epidemiology. Method. Servolab and Geslab laboratory information systems were used to obtain the data from 2011 to 2014. Results. The most frequently isolated microorganism was Escherichia coli (36.7%, 37%, 39.3% and 41.5% in the four years of study) (p <0.001). Klebsiella pneumoniae increased from 6.1% in 2011 to 9.1% in 2014 (p <0.001), standing since 2013 over Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis. Most of isolates were from urine samples. E. coli was also the most common pathogen, followed since 2012 by K. pneumoniae. These two microorganisms, together with Proteus mirabilis and E. faecalis were responsible for more than 90% isolates from urine samples. Salmonella spp. was the most common microorganism isolated from gastrointestinal infections, mainly serogroup B, except in 2012, where C7 serogroup was isolated more frequently. In infections from the lower respiratory tract (LRT), P. aeruginosa was isolated nearly in 30% of cases, and together with Haemophilus influenzae, they accounted for 43-47% of all isolates of LRT samples. In 2014, Stenotrophomonas matophilia and Streptococcus pneumoniae were isolated in 7.3% of cases. Staphylococcus epidermidis bacteremia decreased from 28.3% in 2011 to 15.3% in 2014 (p <0.001) as well as S. aureus. E. coli was the most frequent microorganism isolated from 2012 to 2014. E. faecalis, a threat in severe infections, increased to 7% in 2014. S. aureus was the most frequent isolate from exudates samples (30% in 2014), followed by E. coli and P. aeruginosa except in 2014, where K. pneumoniae accounted 28% of all Enterobacteriaceae. Sensitivity to cefotaxime and quinolones was nearly 100% for Salmonella spp. E. coli and K. pneumoniae were 77.5% to 85.5% cefotaxime sensitive throughout the study in both cases. Carbapenem-resistance was less than 1%. Enterobacter spp presented high resistance to carbapenems, mainly E. aerogenes (15% in 2014). Furthermore, meropenem was only active in 45-55% cases against Acinetobacter baumannii. The sensitivity of P. aeruginosa to ceftazidime was 84.1%, 91.3%, 84.2% and 86.6% from 2011-2014, and resistance to meropenem increased to 18.8% at the end of the study. Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) was isolated in 22.4%, 19.8%, 27.2% and 23.4% from 2011 to 2014. Linezolid was active against S. aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pneumoniae and Streptococcus pyogenes. No resistance to vancomycin or daptomycin was detected. E. coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa, S. aureus, and E. faecalis were less sensitive in samples from hospital. Isolates LRT samples were those with higher antibiotic resistance. MRSA was more common in urine samples (2011 and 2013) and LRT samples (2012 and 2014). MRSA was isolated in 11% and 12% of blood cultures from 2011 to 2013, but increased to 21.1% in 2014. Enterococcus spp increased resistance to aminoglycosides at high doses in blood cultures throughout the study. Conclusions. Antimicrobial resistance increased over the study and has affected most microorganisms and antibiotics. E. coli was the most frequently isolated microorganism throughout the study, and K. pneumoniae increased globally and in urine, LRT, blood and exudates samples. MRSA was stable from 2011 to 2013 but increased in 2014 in invasive samples. No vancomycin-resistant microorganisms were isolated during the study.
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Estudio sobre la sepsis grave de origen abdominal. Utilidad de la procalcitonina y otros marcadores pronósiticos.
(2013-12-10) González Lisorge, Ada; García Palenciano, Carlos; Moreno Cascales, Matilde; Campos Aranda, Matilde; Acosta Villegas, Francisco; Departamento de Anatomía Humana y Psicobiología
INTRODUCCIÓN: La sepsis es una de las principales causas de morbimortalidad en las unidades de cuidados intensivos (UCIs). La sepsis grave de origen abdominal es uno de los cuadros más frecuentes en las UCIs Posquirúrgicas. Su mortalidad es elevada y oscila entre 40% y el 70% según las series. Sin embargo, es un cuadro que suele tener poco protagonismo en la literatura científica. Los biomarcadores son elementos fundamentales para el diagnóstico, seguimiento y pronóstico de la sepsis. Uno de los biomarcadores más estudiados en las últimas décadas ha sido la procalcitonina. Muchos autores consideran que su cinética se relaciona con la evolución, el pronóstico o con un tratamiento correcto de diversas patologías. Las escalas de gravedad, como el Acute Physiology And Chronic Health Evaluation II (APACHE II) y la escala Sequential Organ Failure Assessment (SOFA) tienen utilidad pronóstica en pacientes críticos. El APACHE II no es específico para pacientes sépticos, pero identifica pacientes con gravedad aumentada. La escala SOFA es un sistema específico de valoración de la gravedad del paciente séptico. Se diseñó para evaluar la afectación orgánica secundaria a la sepsis, aunque posteriormente, también se ha empleado con fines pronósticos. El objetivo principal de esta Tesis Doctoral es identificar los factores que influyen en la evolución (Éxitus o supervivencia) de los pacientes con sepsis grave de origen abdominal. Analizamos la utilidad de la procalcitonina como marcador de supervivencia y evaluamos si las escalas de gravedad, APACHE II y SOFA, permiten predecir la mortalidad de estos pacientes. MATERIAL Y MÉTODO: Se incluyeron en el estudio todos los pacientes con diagnóstico de sepsis grave de origen abdominal ingresados en una Unidad de Cuidados Críticos Posquirúrgicos entre los años 2007 y 2008. Se recogieron datos demográficos, los valores de la procalcitonina en los días primero, tercero y séptimo de ingreso y se calcularon las puntuaciones de las escalas APACHE II y SOFA al ingreso y de la escala SOFA en los días tercero y séptimo. RESULTADOS: Estudiamos 69 pacientes. La mortalidad de nuestra serie fue del 23,19% (IC95%: 13,19;33,19%). La edad media de estos pacientes fue 64,94 años (IC95%: 61;69 años). La mayoría de los pacientes (57,97%) presentó sepsis de origen comunitario (p<0,05). La patología previa más frecuente fue la hipertensión arterial (49,27%; IC95%: 37,27;61,27%), seguida de la diabetes mellitus (24,63%; IC95%: 14,43;34,83%) El foco de infección más frecuente fue el intestino grueso (40,57%; IC95%: 28,57;52,57%). La puntuación APACHE II media al ingreso fue de 16,43 puntos (IC95%: 14,95;17,91puntos) y fue superior entre los Éxitus (p<0,00001). La puntuación SOFA media al ingreso fue de 6,46 puntos (IC95%: 5,71;7,2puntos). En el estudio de regresión logística binario, los dos factores que más influyeron en la mortalidad de estos pacientes fueron la edad y el ascenso de las puntuaciones de la escala SOFA entre los días primero y séptimo. La procalcitonina presentó una dinámica diferente entre Éxitus, cuyos valores se mantuvieron elevados y Supervivientes, en los que los valores disminuyeron con el tiempo (p<0,05). El valor de procalcitonina que mejor identificó pronóstico fue el del día séptimo (AUC-ROC 0,768), niveles mayores o iguales a 3,5ng/mL detectaron mortalidad con una sensibilidad del 55% y una especificidad del 73%. CONCLUSIONES: En nuestra serie de pacientes con sepsis grave posquirúrgica de origen abdominal, el valor de procalcitonina en el séptimo día de observación se relaciona con el pronóstico. El ascenso en la puntuación de la escala SOFA entre los días primero y séptimo, junto con la edad, fueron los elementos que mejor identificaron el pronóstico de los pacientes con sepsis grave de origen abdominal. BACKGROUND: Sepsis represents a major cause of morbidity and mortality in Intensive Care Units (ICU). Severe sepsis of intraabdominal origin is a frequent pathology in Surgical ICU. It presents a high mortality rate, 40% in some series, but even 70% has been reported. Nevertheless, it has little prominence in scientific literature. Biomarkers are main elements in the battery of diagnostic, monitoring and prognostic tests. Procalcitonin has been one of the most studied markers in lasts decades. Many authors consider its dynamics well related with evolution, outcome or a correct treatment of different pathologies. Severity scales, such as Acute Physiology and Chronic Health Evaluation II (APACHE II) and Sequential Organ Failure Assessment score (SOFA) are some of the prognostic tools used in critical patients. APACHE II is not specific for septic patients, but has utility identifying patients with augmented severity. SOFA score is a specific system for severity assessment in septic patients. It identifies and allows the monitoring of organ failure secondary to sepsis. Initially it was design for the evaluation of organ dysfunction during the ICU stay of these patients, though its prognostic value has also been proved. The purpose of this Doctoral Thesis is to study which elements characterize patients with severe sepsis of intraabdominal origin, and try to identify which factors can influence the outcome of these patients. We assess the utility of procalcitonin and severity scores, APACHE II and SOFA, as outcome predictors in patients with severe sepsis of intraabdominal origin. PATIENTS AND METHOD: We included all patients admitted in a Surgical Intensive Care Unit with the diagnosis of severe sepsis of intraabdominal origin, between 2007 and 2008. We recorded demographic data, procalcitonin levels at days one, three and seven, and APACHE II and SOFA scores on admission, as well as SOFA score on days three and seven. RESULTS: 69 patients were included in the study. Mortality rate of our series was 23.19% (95%ic, 13.19-33.19%). Mean age of these patients was 64.94 (95%ic, 61;69y). More than 55% of patients had community acquired sepsis (p<0.05). Most frequent previous pathologies were hypertension (49.27%; 95%ci, 37.27;61.27%), followed by mellitus diabetes (24.63%; 95%ci, 14.43;34.83%). The most frequent focus of infection was colonic (40.57%; 95%ci, 28.57;52.57%). Mean APACHE II score on admission was 16.43 points (95%ci, 14.95;17.91points) and was higher in those patients who finally died (p<0.00001). Mean SOFA score on admission was 6.46 points (95%ci, 5.71;7.2points). In the binary regression logistic study, those factors identified as more related with outcome were age and the increase in SOFA score between days one and seven. Procalcitonin presented a different dynamic among Nonsurvivors (levels maintained or increased) and Survivors (whose levels decreased)(p<0.05). Procalcitonin levels on day seven identified better the outcome of these patients (AUC-ROC 0.768). Levels equal or higher than 3.5ng/mL identified mortality with 55% sensibility and 73% specificity. CONCLUSIONS: In our series of patients with severe sepsis of intraabdominal origin, procalcitonin does not identify outcome of patients on admission, but on day seven of observation. Increase on SOFA score between days one and seven and age were the factors that identified outcome in a more accurate way on patients with severe sepsis of intraabdominal origin.
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Immune response in fish gonad upon nodavirus infection and vaccines development = Implicación de la respuesta inmunitaria de la gónada de peces durante una infección con nodavirus y desarrollo de vacunas
(2016-09-05) Valero Cuesta, Yulema; Chaves Pozo, Elena; Cuesta Peñafiel, Alberto; Esteban Abad, María de los Ángeles; Escuela Internacional de Doctorado
La dorada (Sparus aurata) y la lubina (Dicentrarchus labrax) son las especies de peces más importantes de la acuicultura Mediterránea y de España. Entre los principales problemas que impiden la mejora de su cultivo se encuentran las pérdidas económicas provocadas por patologías. Nodavirus (NNV), extendido por todo el mundo, incluido el Mediterráneo, produce elevadas mortalidades en lubina, sobre todo en larvas, mientras que infecta a doradas sin producir enfermedad. Además, NNV se transmite verticalmente y no existen métodos preventivos efectivos. Por ello, en esta Tesis Doctoral hemos estudiado la interacción entre la gónada de dorada/lubina y NNV y la respuesta inmunitaria desencadenada en cerebro y gónada de ambas especies (Parte 1ª con cuatro capítulos) y cómo prevenir la enfermedad en ejemplares mediante vacunación (Parte 2ª con 2 capítulos). Para ello, realizamos infecciones experimentales con NNV en lubinas y doradas observándose un 55% de mortalidad en la lubina y total resistencia en la dorada. Inicialmente, demo9stramos que NNV podía colonizar y replicar en el testículo de ambas especies detectándose RNA viral y rescatándose partículas infectivas mediante pases ciegos en líneas celulares en ambas especies. Además, se localizaron proteínas virales de la cápsida (CP y B2. Es más, NNV infectó células somáticas de ambas especies, aunque sólo células germinales de dorada. La infección con NNV alteró la síntesis y los niveles séricos de 17β-estradiol y 11-ketotestosterone así como la sensibilidad del cerebro y del testículo a estas hormonas, mientras que no hubo alteración de las funciones testiculares en ninguna especie según el índice gonadosomático, la morfología testicular y la expresión del gen dmrt1. Respecto a la respuesta inmunitaria, NNV desencadenó una alta respuesta inflamatoria en cerebro y gónada de lubina aunque en dorada dicha respuesta fue mucho menor. El interferón (IFN) es uno de los mecanismos antivirales más potentes. En esta Tesis hemos identificado varios genes de dorada y lubina que codifican moléculas implicadas en la ruta del IFN y evaluamos su expresión durante una infección con NNV en cerebro y gónada. En dorada, los genes identificados fueron mda5, tbk1, irf3, ifn, mx y pkr, cuya expresión se estimuló en cerebro pero no en gónada. Sin embargo, en lubina, además, también identificamos las secuencias génicas de lgp2, mavs, traf3, tank e irf7, siendo en la mayoría de ellos inhibida su expresión en cerebro pero estimulada en gónada. De una forma diferente a lo que ocurría con el IFN, la expresión de varios genes que codifican péptidos antimicrobianos (AMPs) se estimuló en el cerebro y gónada de lubina mientras que en dorada sólo se inhibió c3. Mediante una infección in vitro de gónada, pudimos determinar que, mientras algunos de los genes (hamp, dic y lyz) eran regulados localmente por la gónada otros (c3, bdef, pis) dependían más de la respuesta inmunitaria sistémica. Además de su función en la compactación del DNA durante la división celular, las histonas parecen poseen funciones antimicrobianas. Por ello, identificamos la secuencia completa de los genes que codifican las histonas H1 y H2b en lubina y dorada y estudiamos su expresión frente a NNV. Nuestros datos sugieren que la histona H1 puede tener un papel determinante en la respuesta inmunitaria contra NNV en el cerebro de las dos especies, mientras que la histona H2B parece ser más relevante en la respuesta inmunitaria de los leucocitos de riñón cefálico (HKLs). NNV es letal durante el desarrollo larvario, siendo estos estadios, además, muy difíciles de vacunar debido a que su sistema inmunitario es inmaduro y a su pequeño tamaño. Teniendo en cuenta la dificultad de aplicación de vacunas inyectables a peces pequeños, encapsulamos una vacuna de DNA contra NNV en nanopartículas de quitosano y la administramos oralmente a juveniles de lubina durante 2 días. A los 90 días no se detectaron anticuerpos específicos frente a NNV pero se observó un incremento de la citotoxicidad mediada por células (CMC) y la respuesta del IFN en el intestino posterior así como un retraso en el comienzo de la mortalidad y una supervivencia del 45% tras una infección experimental. Después, estudiamos la posibilidad de inducir la inmunidad pasiva de las larvas mediante la vacuna de DNA administrada a las hembras progenitoras. Así, la inyectamos intramuscularmente en hembras reproductoras de lubina observando transferencia materna de proteínas con función bactericida, pero no de sus mRNA, ya que en huevos recién fertilizados vacunados esta actividad aumentó. No obstante, la inmunización de hembras reproductoras estimuló una respuesta innata mayor y más temprana. En resumen, nuestro estudio demuestra por primera vez la localización de NNV en células de testículo en peces y cómo la infección afecta a las funciones inmuno- endocrinas y la sensibilidad de los tejidos infectados a hormonas sexuales. Finalmente, diseñamos una vacuna de DNA con resultados prometedores como herramienta preventiva contra NNV cuando se administra a juveniles o reproductores. Gilthead seabream (Sparus aurata) and European sea bass (Dicentrarchus labrax) are the most important fish species for the Mediterranean aquaculture and also for Spain. Among the problems to improve their culture are the economic losses produced by pathologies. Thus, nodavirus (NNV), which is spreading worldwide, produces very high mortalities in sea bass, a very susceptible species, and uses seabream as a resistant reservoir. In addition, this virus shows vertical transmission through gametes and gonadal fluids and no clearly effective preventive methods are available. Thus, we aimed in this Doctoral Thesis to evaluate the interaction between seabream/sea bass gonad and NNV (part 1, with four chapters) and how to prevent its pathology and dissemination (part 2, with two chapters). First, we have demonstrated that NNV was able to colonize and replicate into the testis of both species, since infective viral particles were rescued using cell culture techniques. capsid (CP) and B2 viral proteins were also detected in gilthead seabream testis. Moreover, the cells infected in the testis were somatic cells in both species and also germ cells in gilthead seabream. Regarding reproductive functions, NNV infection altered 17β-estradiol and 11-ketotestosterone production and serum levels and the sensitivity of brain and testis to these hormones, whereas there was no disruption of testicular functions according to several reproductive parameters. Attending to the immune response elicited by the NNV infection, a higher inflammatory response was observed in the gonad and brain of sea bass compared to seabream specimens that, in contrast to sea bass specimens, were able to overcome the infection. The interferon (IFN) pathway, one of the most powerful antiviral mechanisms, was extensively depicted in seabream and sea bass and evaluated upon NNV infection in brain and gonad. In seabream, the genes encoding for MDA5, TBK1, IRF3, IFN, Mx and PKR proteins were up-regulated in the brain and unaltered in the gonad. In additioin to these genes, genes coding for LGP2, MAVS, TRAF3, TANK and IRF7 proteins were identified in European sea bass and most of them were down-regulated in the brain but significantly up-regulated in the gonad. We also studied the antimicrobial peptides (AMPs) response upon NNV infection. Differently to the IFN response, the AMPs response is generally increased in the brain of the European sea bass and in the gonad of both species upon NNV infection. Interestingly, our in vitro results determined that while some AMPs coding genes (hamp, dic and lyz) were locally regulated and represented a local immune response in the gonad, others (c3, bdef and pis) are more dependent of the systemic immune system. Additionally, and taking into account the potential antimicrobial role of histones, we have identified the complete h1 and h2b coding sequences in sea bass and seabream and studied their pattern of expression upon NNV in vivo infection. The data obtained suggest that H1 might have a role in the immune response against NNV in the brain of both species while H2B seems to be more important in the head-kidney leucocyte immune response. NNV is extremely harmful during larval development and at these early stages are very difficult to be vaccinated due to their small size or their immature immune system. Taking into account the difficulty of injecting a vaccine to a very small immunocompetent juvenile specimens, we have chitosan-encapsulated a DNA vaccine (ChP-CP-pNNV) against NNV and administered orally to early juveniles of European sea bass during two days. After 90 days of vaccination the cell-mediated cytotoxicity and IFN responses were greatly enhanced in the hindgut, although no specific anti-NNV antibodies were detected in serum. In fact, challenged specimens showed a retarded onset of fish death and a relative percent survival (RPS) of 45%. Then we have studied the possibility to induce maternal transfer of immunity using DNA vaccination to not immunocompetent specimens. Thus, we intramuscularly vaccinated the females of a broodstock of European sea bass with the formulation of the DNA vaccine CP-pNNV aiming to trigger a protective immune status in the progeny at early developmental stages. The vaccine elicits the maternal transference of some bactericidal activity effectors since eggs from vaccinated group showed increased activities at 0 days post-fertilization. Indeed, the maternal transfer described in our work seemed to be restricted to protein factors as transcript levels of mRNA of several leucocyte markers or AMPs were undetected in eggs. Interestingly, the immunisation of the broodstock females promoted a higher and earlier innate immune response in their progeny than in controls. In conclusion, our study demonstrate for the first time the localization of NNV into the testis cells in fish and how the immune-reproductive interactions are regulated by NNV, which may be hiding in the gonad and likely using it to spread to the progeny. Furthermore, we have designed a DNA vaccine that shows promising properties as preventive tools against NNV disease when administered to juveniles or broodstocks.
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Incidencia, características y medidas aplicadas en pacientes con gripe A (H1N1) en el contexto hospitalario durante el periodo 2016-2018
(Universidad de Murcia. Servicio de publicaciones, 2021) Ignacio Torres, Marina; Hornero López, Ana; Jimenez Martínez, Emilio; Adamuz, Jordi
Introducción: El virus de la gripe ocasiona anualmente epidemias estacionales con amplia extensión mundial y se estima que entre el 5 y el 20% de la población padece gripe cada año. En abril de 2009 se confirmaron los primeros casos de infección humana causados por un nuevo virus de la gripe A (H1N1). Objetivo y Método: En el período de epidemia (semana 40-20) del 2016-2018 se realizó un estudio observacional descriptivo prospectivo multicéntrico en dos hospitales públicos del área metropolitana sur de Barcelona con el objetivo de determinar la incidencia de pacientes positivos en gripe A (H1N1), así como las características demográficas y clínico-evolutivas de estos pacientes, la temporalidad en la detección del virus y medidas aplicadas por control de la infección. Resultados: Los resultados del presente trabajo indican que la incidencia acumulada de Gripe A durante el periodo de estudio fue de 233,68 casos por cada 100.000 habitantes. Casi el 90% de los pacientes padecía antecedentes patológicos siendo los más prevalentes la patología cardíaca y respiratoria. Además, el 40% de los pacientes hospitalizados presentó complicaciones, principalmente la neumonía. El tratamiento y días de aislamiento fueron según los estándares recomendados. Conclusión: Estos hallazgos muestran la elevada incidencia de gripe A, así como los beneficios de que los equipos de control de la infección realicen el seguimiento del cumplimiento del tratamiento y medidas para evitar la transmisión.
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Infección de herida quirúrgica neonatal: encuesta multicéntrica sobre medidas profilácticas
(Ergon, 2015-08) Fernández Ibieta, María; Girón Vallejo, Óscar; Martínez Castaño, I.; Reyes Ríos, P.; Cabrejos Perotti, K.; Rojas Ticona, J.; Sánchez Morote, J. M.; Zambudio Carmona, G.; Guirao Piñera, M. J.; Aranda García, M. J.; Trujillo Ascanio, A.; Ruiz Jiménez, J. I.; Ruiz Pruneda, R.; Méndez-Aguirre, N.; Cirugía, Pediatría y Obstetricia y Ginecología; Facultades de la UMU::Facultad de Medicina
Objectives. Surgical site infection (SSI) has a considerable impact on neonatal morbidity. There are known risk factors such type of surgery (clean/contaminated), prematurity, surgical length, hypoalbuminemia, previous infection, prolonged mechanical ventilation, and so on. Many perioperative factors have not been studied, opposite to adults. We have developed a survey on intraoperative attitudes and measures, as surgical wound management in Neonates among pediatric surgeons, to seek for a wider consense. Methods. Multi-response survey with 22 items, based on the Surgical Infection Society NIH 2008 clinical guideline. Each item poses a question on perioperative attitudes, surgical aspects and wound management. Each question is subdivided in two categories, depending on urgency and type of surgery (clean/contaminated) Results. 159 surveys were sent. Among those, we received back 51 (32%). 69% of the interviewed surgeons use clorhexidin to prepare surgical field, 25% use Iodine solutions. 69% never use diathermy to incise skin. There was no agreement on the use of sterile plastic adhesive drapes, intra-cavity lavage, changing surgical gloves/material, or wound irrigation during closure. 82% never use cyanocrilate dressing. Intracuticular skin suture and simple stitches were used indistinctly. Wound management and dressings were not uniform and depended on each pediatric unit. Conclusions. The survey reflects the lack of consensus regarding prophylactic measures and wound management among pediatric surgeons who care after surgical neonates.
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Infección por el virus del papiloma humano en mujeres con lesión intraepitelial cervical : aspectos virológicos y clinicopatológicos
(2014-02-10) Moreno Docón, Antonio; Segovia Hernández, Manuel; Departamento de Genética y Microbiología
Objetivos: En la actualidad, se conoce bien la relación que existe entre la infección por el virus del papiloma humano (VPH) y las lesiones precursoras del cáncer cervical. El principal objetivo de este estudio fue conocer la prevalencia general de la infección por VPH y estudiar los genotipos más frecuentes en mujeres con lesión intraepitelial cervical en la región de Murcia. Por otra parte, se ha evaluado la utilidad de la detección de VPH como marcador pronóstico de enfermedad residual en mujeres tratadas por lesión cervical de alto grado (CIN2+). Material y métodos: Se estudiaron muestras clínicas procedentes de 3.752 pacientes que tras una exploración ginecológica presentaron un resultado citológico anormal. Este estudio se realizó durante un periodo de 5 años (2008-2012), en un contexto de cribado asistencial oportunista, al no existir un modelo de cribado poblacional en nuestra comunidad. La detección de ADN del VPH se realizó mediante la técnica de captura de híbridos, mientras que la detección y tipado de VPH se realizó mediante una técnica de PCR microarray. Resultados: En nuestro estudio, encontramos que la tasa de detección de VPH fue del 53,5% en ASCUS, 73,2% en LSIL y 78,9% en HSIL. Los cuatro genotipos más frecuentes encontrados fueron los tipos 16 (31,1%), 31 (13,5%), 51 (13,4%) y el 53 (11,8%). La prevalencia del VPH 16 aumentó significativamente con el grado de la lesión citológica (p < 0,0001). El VPH 18 se detectó con una baja frecuencia (5,7%), datos en concordancia con otros estudios publicados en nuestro país. No encontramos diferencias significativas entre el número de tipos de VPH y el grado de severidad de la lesión cervical. La introducción del test de VPH en el seguimiento de mujeres tratadas mediante escisión con asa de diatermia, dada su elevada sensibilidad (93,7%) y valor predictivo negativo (97,3%), permite que estas mujeres pueden realizar su seguimiento mediante un protocolo de cribado convencional cada 3-5 años. ABSTRACT Objetives: At present, the relationship between human papillomavirus (HPV) infection and cervical preneoplasic lesions is well known. The aim of this study was to determine the overall prevalence of HPV infection, and study the most frequent genotypes in women with cervical intraepithelial lesion in the region of Murcia. Moreover, we evaluated the usefulness of HPV detection as a prognostic marker of residual disease in women treated for high-grade cervical lesions (CIN2+). Material and Methods: We studied 3.752 clinical samples from patients after gynecological examination which showed an abnormal cytology result. This study was conducted over a period of five years (2008-2012), in a context of opportunistic screening in the absence of a model for population screening in our community. Detection of HPV DNA was performed by hybrid capture technique, whereas HPV detection and typing was performed by microarray-PCR. Results : In our study we found that HPV detection rate was 53.5% in ASCUS , 73.2 % in LSIL and 78.9 % in HSIL . The four most common genotypes found were types 16 ( 31.1 % ) , 31 ( 13.5 % ) , 51 ( 13.4%) and 53 ( 11.8 % ) . The prevalence of HPV 16 increased significantly with the degree of cervical lesion (p <0.0001). The HPV 18 was detected with a low frequency (5.7 %), according to data published in other studies in our country. There are no significant differences between the number of HPV types and degree of severity of the cervical lesion. The introduction of HPV testing in the monitoring of women treated by diathermy loop excision , given its high sensitivity (93.7 % ) and negative predictive value ( 97.3 % ) , allows these women to follow it up with a conventional screening protocol every 3-5 years.
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Infecciónes del tracto urinario en pacientes con sonda vesical de demora internados en una unidad de vigilancia intensiva en Recife (PE), Brasil.
(Murcia : Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2007) Lima, L.S. de; Araújo, E.C. de; Bezerra, S.M.M.S; Linhares, F.M.; Lima, AKA de
Estudio transversal desarrollado con un abordaje cuantitativo con el objeto de evaluar la aparición de infecciones urinarias, principales agentes etiológicos y grupos de antibióticos en un universo de treinta y ocho pacientes con sonda vesical de demora y con edades entre los quince y los noventa y un años, internados en una unidad de vigilancia intensiva de un hospital público de la ciudad de Recife, capital del estado de Pernambuco, en el nordeste de Brasil. Para ello se utilizó un plan de acción estructurado y relleno a través de una recogida de datos en el historial de los pacientes, así como con resultados de urocultura con antibiograma. Se organizaron, procesaron y presentaros estos datos en tablas con valores absolutos. Este estudio se aprobó por el Comité de Ética en Investigación con Seres Humanos, y los participantes firmaron documentos de acuerdo y post-acuerdo. Entre los resultados se instaló la sonda a veintidós pacientes en Emergencia General y a diez en el Centro Quirúrgico; la incidencia de infección del tracto urinario acaeció en cerca de la mitad de los pacientes sondados en Emergencias y en dos pacientes sondados de la Unidad de Vigilancia Intensiva; hubo una media de cinco a veinte días de tiempo de permanencia de la cateterización vesical en veinticinco pacientes y de estos, catorce presentaron infección en el tracto urinario en el transcurso de su internación en la UVI; se aislaron varios agentes etiológicos en culturas de orina, entre ellos Pseudomonas aeruginosa y Cândida sp. Cabe destacar que el empleo indiscriminado de antimicrobianos es una constante en la unidad objeto de estudio, fomentando todavía más la proliferación y resistencia de los agentes infecciosos, recomendándose la instauración de medidas de prevención y control de infecciones, así como la creación de un protocolo de utilización de antimicrobianos en esta Unidad de Vigilancia Intensiva.
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Infecciones en úlceras de pie diabético : epidemiología, factores predictivos de multirresistencia y pronósticos asociados con amputación:estudio prospectivo 2008-2012
(2014-07-18) García Zafra, María Victoria; Gómez Gómez, Joaquín; Soria Cogollos, Teresa; Tébar Massó, Francisco Javier; Facultad de Medicina
Objetivos: Estudio descriptivo de las infecciones de pie diabético en nuestro ámbito, identificación de aquellos factores predictivos de infecciones multirresistentes y valoración de los factores pronósticos asociados con la amputación. Pacientes y método: Hemos estudiado 167 pacientes con infecciones de úlceras de pie diabético ingresados en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia; España) durante los años 2008 a 2012. Las infecciones se clasificaron de acuerdo con la escala de severidad de IDSA, y la metodología microbiológica según los criterios de Gorbach. Todos los datos epidemiológicos se recogieron durante la hospitalización de una forma protocolizada. Se analizó la epidemiología, los factores de riesgo asociados al Staphylococcus aureus meticilin resistente (SAMR), a bacilos gram negativos productores de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) y los factores pronósticos de amputación. Resultados: de la muestra de 167 pacientes, 79% fueron hombres, con una edad media de 62 años y una historia de diabetes de más de 20 años de evolución. La estancia media hospitalaria fue de 17 días (rango 7-21 días. Los pacientes tenían mayoritariamente diabetes tipo 2 (89%), mal control metabólico (66%), hipertensión (89%), exceso de peso (80%) y eran fumadores (50%). Las úlceras eran digitales (73%), mayores de 2 cm. (57%) y profundas (85,6%). Casi el 40% de las úlceras presentaba afectación ósea. En las úlceras más graves (IDSA) (34%) el microorganismo más frecuente fue SAMR. La mitad de los cultivos fueron monomicrobianos. El microorganismo más frecuentemente aislado fue S. aureus (36%) seguido de E. coli (17%) y P. aeruginosa (5%). De las 82 infecciones de pie diabetico causadas por cocos gram positivos, (47 -28%- SAMR); y 85 por bacilos gram negativos (68 -40%- productores de BLEE). El análisis multivariante mostró que la vasculopatía periférica [OR 2,47; IC 95% (1.068-4.727)], el uso previo de fluorquinolonas [OR 2,78; IC 95% (1,156-6,685)] y la profundidad [OR 8,563; IC 95% (1,068-4,727)] permiten explicar el 71,8 % de las infecciones por staphylococcus aureus meticilin resistentes. En el caso de los bacilos gram negativos productores de BLEE, el análisis multivariante mostró que la osteomielitis [OR 6,351; IC 95% (1,609-25,068)] y el uso previo de cefalosporinas [OR 5,824; IC 95% (1,517-22,361)] permiten explicar el 80,9% de las infecciones. Respecto a las amputaciones, el estudio multivariante mostró que la vasculopatía grave [OR 2,7; IC 95%(1,142-6,377)] y la supuración [OR 3,4; IC 95% (1,331-8,642)] permiten explicar el 70,7 % de las amputaciones. Conclusiones: Hemos estudiado 167 pacientes por infecciones de úlcera de pie diabético con una edad media de 62 años y con diabetes tipo 2 mayoritariamente. Las úlceras más frecuentes son crónicas, de más de 2 cm de diámetro y profundas, en las cuales el microorganismo más frecuentemente hallado es S. aureus seguido de E. coli y P. aeruginosa en las más graves. Como factores predictivos asociados de forma independiente a las infecciones por S. aureus meticilin resistente encontramos la vasculopatía periférica, el uso previo de antibiótico y las úlceras profundas. En el caso de los bacilos gram negativos productores de BLEE, encontramos asociados de forma independiente la afectación ósea y el uso previo de antibióticos. Como factores pronósticos asociados de forma independiente a la amputación encontramos la vasculopatía grave y la supuración prolongada de la úlcera. Objectives: to evaluate the diabetic foot infections epidemiology, factors associated to MDRO-DFI and amputation prognostic factors in our hospital. Patients and methods: 167 patients with DFI and hospitalized at Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia; Spain) were prospectively studied from 2008 to 2012. Infections were diagnosed according to the IDSA severity score. The microbiological methodology was adjusted to Gorbach criteria. All epidemiologic and clinical data were collected during hospitalization according to a standard protocol. Epidemiology, Risk factors for methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA), extended spectrum producing beta-lactamases enterobacteria (ESBL-producing bacteria) and amputation DFI were analyzed. Results: out of 167 patients, 79% were males, with an average age of 62 and diabetes history of 20 years. The average length of stay was 17 days (7-21 range). Our patients had type 2 diabetes (89%), poor metabolic control (66%), hypertension (89%), overweight (80%) and were smokers (50%). The ulcers were digitals (73%), bigger than 2 cm. (57%) and deep (85,6%). Almost 40% of them had bone infection. The ulcers were severe (IDSA) in 34% and in those the microorganism more frequently obtained was MRSA. Half of the samples had just one microorganism isolated, most frequent was S. aureus (36%) followed by E. coli (17%) and P. aeruginosa (5%). 82 DFI were considered to be caused by gram-positive cocci (47 -28%- MRSA); and 85 by gram-negative bacilli (68 -40%- ESBL-producing bacteria). In multivariate analyses, statistically significant independent factors for MRSA infections included: wound depth (OR 8.563, 95%CI 1.097-66.842), peripheral vasculopathy (OR 2.247, 95%CI 1.068-4.727) and fluoroquinolon previous use (OR 2.78, 95%CI 1.156-6.685); independent factors for ESBL-producing bacteria DFI were osteomyelitis (OR 6.351, 95%CI 1.609-25.068) and previous cephalosporin administration (3 months before) (OR 5.824, 95% CI 1.517-22.361); independent factors associated with amputation were severe vasculopathy [OR 2,7; IC 95%(1,142-6,377)] and long ulcer discharge[OR 3,4; IC 95% (1,331-8,642)]. Conclusions: We have studied 167 patients for DFI, almost all of them had type 2 diabetes and an average age of 62 years. The more frequent ulcers are chronic, bigger than 2 cm and deep, in which the main microorganism isolated was S. aureus and in those severe SAMR followed by E. coli and P. aeruginosa. Our study detects an association in patients with DFI between MRSA infection and wound depth, peripheral vasculopathy and previous fluoroquinolon use; ESBL-producing bacterial infection is associated to osteomyelitis and previous cephalosporin treatment. We found as prognostic factors of amputation severe vasculopathy and long ulcer discharge.
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Mecanismos moleculares de la traducción cap-independiente de MNSV: análisis estructural y funcional de los factores virales y del huésped= Molecular mechanism of cap-independent translation of MNSV: structural and functional analysis of the viral and host factors involved
(2016-09-02) Miras Marín, Manuel; Truniger Rietmann, Verónica; Aranda Regules, Miguel A.; Escuela Internacional de Doctorado
La traducción cap-independiente es frecuente en ARNs virales, los cuáles carecen de estructura 5’-cap y/o cola poli(A) típicas de los ARNm eucarióticos. En su lugar, muchos virus de ARN de plantas tienen elementos de ARN en sus 3’-UTRs capaces de potenciar la traducción independiente de cap (3’-CITEs). Se ha descrito que estos 3’-CITEs se unen directamente y requieren de factores de iniciación a la traducción. (eIF) para su actividad. Hemos demostrado que la traducción cap-independiente de los ARNs del Virus de las manchas necróticas del melón (MNSV) está controlada por un 3’-CITE en cis. La evidencia genética sugiere una interacción entre la subunidad eIF4E de melón y el 3’-CITE. Sin embargo, la interacción entre el 3’-CITE y eIF4E permanece sin caracterizar. El conocimiento adquirido de esta interacción podría ser usado en estrategias antivirales. De manera importante, la resistencia a MNSV se ha demostrado que está mediada por eIF4E y, recientemente, se ha identificado un nuevo aislado capaz de superar esta resistencia. Por este motivo, los objetivos de esta tesis están enfocados en esclarecer los mecanismos de traducción cap-independiente de ARNs de MNSV y la caracterización de este nuevo aislado que supera la resistencia. En el primer capítulo se ha llevado a cabo la caracterización de este nuevo aislado de MNSV capaz de superar la resistencia mediada por eIF4E. La secuencia nucleotídica del nuevo aislado, denominado MNSV-N, mostró una alta similitud con el resto de aislados de MNSV que no superan la resistencia, incluso en su 3´-UTR. Sin embargo, el inicio de su 3´-UTR contiene una inserción de 55 nucleótidos que es casi idéntica al comienzo del 3´-UTR del virus del amarilleo de las cucurbitáceas transmitido por pulgones (Cucurbit aphid-borne yellows virus) (CABYV), indicando que MNSV-N es un recombinante entre MNSV y CABYV. Mediante la construcción de virus quiméricos se localizó el determinante de virulencia de MNSV-N en su 3´-UTR. Estudios de traducción in vivo en protoplastos de melón demostraron que la inserción de 55 nt funciona como un 3’-CITE y es el responsable de la superación de la resistencia. Así mismo, se clasificó por su estructura secundaria como una nueva clase de 3’-CITE mediante la realización de Selective 2′-hydroxyl acylation analyzed by primer extension (SHAPE). En el segundo capítulo, se realizó un análisis estructural y funcional del 3’-CITE y del factor asociado a él, eIF4F, que ambos controlan la traducción de los ARNs de MNSV. Para ello, primero se delimitó a 45 nucleótidos la secuencia mímina capaz de estimular la traducción in vivo en protoplastos de melón. A continuación, estudiamos su estructura secundaria mediante SHAPE y su capacidad para unir al complejo eIF4F en ensayos de UV-Crosslinking seguido de PAGE. Los ensayos in vitro revelaron la unión a eIF4F a través de una zona desapareada del 3’-CITE. Los análisis mutacionales realizados en esa zona conllevaron con la pérdida de traducción y de unión a eIF4F. Por último, los ensayos de mutantes en eIF4E co-agroinfiltrados en trans llevados a cabo, nos sugieren que el complejo eIF4F es necesario para la traducción de estos ARNs, ya que la rotura de la interacción eIF4E:eIF4G está asociada con una pérdida de la actividad traduccional. Por último, en el tercer capítulo estudiamos el modo de interacción entre eIF4E y eIF4G ya que hemos determinado que es necesaria para la traducción de los ARNs virales de MNSV. Para ello se cristalizó la subunidad eIF4E, libre y unida a una versión truncada de eIF4G1003-1092. La difracción por rayos X de los cristales del complejo eIF4F reveló un segundo dominio de unión en eIF4G. Este segundo dominio, o dominio no-canónica, está en contacto con la superficie lateral de eIF4E, la cuál está compartida por otras proteínas que contienen también este segundo dominio de unión. Estos datos sugieren que la interacción eIF4E:eIF4G es bipartita y que hay una competición entre eIF4G y otras proteínas por estas superficies de eIF4E para regular la traducción. SUMMARY Cap-independent translation is frequent for viral RNAs, which are often devoid of 5′-cap structure or/and 3′-poly(A) tail typical of eukaryotic mRNAs. Instead, many plant RNA viruses contain in their 3´-UTRs RNA elements able to enhance their cap-independent translation (3´-CITEs). It has been reported that 3´-CITEs directly bind and require eukaryotic translation initiation factors (eIF) for their function. We have shown that cap-independent translation of Melon necrotic spot virus (MNSV, family Tombusviridae) RNAs is controlled by a 3´-CITE in cis. Genetic evidence indicates that the eIF4E subunit of melon eIF4F is necessary for cap-independent translation of avirulent MNSV RNAs. However, the interaction between 3’-CITE and eIF4E remains uncharacterized. The knowledge gained of this interaction may be used in antiviral strategies. Importantly, MNSV resistance was showed to be eIF4E-mediated and recently, a new resistance-breaking MNSV isolate was identified. Thus, the aims of this thesis is focused on elucidating the mechanisms of cap-independent translation of MNSV RNAs and characterize this new resistance- breaking isolate. In the first chapter, we characterized the newly resistance-breaking MNSV isolate, MNSV-N. It was found a 55 nucleotide insertion in its 3’-UTR which was acquired by interfamilial recombination with the 3’-UTR of an Asiatic Cucurbit aphid-borne yellows virus (CABYV, family Luteoviridae) isolate. By constructing chimeric viruses and assaying their properties, we showed that the recombined sequence is responsible for the MNSV-N ability to break down the eIF4E-mediated resistance. Analysis of the translation effiency showed that the insertion funcstions as a 3’-CITE. The structural and functional characterization of this 3’-CITE was set up by Selective 2′-hydroxyl acylation analyzed by primer extension (SHAPE) and showed that it belongs to a new structural class that we called CXTE (CABYV Xinjiang-like translation element) and functions in absence of eIF4E. In the second chapter, to understand the cap-independent translation of MNSV RNAs, we performed a structural and functional analysis of the 3’-CITE of avirulent MNSV isolates and its partner eIF4F. Thus, we defined the minimal size of the 3´-CITE in “in vivo” translation assays to a sequence of 45 nucleotides. Hereafter, we studied its secondary structure by SHAPE and its ability to bind eIF4F by UV-crosslinking and footprinting assays. In vitro binding assays revealed eIF4F-binding sites on a bulge of 3’-CITE. Mutational analyses in eIF4E revealed amino acids involved in cap-independent translation and suggested that the eIF4F complex is necessary for an efficient translation because the disruption of the complex is associated with a loss in translation activity. Finally, in the third chapter we studied the binding mode of the eIF4E:eIF4G interaction. We previously showed that this binding is required for MNSV RNAs efficiently translate. Thus, subunit eIF4E free and in complex with a truncated eIF4G1003-1092 were crystallized. X-ray data revealed a second eIF4E-binding domain in eIF4G. This second binding domain, or non-canonical binding motif, contacts with the lateral surface of eIF4E which it is shared with other eIF4E-binding proteins (4E-BPs). This data suggests a bipartite eIF4E:eIF4G binding mode that competes with 4E-BPs in translation regulation.
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Parasitofauna de pingüinos pigoscélidos : morfología, infección, caracterización molecular y aplicaciones
(2015-01-08) Vidal Burgos, Virginia; Barbosa Alcón, Andrés; Ortiz Sánchez, Juana; Facultad de Veterinaria
A pesar de su aislamiento geográfico, el ecosistema antártico no está libre de la presencia de agentes infecciosos. Con esta tesis se pretende contribuir al conocimiento de los macroparásitos gastrointestinales de tres especies de pingüinos antárticos (Pygoscelis papua, Pygoscelis adeliae y Pygoscelis antarctica). Para ello se realizaron necropsias de individuos encontrados muertos de forma natural. Se recolectaron un total de 79 individuos en diferentes islas del archipiélago Shetland del Sur e islas situadas más al sur, adyacentes a la península Antártica. La gran mayoría de los pingüinos analizados estuvieron parasitados, mostrando una prevalencia global del 89 %. Sin embargo, el número de especies que se hallaron fue muy escaso, tan solo seis (Tetrabothrius pauliani, Parorchites zederi, Stegophorus macronectes, Pseudoterranova sp, Corynosoma sp.1 y Corynosoma sp.2). De ellos, solo los tres primeros, pueden ser considerados parásitos genuinos de las especies de pingüinos pigoscélidos, mientras que los restantes deberían ser tratados como parásitos accidentales. Esta escasa variedad específica puede explicarse por la alta especialización trófica (estenofagia) de los pingüinos que se alimentan principalmente de krill. La dificultad para la identificación de parásitos adultos fraccionados, en mal estado o de otros estadios de desarrollo de los helmintos como huevos o larvas, nos induce a considerar el empleo de técnicas alternativas para su diagnóstico e identificación como son los métodos moleculares. En este caso, la información molecular referente a las especies de parásitos aquí tratadas, así como de géneros y familias cercanas, es muy escasa, por lo que se procedió a realizar la caracterización molecular de las dos especies parásitas más prevalentes, Stegophorus macronectes y Parorchites zederi, obteniendo la secuencia del ADNr (18S, ITS1, 5.8S, ITS2 y 28S) de S. macronectes y la secuencia del ADNr 18S de P. zederi. Ambas secuencias fueron depositadas en la base de datos GenBank. Considerando que la información disponible de las relaciones filogenéticas de estas especies era nula, a partir de los datos moleculares obtenidos, concretamente con el ADNr 18S de S. macronectes y P. zederi, se realizaron estudios filogenéticos del orden al que pertenece cada especie (Spirurida y Cyclophyllidea, respectivamente) con el objetivo de clasificar molecularmente a estas especies dentro de su grupo. Por último, para obtener nuevos métodos diagnósticos, se desarrollaron sondas moleculares del parásito más prevalente, S. macronectes, a partir de las regiones ITS, y se probaron sobre individuos de la misma especie, especies cercanas, huevos y heces. SUMMARY In spite of its geographic isolation, the Antarctic ecosystem is not free from the presence of infectious agents. This thesis aims to contribute to the knowledge of gastrointestinal parasites from three species of antarctic penguins (Pygoscelis papua, Pygoscelis adeliae and Pygoscelis antarctica). To do so, necropsies were carried out on individuals who had died due to natural causes. An amount of 79 individuals were collected from different islands of the South Shetland Archipelago and from islands located in a southward direction, adjacent to the Antarctic Peninsula. The vast majority of penguins analyzed were parasitized, showing an overall prevalence of 89%. However, the number of parasites species found was very low, only six (Tetrabothrius pauliani, Parorchites zederi, Stegophorus macronectes, Pseudoterranova sp., Corynosoma sp.1 and Corynosoma sp.2). Only T. pauliani, P. zederi and S. macronectes could be considered genuine parasites from pygoscelid penguins, the remaining should be considered accidental parasites. This small variety in parasite species may be due to the high trophic specialization (stenophagia) of penguins, as they mainly feed on krill. The challenge to identify fractionated adult parasites, in bad condition or in other developmental stages such as eggs or larvae, leads us to carry out alternative techniques for diagnosis and indentification such as molecular methods. In these cases, the molecular information regarding the parasite species analyzed here, as genera and inmediate families is very scarce, so we proceeded to perform the molecular characterization of the two most prevalent parasite species: Stegophorus macronectes and Parorchites zederi, obtaining the sequence of rDNA (18S, ITS1, 5.8S, ITS2 and 28S) from S. macronectes and the 18S rDNA sequence from P. zederi. Both sequences have been deposited in the GenBank database. Due to null molecular phylogenetic information of these species, new studies were performed. Hence, 18S rDNA of Stegophorus mecronectes and Parorchites zederi were used in order to classify them molecularly within their orders. Finally, for obtaining new diagnostic methods, molecular probes of the most prevalent parasite, S. macronectes, were developed from the ITS regions and tested on individuals of the same species, closely-related species, eggs and feces.
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Patología cervical : valor predictivo de la técnica inmunocitoquímica p16/ki67 para detectar lesión CIN2+ subyacente
(2015-06-26) Torroba Carón, María Amparo; Nieto Díaz, Aníbal; Poblet Martínez, Enrique; Escuela Internacional de Doctorado
El carcinoma de cérvix representa la tercera neoplasia más frecuente en el mundo en las mujeres y una de las causas principales de muerte en países en vías de desarrollo. El virus del papiloma humano (VPH) es causa necesaria pero no suficiente para el desarrollo de esta neoplasia, puesto que casi todos los casos diagnosticados (99%) resultan positivos. Está totalmente asumido que el screening periódico con el test de Papanicolau es efectivo en reducir la incidencia y mortalidad del cáncer cervical, aunque en ocasiones puede presentar baja sensibilidad. La determinación de VPH-AR aporta baja especificidad, dado que la mayoría de infecciones por VPH son transitorias (hasta un 90% de las infecciones se aclaran en los dos primeros años). Nuestro estudio versará de cómo un marcador dual inmunocitoquímico (p16/ki67) puede indicar la desregulación del ciclo celular causado por oncoproteínas del VPH: E6 y E7. OBJETIVOS: El objetivo principal de esta tesis es: o Comprobar si la tinción dual con biomarcadores p16INK4a y Ki-67 que se expresan en las células de las citologías diagnosticadas de ASC y LSIL se asocia bien con lesión CIN2+ subyacente, o con progresión en un período determinado a CIN2+ Y los objetivos secundarios: o Comparar la tasa de positividad, sensibilidad y especificidad para citología con tinción dual versus determinaciónVPH-AR, para detectar lesiones CIN2+ o Ver qué relación guarda la positividad de la técnica dual p16/ki-67 con los distintos genotipos virales de alto riesgo, en los casos confirmados histológicamente como CIN2+. Frecuencia de los distintos genotipos en estas lesiones METODOLOGÍA GENERAL: • OBJETIVO PRINCIPAL: Se seleccionaron 306 pacientes a las que se les realizó técnica dual inmunocitoquímica p16/ki-67. Tras su realización se valoró como positiva o negativa. De las 306 muestras citológicas, el 50% de ellas se siguió de toma biópsica, con tres posibles diagnósticos: negativo para displasia (16), CIN1 (80) y CIN2+ (57). o El “gold standard” es el diagnóstico histológico de CIN2+ o El seguimiento de las pacientes fue de 1 día hasta 30 meses en algún caso • OBJETIVO Nº2: A 146 pacientes de las 306 se les realizó además tests de VPH: captura híbrida (HC2) y genotipado por PCR (Clart® HPV2). • OBJETIVO Nº3: De las 57 pacientes en las que se confirmaron histológicamente lesiones de CIN2+ se enviaron cortes de tejidos embebidos en parafina (TEP) a la unidad de virología para genotipado con PCR (método Clart®). RESULTADOS: OBJETIVO PRINCIPAL: o Se obtiene un aumento significativo de la sensibilidad para detectar lesión CIN2+ subyacente, manteniendo la alta especificidad que ya aportaba el test de papanicolau por sí solo. o Se observan leves diferencias en sensibilidad/especificidad entre los ASC y los LSIL OBJETIVO Nº 2: Se observa, tanto en ASC como en LSIL, una similar sensibilidad entre ambos tests (técnica dual y determinación de VPH) para detectar lesión CIN2+ subyacente cercana al 90%, existiendo sin embargo una especificidad mayor para la técnica dual, estadísticamente significativa. OBJETIVO Nº3: Se diagnosticó CIN2+ en 57 pacientes de las 306 incluídas en el estudio (18,6%). En más de la mitad de los casos (el 56%) la infección fue por un único genotipo, siendo el más frecuente el 16 (en 14 pacientes, el 50% de los casos positivos para VPH-AR), seguido del 31, y después con la misma frecuencia el 18, 45, 51 y 58. En los casos de infección múltiple también es el genotipo 16 el que más frecuentemente se asocia con otros genotipos (hasta en un 59% de los casos). El VPH 18 sólo aparece asociado en un 18% con otros genotipos. La frecuencia absoluta ha sido para el VPH16, seguido del 31 y posteriormente del 18. SUMMARY Cervical cancer is the third most common neoplasia in women and still is one of the main causes of death in less developed countries. Human papillomavirus (HPV) is necessary but not sufficient cause for this neoplasia as almost all the diagnosed cases (99%) were positive for cervical cancer. Regular screening together with the performance of a Pap test are believed to be effective in lowering cervical cancer incidence and mortality rates, although it can show low sensitivity. HR-HPV tests have a low specificity as most HPV infections are temporary (up to 90% of the infections resolve within the first two years). Our study will deal with how immunocytochemistry involving dual staining for p16 and Ki-67 can show cell cycle deregulation caused by HPV oncoproteins: E7 inactivates pRb, so p16 overexpression increases dramatically, and E6 stimulates the proliferative activity of Ki-67 by interfering with p53. OBJECTIVES: The main objective of this thesis is to: o Check that dual staining of ASC and LSIL cytology with p16INK4a and Ki-67 biomarkers is associated with an underlying CIN2+ lesion, or is progressing to CIN2+ over a specific period of time. And the following secondary objectives: o Comparing positivity, sensitivity and specificity rates for positive, dual stained results for dual staining cytology to determination of HR-HPV, in order to detect CIN2+ lesions. o Observing the connection of positive dual-stained results for p16 and Ki-67 with the different high-risk viral genotypes in histologically confirmed cases of CIN2+. Frequency with which different genotypes appear in these lesions. MATERIALS AND METHODS • MAIN OBJECTIVE: 306 selected patients underwent p16/Ki-67 dual immunostaining testing. The tests were positive or negative. Out of the 306 cytology samples, 50% were followed by bioptic sampling (histological analysis of 153 patients), with three possible diagnoses: negative for dysplasia (16), CIN1 (80) and CIN2+ (57). o The gold standard is the histologic diagnosis of CIN2+. o The Clinical Follow-up of patients took from 1 day up to 30 months in some cases. • OBJECTIVE No.2: 146 patients underwent HPV testing as well: Digene Hybrid Capture (HC 2) test and a PCR-based genotyping assay (Clart® HPV2). • OBJECTIVE No.3: Sections of paraffin-embedded tissues from the 57 patients were sent to the Department of Virology for a PCR-based genotyping assay (Clart® HPV2). RESULTS: MAIN OBJECTIVE: o Three hundred and forty-nine p16/Ki-67 dual-stained cytology tests were performed in 306 patients with ASC and LSIL diagnoses, resulting in a general and important rise in sensitivity for the detection of an underlying CIN2+ lesion, maintaining the same high specificity given only by the Pap test. o Some minor differences in sensitivity and specificity are found in ASC and LSIL. OBJECTIVE No. 2: In ASC and LSIL, both tests (dual staining and determination of HPV) have a similar sensitivity of 90% when detecting any underlying CIN2+ lesion, although a statistically significantly higher specificity of dual stained cytology has been observed. OBJECTIVE No. 3: CIN2+ has been diagnosed in 57 patients out of the 306 patients who participated in this study (18,6%). In more than half of the cases (56%), the infection was due to only one genotype, the most common being genotype 16 (in 14 patients or 50% of the HR-HPV-positive cases), followed by genotype 31 and then genotypes 18, 45, 51 and 58 with the same frequency. In cases of multiple infection, it is also genotype 16 which is most frequently associated with other genotypes (in up to 59% of the cases). HPV-18 is only associated with other genotypes in 18% of the cases. In order, the following absolute frequency was observed: HPV-16, 31 and finally 18.
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Perfil epidemiológico de sífilis congénita en una microrregión en el interior del estado de Bahia (2007-2017)
(Murcia: Servicio de publicaciones de la Universidad de Murcia, 2019) Almeida, Kaic Trindade; Santos, Álisson Neves; Costa, Ana Karla Araújo Nascimento; Santos, Myllena Rodrigues dos; Menezes, Ana Maria Fernandes; Alves, Kelle Araújo Nascimento
Objetivo:Analizar el perfil epidemiológico de Sífilis Congénita en 18 municipios en el interior del estado de Bahía entre 2007 y 2017.Método:Estudio descriptivo, transversal y cuantitativo de los casos confirmados de Sífilis Congénita en la microrregiónregistrados en el Sistema de Información de Agravios y Notificación.Resultados:En el período estudiado se confirmaron 39 casos, donde el 30,8% de las madres tiene entre 20 a 24 años, el 59% son pardas, el 46,2% tienen enseñanza fundamental incompleta, el 33,3% amas de casa, el 74,4% en el momento del parto / curetaje, el 41% recibió tratamiento inadecuado y el 38,5% de los socios no fueron tratados. Con respecto a los recién nacidos, el 69,2% fue diagnosticado con 0 días de vida, 74,4% con Sífilis Congénita reciente y 46,2% asintomáticos.Conclusión:Los datos revelan un serio problema de salud pública en la microrregión analizada apuntando también fallas en el sistema de notificación, observadas en el elevado índice de ignorados en las variables estudiadas.
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Uso de antibióticos en el Hospital Clínico Univesitario Virgen de la Arrixaca 2012 : estudio descriptivo, patrones de cambio (1978, 1982, 2012) e influencia del tratamiento antibiótico protocolizado en la evolución de los pacientes con infecciones
(2014-12-03) Bonillo García, Cristina; Gómez Gómez, Joaquín; García Vázquez, Elisa; Departamento de Medicina Interna
Objetivos: 1. Describir el uso de antibióticos en el Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) 2012. 2. Valorar la influencia de la protocolización del tratamiento antibiótico en la evolución del paciente con proceso infeccioso 3. Analizar los patrones de cambio en el uso de antibióticos (1978-1982-2012) 4. Evaluar los conocimientos, actitudes y las prácticas de prescripción de antibióticos entre los médicos del HCVA Pacientes y métodos: 1. Estudio prospectivo de todos los pacientes que recibieron tratamiento antibiótico a lo largo del mes de Abril de 2012. 2. Se analizaron los factores asociados a mortalidad y fallo terapéutico, definido como, persistencia microbiológica, recidiva o muerte. La significación estadística p <0,05 3. Las prescripciones de antibióticos fueron analizadas y comparados con las del mes de abril de 1978 (sin protocolo), 1982 (creación de comisión de enfermedades infecciosas y establecimiento de las líneas generales del control de antibióticos) y 2012 (protocolos bien establecidos y definidos incluyendo directrices para el tipo de infección y gravedad). Significación estadística p <0,05 4. Cuestionarios autoadministrados. Resultados: 1. 602 pacientes de 1265 pacientes ingresados durante el mes de estudio recibieron tratamiento antibiótico, siendo 178 considerado como prescripciones profilácticas y 342 tratamientos como empíricos. Ceftriaxona y levofloxacino fueron los antibióticos administrados con mayor frecuencia; 69% de los 424 tratamientos (no profilácticos) fueron considerados como adecuados. Hubo fracaso clínico en 110 casos (27%), fracaso microbiológico en 49 (13%), recaída en 31 (8%) y muerte en 30 (7,5%). 2. Los factores asociados al fallo clínico fueron, tratamiento inadecuado (OR 5.68, IC 95%: 2,898 a 11,217) y aislamiento de E. coli con producción de BLEE (OR 4,43 (IC del 95%: 1,492 a 13,184). 3. En el año 1978, el 46% de los pacientes ingresados recibieron tratamiento antibiótico, el 33% en 1982 y 49% en 2012 (p <0,05). En cuanto a los servicios médicos, la prescripción de antibióticos afectaba al 37%, 47% y 59% de los pacientes, en 1978, 1982 y 2012, respectivamente (p <0,05). La tasa de adecuación fue de 49%, 53% y 69% en los 3 periodos diferentes (p <0,05 para el año 2012 en comparación con 1978 o 1982); 35%, 32% y 21% de los pacientes recibieron más de 2 antibióticos en 1978, 1982 y 2012, respectivamente (p <0,05 para el año 2012 en comparación con 1978 o 1982). 4. Se completaron un total de 316 cuestionarios; dosis de antibiótico, vía de administración y duración del tratamiento se ajustaron siempre según la localización de la infección y las condiciones subyacentes en un 65%, 68% y 45%, respectivamente. La desescalada antibiótica fue reconocida como práctica habitual en el 20%; las posibles resistencias microbiológicas y el coste económico fueron considerados en un 31% y el 10% respectivamente; el 69% admite la administración de AB con, probablemente, ninguna indicación clínica. Conclusiones: 1. De 1265 pacientes ingresados en el HCUVA, 602 (49%) recibieron tratamiento antibiótico. Los antibióticos más usados fueron ceftriaxona y levofloxacino en los tratamientos terapéuticos y amoxicilina/ clavulánico en los profilácticos. La elección del antibiótico según protocolo fue adecuada en un 68,9% con una curación del 72,13%. 2. Como factores independientes asociados a peor evolución en el análisis multivariante encontramos, el tratamiento empírico y dirigido no adecuado a protocolo ; infección por E.coli multiresistente con BLEE y/o R a ciprofloxacino ; duración no adecuada del tratamiento antibiótico y la gravedad clínica inicial crítica 3. Como patrones de cambio en 2012 encontramos que el uso de antibióticos se asoció de forma significativa, con mayor adecuación, incremento de las prescripciones en los Servicios Médicos y aumento de la monoterapia como principal régimen terapéutico en comparación a los estudios de 1978 y 1982. No encontramos diferencias de su consumo entre 1978 y 2012. 4 .Las respuestas obtenidas en esta encuesta ponen de manifiesto el aparentemente limitado conocimiento de los médicos hospitalarios Objetives: 1. To descriptive the use of antibiotics in the Clinical Univertitary Hospital Virgen de la Arrixaca (HCUVA). 2. To analyze factors associated to “failure” in patients under antibiotic treatment with infectious process 3. To analyze antibiotic prescription (ABP) at our hospital comparing 3 different periods of time with different ABP policies (ABPP). 4. To evaluate knowledges attitudes and practices of antibiotic prescribing among doctors at a university hospital. Patients and methods: 1. all patients receiving an antibiotic treatment along April 2012 were prospectively observed. 2. Factors associated to mortality and clinical failure were analyzed. Failure was defined as microbiological failure, relapse or death. Statistically significance was established as p<0.05 3. all ABP per in-patients along April were analyzed and compared in 1978 (no special ABPP), 1982 (an infectious diseases comity was created and general lines of ABPP were established) and 2012 (ABPP were well established and defined including guidelines by infection and severity). Statistically significance was established as p<0.05 4. self-administered questionnaires. Results: 1. 602 of 1265 admitted patients during the study month included an AB in their medical prescriptions, being 178 considered as prophylactic AB prescriptions and 342 as empiric treatments. Ceftriaxone and levofloxacin were the most frequent AB; 69% of the 424 AB (non prophylactic) treatments were considered as adequate. 2. Clinical failure was recognized in 110 cases (27%), microbiological failure in 49 (13%), relapse in 31 (8%) and death in 30 (7.5%). Factors associated to “failure” were and Charlson score ≥3 ( OR 3.35, 95% CI 1.602-7.009); inadequate empirical treatment (OR 5.68, 95%CI 2.898-11.217) and ESBL producing E. coli isolation (OR 4.43 (95% CI 1.492-13.184). 3. in 1978, 46% of admitted patients included an AB in their treatments, 33% in 1982 and 49% in 2012 (p<0.05 as for 1982 compared to 1978 or 2014). As for medical departments, AB prescription affected 37%, 47% and 59% of the patients, in 1978, 1982 and 2012 respectively (p<0.05). Rate of adequacy was 49%, 53% and 69% in the 3 different periods (p<0.05 as for 2012 compared to 1978 or 1982); 35%, 32% and 21% of the patients received >2 antibiotics in 1978, 1982 and 2012 respectively (p<0.05 as for 2012 compared to 1978 or 1982). 4. a total of 316 questionnaires were completed; antibiotic dose, route of administration and treatment duration were always adjusted according to site of infection and underlying conditions in 65%, 68% and 45%, respectively. Antibiotic de-escalation was recognized as usual practice in 20%; 31% and 10% considers potential microbiological resistances and economical-cost when taking prescription decisions, respectively; 69% admits AB administration with probably no clinical indication. Conclusions: 1. 49% of admitted patients received antibiotic treatment, being ceftriaxone and levofloxacin the most used antibiotic in therapeutic and amoxicilin/ clavulanic in prophylactic. The choice of antibiotic was adequate in 68.9% with a 72.13% succes rate. 2. E.coli ESBL and / or R to ciprofloxacin; inadequate duration of antibiotic treatment and initial clinical severity is associated to clinical or microbiological failure and death. 3. increasing higher rates of in-patients include an AB in their treatments, being monotherapy and prescription in medical departments more frequent in the recent cohort. The rate of adequacy is higher in 2012 than in previous cohorts, probably related to the implement of ABPP 4. answers of questionary shows the apparently limited knowledge of physicians so an antibiotic stewardship program is needed in our hospital .

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