Browsing by Subject "Cultivo celular"
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- PublicationOpen AccessBiocompatibilidad "in vitro" de nuevos productos de eliminación de caries químico-mecánicos en células madre de pulpa dental humana(Universidad de Murcia, 2024-03-04) Pérez Guzmán, Nuria; López García, Sergio; Pecci Lloret, María Pilar; Escuela Internacional de DoctoradoIntroducción: La caries dental en la dentición permanente es la afección más prevalente entre todas las enfermedades humanas y afecta a más de 2500 millones de personas. Una de las técnicas aplicadas en la odontología mínimamente invasiva incluye la remoción químico-mecánica de la caries. La utilización de los materiales de remoción química de caries ha demostrado reducir la ansiedad, el dolor y la necesidad de anestesia, y esto lo hace muy adecuado para el tratamiento de pacientes ansiosos o médicamente comprometidos. Objetivo: El objetivo de este estudio fue comparar las características biológicas de cuatro materiales de remoción químico-mecánica de caries para evaluar su biocompatibilidad usando células madre de pulpa de diente permanente. Material y Métodos: Los materiales analizados fueron Papacárie Duo®, BRIX3000®, Cariesolut y NATURAL-CARE. Los procedimientos para evaluar la biocompatibilidad de estos materiales fueron realizados sobre células madre de pulpa dental de diente permanente. En una cabina de Bioseguridad Tesltar nivel II se realizaron un total de siete experimentos: medición de la concentración inhibitoria media (IC50), medición de la actividad metabólica celular (MTT) (24, 48, 72 horas), experimento de migración celular (24, 48, 72 horas), experimento de inmunofluorescencia (72 horas), análisis de apoptosis y necrosis celular, análisis de producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y análisis del ciclo celular. Los análisis estadísticos se realizaron mediante ANOVA unidireccional y prueba post-hoc de Tukey (p<0,05). Resultados: En nuestros resultados se obtuvo que BRIX3000® mostró al 0,1% y 0,01% una citocompatibilidad equiparable a la del grupo control para todos los períodos de tiempo analizados. Papacárie Duo® presentó una citotoxicidad concentración-dependiente, mostrando una baja biocompatibilidad y viabilidad celular a altas concentraciones la cual mejoraba al diluir el material. NATURAL-CARE presentó un comportamiento similar al observado en Papacárie Duo®, llegando a alcanzar a bajas concentraciones (0,01%) resultados más favorables en los experimentos de migración celular y de inmunofluorescencia con respecto a dicho material y semejantes a los del control. Cariesolut fue el material que mayor citotoxicidad 4 TESIS DOCTORAL- NURIA PÉREZ GUZMÁN demostró en todos los casos. Los resultados sugieren que BRIX3000® a altas concentraciones es capaz de levantar las células cultivadas sin llegar a producir su apoptosis, permitiendo una viabilidad celular bastante aceptable a bajas concentraciones; Papacárie Duo® y NATURAL-CARE si llegan a producir muerte celular a altas concentraciones, mejorando su biocompatibilidad al disminuir su concentración. Conclusiones: Nuestros hallazgos sugieren que BRIX3000® sería el material más adecuado para realizar una remoción química de caries, siendo buenas opciones también Papacárie Duo® y NATURAL-CARE, y desaconsejando la utilización de Cariesolut debido a su baja biocompatibilidad sobre células de pulpa dental de diente permanente.
- PublicationOpen AccessCaracterización de exosomas producidos por células oviductales in vivo e in vitro, en la especie bovina(Facultad de Veterinaria y el Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2023) Toledo Guardiola, Santa María; Matás Parra, Carmen; Rueda Gomariz, AlmudenaLas vesículas extracelulares (VEs), exosomas y micro vesículas son un tipo de estructuras heterogéneas pre-sentes en la mayoría de los fluidos orgánicos incluyendo el fluido oviductal. Las VEs contienen varios compuestos derivados de la célula original, como proteínas, lípidos, ARNm, miARN y ADN. Las VEs en el oviducto son producidas por las células epiteliales y entre sus funciones se encuentran: la interacción con los espermatozoides, mantener la viabilidad de éstos, participar en la maduración de los ovocitos y en el proceso de fecundación. Durante la fecundación in vitro y con el fin de mejorarla imitando las condiciones in vivo, numerosos investigadores han utilizado cultivos de células del epitelio oviductal bovino (CEOB) con notables mejoras. Estas células producen, entre otros componentes VEs, por ello, en este trabajo hemos planteado un estudio com-parativo de VEs presentes en el fluido oviductal (FO) bovino recogido en momentos próximos a la ovulación (in vivo) y de aquellas VEs producidas en cultivos de CEOB a los 7 días de cultivo (in vitro) comparando el tamaño, la distribución de la población y la concentración de proteína en ambos tipos. Las VEs se identificaron mediante microscopía electrónica, su tamaño mediante dispersión de luz láser y la concentración de proteínas mediante el método Bradford. Los resultados mostraron que el tamaño de las VEs fue similar entre ambos grupos experimentales. Por otro lado, sí que se observaron diferencias en cuanto a la concentración de proteínas. Las VEs obtenidas in vivocontenían mayor cantidad de proteína en su cargo que en las VEs obtenidas in vitro.En cuanto a identificación de las VEs mediante microscopía electrónica de transmisión, solo pudieron ser observadas aquellas obtenidas in vivo. Este hecho podría deberse al lugar de dónde han sido recogidas, al mét-odo de cultivo de células epiteliales oviductales bovinas o la escasez en su producción.
- PublicationOpen AccessRegeneración de la musculatura lingual de ratas hemiglosectomizadas mediante el trasplante de células madre progenitoras derivadas de músculo sobre matriz acelular de vejiga urinaria de cerdo(Universidad de Murcia, 2020-01-14) Lacal Luján, José; Camacho Alonso, Fabio; García Carrillo, Nuria; Escuela Internacional de DoctoradoObjetivos: El principal objetivo de este estudio fue aplicar la ingeniería tisular para la reparación muscular (ITRM) en la regeneración de la musculatura lingual de ratas hemiglosectomizadas, mediante el trasplante de células madre progenitoras derivadas de músculo (CMPDMs) sobre matriz acelular de vejiga urinaria (MAVU) de cerdo. Material y Métodos: A un total de 80 ratas macho adultas Lewis se les realizó un defecto homogéneo en el lado izquierdo de la lengua mediante una lesión con pérdida volumétrica de músculo (PVM). Las ratas fueron entonces randomizadas en cuatro grupos (n=20 por grupo): Grupo 1 (MAVU+ CMPDMs), Grupo 2 (MAVU), Grupo 3 (CMPDMs), y Grupo 4 (Control). Las CMPDMs para los Grupos 1 y 3 fueron obtenidos de los músculos paraespinales de una rata neonatal singénica. Los animales fueron pesados en el día 0 y en el momento de la eutanasia. Cinco ratas de cada grupo fueron sacrificadas los días 2, 14, 28 y 42 y sus lenguas fueron procesadas para análisis macroscópico morfométrico (porcentaje de la superficie del dorso lingual ocupado por PVM), peso postoperatorio de la hemilengua izquierda (diferencia en mg entre el peso del lado control–el peso del lado operado), y estudio histológico (grados de inflamación y fibrosis). Resultados: El orden de mayor a menor aumento de peso de los animales y presencia de nuevo tejido fue MAVU+CMPDMs > CMPDMs > MAVU > control, donde el grupo MAVU + CMPDMs mostró diferencias estadísticamente significativas (p≤0,05) en comparación con los otros tres grupos en los días 14, 28 y 42 para las dos variables. El orden de menor a mayor porcentaje de la superficie del dorso lingual ocupado por PVM, diferencia en mg entre el peso del lado control – el peso del lado operado, y los grados de inflamación crónica y fibrosis fue MAVU+CMPDMs > CMPDMs > MAVU > control, donde MAVU+CMPDMs mostró diferencias significativas (p≤0,05) respecto a los otros tres grupos en los días 2, 14, 28 y 42 para el porcentaje de la superficie del dorso lingual ocupado por PVM, y para la diferencia en mg entre el peso del lado control – el peso del lado operado. Conclusiones: El uso de un constructo de MAVU porcina y CMPDMs para la regeneración de la musculatura lingual de ratas hemiglosectomizadas, ha resultado ser un tratamiento efectivo de ITRM para la reparación de lesiones con PVM.