Browsing by Subject "Citología"

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    Análisis de la composición, estructura y función de las glicoproteínas de la zona pelúcida con especial referencia a la especie humana
    (Universidad de Murcia, 2012-02-23) Jíménez Movilla, María; Ballesta Germán, José Francisco; Avilés Sánchez, Manuel; Biología Celular
    En la presente tesis doctoral se han estudiados diferentes aspectos relacionados con la composición glucídica, estructura, formación y origen de la zona pelúcida y las glicoproteínas que la forman, poniendo especial interés en la especie humana. Para este propósito hemos desarrollado tres líneas principales de investigación, estudio ultraestructural de la zona pelúcida y gránulos corticales de ovocitos humanos y de la síntesis de las glicoproteínas de la ZP humana y de ratón, análisis bioquímico y biofísico de las glicoproteínas de la zona pelúcida de hámster y análisis bioquímico y fisiológico de ZP2 y ZP3 recombinantes humanas expresadas en células CHO. In the present thesis, several aspects of the carbohydrate content, structure, formation and origin of the ZP, with special attention to the human ZP, have been analyzed. Therefore, the methods and techniques used in the present thesis included the ultrasctuctural study of human ZP, cortical granules and biosynthetic pathway of the human and mouse ZP, biochemical and cytochemical characterization of the hamster zona pellucid and characterization of recombinant human ZP2 y ZP3 expressed in CHO cells.
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    Antithrombin role beyond hemostasis
    (Universidad de Murcia, 2024-10-11) Peñas Martínez, Julia; Martínez Martínez, Irene; Escuela Internacional de Doctorado
    La antitrombina es una glicoproteína secretada principalmente por el hígado y perteneciente a la superfamilia de las serpinas, que son inhibidores de serín proteasas, como algunas proteínas de la cascada de la coagulación, siendo, de hecho, el principal inhibidor fisiológico de esta cascada. La antitrombina tiene gran flexibilidad estructural, permitiéndole inhibir proteasas de la coagulación y adoptar distintas conformaciones: nativa, activada por heparina, rota, latente y prelatente. Las conformaciones latente y prelatente, con el loop reactivo internalizado en la lámina beta central, se forman in vitro al incubar la antitrombina nativa a temperaturas elevadas. La prelatente conserva su capacidad inhibitoria, aunque con menor afinidad por la heparina, y se presenta en vivo en bajas concentraciones. Además de su función en la hemostasia, la antitrombina tiene funciones anti-angiogénicas, anti-inflamatorias, anti-apoptóticas y anti-virales. Nuestro grupo demostró que la antitrombina activada por heparina también tiene un efecto anti-tumoral sobre células de glioblastoma, probablemente mediado por la inhibición de la enteropeptidasa. El glioblastoma es el tumor maligno primario más agresivo del sistema nervioso central en adultos, con una incidencia global menor de 10 por cada 100000 personas. A pesar de tratamientos agresivos, la mediana de supervivencia es de 12-15 meses tras el diagnóstico. Su baja tasa de supervivencia se debe a su heterogeneidad, capacidad invasiva, barrera hematoencefálica y células madre de glioma. La antitrombina, dada su diversidad conformacional y efectos pleiotrópicos, podría ser una candidata para un nuevo tratamiento del glioblastoma. Los objetivos de esta tesis han sido: 1. Caracterizar la función antitumoral de la antitrombina prelatente sobre células de glioblastoma multiforme. 2. Estudiar el mecanismo celular subyacente a la función antitumoral de la antitrombina nativa y prelatente en células de glioblastoma multiforme. 3. Identificar el receptor potencial de la antitrombina en células de glioblastoma y validar los resultados in vitro en un modelo preclínico usando organoides y muestras de pacientes con glioblastoma multiforme. Se purificó antitrombina prelatente a partir de plasma humano mediante cromatografía de afinidad por heparina, incubando antitrombina nativa a 60ºC durante 30 horas. Se caracterizaron las conformaciones nativa y prelatente evaluando la formación de complejos con FXa o trombina, y la afinidad por heparina. Se trataron células de glioblastoma U87 y/o U251 con 2.16 µM de antitrombina nativa, prelatente, o con buffer A (control), durante 11 horas. En el primer capítulo, se caracterizó la función antitumoral de la antitrombina en células U87, evaluando su interacción con la enteropeptidasa. Se determinó que la antitrombina prelatente inhibe la enteropeptidasa, aunque la nativa mostró un efecto inhibidor mayor en presencia de heparina. Se estableció que la concentración óptima de antitrombina para su efecto antitumoral es de 2.16 µM. Se observó que la antitrombina prelatente reduce la migración e invasión de células U87 sin heparina y más eficientemente que la nativa. La antitrombina prelatente también inhibe la expresión de VEGFA y STAT3, reduciendo la resistencia al tratamiento en glioblastoma multiforme. En el segundo capítulo, se estudió el mecanismo subyacente a la función antitumoral de la antitrombina prelatente. Un array de expresión mostró 2477 genes sobreexpresados y 6760 infraexpresados. Se seleccionaron 3 miRNAs alterados en el array relacionados con VEGFA para evaluar su implicación en angiogénesis, aunque no se obtuvieron resultados significativos. Se encontró que la antitrombina inhibe genes reguladores del ciclo celular como pRB y E2F4, inhibiendo la proliferación y la fase S del ciclo celular en células U87, pero no en U251. En el tercer capítulo, se identificó a la distonina como potencial receptor de la antitrombina en células U87. La antitrombina nativa y prelatente mostraron interacción con la distonina, implicada en la inhibición de la proliferación tumoral de células U87. Se evaluó la capacidad anti-invasiva de la antitrombina en un modelo preclínico con organoides y neuroesferas generadas a partir de la biopsia al diagnóstico y recaída de un paciente con glioblastoma, demostrando que ambas inhiben la invasión tumoral. Esta tesis demuestra el efecto antitumoral in vitro de las antitrombinas nativa y prelatente, asociadas con reducción de migración e invasión tumoral, menor resistencia al tratamiento, parada del ciclo celular, menor proliferación y función anti-angiogénica. La identificación de la distonina como potencial receptor podría ayudar a diseñar terapias dirigidas. Los resultados in vivo apoyarían el potencial terapéutico de la antitrombina prelatente en el glioblastoma.
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    Cambios celulares en el intersticio testicular del hámster (Mesocricetus auratus)durante el envejecimiento y en la regresión tras la exposición a fotoperíodo corto = Cellular changes in the testicular interstitium of hamster (Mesocricetus auratus) during aging and regression after exposure to a short photoperiod
    (2013-01-10) Beltrán Frutos, Ester; Ferrer Cazorla, Concepción; Pastor García, Luis Miguel; Facultad de Medicina
    El intersticio testicular en hámsters (Mesocricetus auratus) envejecidos y regresados por fotoperiodo corto ha sido caracterizado. Se estudió la proliferación y la apoptosis (TUNEL +) de células intersticiales, la actividad sintética a testosterona, HSP-47 y colágeno IV (α5) de las células de Leydig y la ultraestructura. Se cálculo el volumen total de tejido conjuntivo. El envejecimiento disminuye la proliferación de pericitos. El fotoperiodo corto altera la proliferación y la apoptosis de las células intersticiales y la actividad sintética de las células de Leydig. Disminuye el tejido conjuntivo intersticial. En conclusión el intersticio testicular del hámster envejecido sufre pocas modificaciones. Un menor recambio de las células de Leydig asociado a una muerte constante de ellas, necrosis, puede causar su disminución. Tras el fotoperiodo corto los cambios en las células de Leydig son evidentes, la proliferación de los pericitos es mayor y no hay muerte celular en el intersticio. Palabras clave: testículos, intersticio testicular, célula de Leydig, macrófago, pericito, célula mioide, proliferación, apoptosis, necrosis, tejido conjuntivo, colágeno IV (α5), HSP-47. Testicular interstitium in hamster during aging and after exposure to a short photoperiod were studied. The proliferation and apoptosis of interstitial cells and presence of testosterone, HSP-47 and collagen IV (α5) in the Leydig cells were studied histochemically and semiquantitatively. The total volume of connective tissue and the ultrastructure of the interstitial cells were studied. The aging only diminished the proliferation of pericytes. The regression resulting from short photoperiod altered the proliferation and apoptosis of interstitial cells and the synthetic activity of the Leydig cells. Interstitial connective tissue was also diminished. In conclusion, the hamster testicular interstitium undergoes little modification with aging, although the decrease in the Leydig cell renewal rate and constant cell death –necrosis- may result in their diminution. In contrast, after exposure to a short photoperiod, the changes in Leydig cells are evident and pericyte proliferation is greater, while no cell death is observed in the interstitium. Key words: testes, testicular interstitium, Leydig cells, macrophages, pericytes, myoid cells, proliferation, apoptosis, necrosis, connective tissue, collagen IV (α5), HSP-47.
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    Caracterización in vitro de células madre/estromales mesenquimales adiposas caninas modificadas mediante exofucosilación enzimática
    (Universidad de Murcia, 2024-02-07) Gil Chinchilla, Jesús Isaías; Marín Atucha, Noemí; Talavera López, Jesús; García Bernal, David; Escuela Internacional de Doctorado
    INTRODUCCIÓN Y OBJETIVO: Las células madre/estromales mesenquimales (MSC) son una población de células indiferenciadas con capacidad de autorrenovación y diferenciación a células de distintos linajes mesodérmicos. Su identificación y utilización terapéutica está generando grandes expectativas tanto en medicina humana como veterinaria gracias a su capacidad para secretar moléculas antinflamatorias e inmunomoduladoras, así como otras señales bioquímicas que estimulan la regeneración celular y reparación de los tejidos dañados. En estudios previos se ha comprobado que estos efectos tróficos beneficiosos se encuentran estrechamente relacionados con su capacidad de migración y extravasación hacia los tejidos inflamados. En estos tejidos, se expresan altos niveles de E-selectina, cuya expresión está regulada por citoquinas proinflamatorias como la IL-1 o el TFN-α. Sin embargo, las MSC carecen de la expresión de ligandos para E-selectina como CLA (glicoforma sialofucosilada de PSGL-1) o HCELL (glicoforma sialofucosilada del receptor CD44), lo cual limita su capacidad de migración a los tejidos dañados y afectando por tanto a su eficacia terapéutica tras su administración intravenosa. No obstante, se están desarrollando distintas estrategias para mejorar la capacidad de migración in vivo de las MSC hacia estos tejidos, siendo una de ellas la glicoingeniería de la superficie celular donde destaca la exofucosilación enzimática. Esta técnica consiste en la modificación transitoria del receptor CD44 presente en las MSC, que por medio de un proceso enzimático es transformado en la molécula HCELL que es el ligando más potente de E-Selectina. El objetivo principal de este estudio consistió en determinar si era posible fucosilar de forma efectiva las MSC derivadas del tejido adiposo (AT-MSC) caninas, y si este proceso de exofucosilación enzimática provoca alguna alteración en sus propiedades y/o características celulares y funcionales, evaluando además su preservación en condiciones de refrigeración con vistas a un posible uso terapéutico en la práctica clínica veterinaria. MATERIALES Y MÉTODOS: Las AT-MSC fueron aisladas a partir de lipoexplantes de grasa procedentes de perros donantes (n=10). Para ello, una vez en el laboratorio los lipoexplantes fueron sometidos a una digestión mecánico-enzimática, obteniéndose el cultivo primario y los siguientes subcultivos hasta llegar a pase 2-4, momento en el que fueron sometidas a la exofucosilación enzimática para la realización de los experimentos planificados: 1) Verificación del proceso de exofucosilación enzimática de las AT-MSC caninas; 2) Determinación de la estabilidad de la exofucosilación enzimática en las AT-MSC FUC en condiciones de cultivo (37ºC) y en refrigeración RESUMEN - 267 - (4ºC); 3) Caracterización celular de las AT-MSC FUC en función de su morfología celular, inmunofenotipo y capacidad de diferenciación multipotencial hacia células del tejido adiposo, óseo y cartilaginoso; 4) Caracterización funcional de las AT-MSC FUC determinando su capacidad de proliferación, de migración, de secreción y de inmunomodulación celular; y 5) Estudio de la viabilidad celular en condiciones de refrigeración (4ºC) de las AT-MSC caninas tras su fucosilación. Los datos fueron recopilados en una base de datos Excel© v.19 y analizados mediante el software GraphPadPrism© v.8. RESULTADOS: Nuestros resultados mostraron que las AT-MSC caninas pueden ser fucosiladas de forma efectiva (>98%), revirtiéndose este proceso en condiciones de cultivo celular en menos de 72h en condiciones de cultivo celular (6%) pero manteniéndose estable y funcionales en condiciones de refrigeración (4ºC) durante al menos 4 días (>90%). Además, observamos que las AT-MSC FUC mantienen sus características celulares conservando su morfología, inmunofenotipo celular, capacidad de diferenciación multipotencial hacia tejido adiposo, óseo y cartilaginoso, y capacidad de proliferación. Sin embargo, encontramos que la exofucosilación enzimática aumenta 1,7 veces más su capacidad de migración, y que se vuelven más antinflamatorias e inmunomoduladoras, potenciándose estos efectos aún más en presencia de citoquinas proinflamatorias (TNF-α + IFNγ) como las que se expresan en los tejidos inflamados o dañados. Por último, también observamos que la exofucosilación enzimática no afecta de forma significativa a la viabilidad celular de las AT-MSC caninas, pudiendo además mantenerse funcionales mediante refrigeración a 4ºC durante al menos 4 días.y con una viabilidad celular superior al 90%. CONCLUSIONES: A la vista de los resultados obtenidos, podemos concluir que la exofucosilación enzimática es una técnica factible y segura para su aplicación en AT-MSC caninas, ya que no afecta de forma significativa a las características celulares propias de estas células mesenquimales, y que de forma importante potencia su capacidad de migración y sus efectos terapéuticos antinflamatorios e inmunomoduladores, pudiendo emplearse esta modificación celular para optimizar y mejorar las propiedades de las AT-MSC caninas. De este modo en un futuro próximo esta técnica podría ser utilizada en la práctica clínica veterinaria para el tratamiento de diversas patologías de base inflamatoria y/o inmunomediadas.
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    Caracterización molecular y celular de la biosíntesis y composición de la zona pelúcida de ovocitos de hámster (Mesocricetus auratus). Análisis filogenético de la glicoproteína ZP4 en la subfamilia Murinae
    (Universidad de Murcia, 2010-01-15) Izquierdo Rico, María José; Avilés Sánchez, Manuel; Jiménez-Cervantes Frigols, Celia; Departamentos y Servicios::Departamentos de la UMU::Biología Celular e Histología
    En la presente Tesis Doctoral se realiza un estudio acerca de la composición y origen de la zona pelúcida de ovocitos de hámster. En este estudio se demuestra la existencia de cuatro glicoproteínas en su composición (ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4) y se describe al ovocito como lugar exclusivo de síntesis de estas glicoproteínas. Además, se inicia un estudio desde el punto de vista evolutivo de la proteína ZP4 en roedores y concretamente en la subfamilia Murinae. Abstract: In this doctoral thesis, we analyzed the origin and the composition of hamster ZP. In this study we demonstrated that the hamster zona pellucida is formed by four glycoproteins (ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4). The results of our study suggested that the expression of this glycoproteins is exclusively restricted to the oocyte. Finally, ZP4 was analyzed by means of a phylogenetic approach in the subfamily Murinae.
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    Cicatrización de la piel de dorada (Sparus aurata L.)
    (Universidad de Murcia, 2023-10-26) Albaladejo Riad, Nora; Cuesta Peñafiel, Alberto; Esteban Abad, María de los Ángeles; Escuela Internacional de Doctorado
    Esta Tesis Doctoral se enfoca en el estudio del proceso de cicatrización de la piel de la dorada (Sparus aurata), una especie con gran importancia económica en el Mediterráneo. La investigación se divide en dos partes: la Parte I (Capítulos 1 y 2) se centra en el estudio celular del proceso de cicatrización de heridas cutáneas, estableciendo modelos in vitro para analizar el proceso de re-epitelización y la liberación de trampas extracelulares. Por otro lado, la Parte II (Capítulos 3 y 4) se enfoca en el uso de productos naturales, como inyecciones cutáneas o suplementos dietéticos, con el objetivo de mejorar la cicatrización de heridas en la piel de la dorada in vivo. En el Capítulo 1 se llevaron a cabo estudios microscópicos y genéticos del proceso de cicatrización de heridas en la piel de dorada in vitro. El explante de piel de aleta caudal de dorada presenta características de migración celular colectiva durante la fase inicial de cultivo de 3 días, caracterizada por la preservación de las uniones célula-célula y el movimiento celular dirigido. Los hallazgos presentados en este estudio proporcionan evidencia convincente de un proceso de Transición Epitelial-Mesenquimal (EMT) que ocurre durante un período de cultivo de 7 días de explantes de piel de aleta caudal de dorada, lo que lo convierte en un buen modelo in vitro para estudios de cicatrización de heridas. En el Capítulo 2 se investigó la formación de trampas extracelulares (ETs) por parte de los leucocitos del riñón cefálico de la dorada. Se usaron diferentes estimulantes (β-glucano de Saccharomyces cerevisiae (BG), lipopolisacárido de Escherichia coli (LPS), ionóforo de calcio A23187 (ICa), forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) y ácido poli-inosínico:poli-citidilico (Poli I:C)) y se observó la liberación de ETs, los cuales son estructuras fibrosas formadas por ADN, histonas y proteínas antimicrobianas. Todos los estimulantes usados en este estudio han inducido la liberación de trampas extracelulares y actividad mieloperoxidasa por parte de leucocitos de riñón cefálico de dorada, y cada estimulante ha generado una respuesta específica, siendo el más eficiente entre los usados el PMA (500 ng/mL) tras 1 hora de incubación. Además, las trampas extracelulares liberadas por los leucocitos de riñón cefálico de dorada exhibieron actividad mieloperoxidasa asociada. En el Capítulo 3, se evaluaron los efectos de los ácidos grasos de cadena corta (AGCC) en la respuesta inflamatoria en la piel. Se encontró que el ácido acético era el AGCC más efectivo en la reducción de la inflamación inducida por carragenina, lo que sugiere su potencial uso como agente anti-inflamatorio en la cicatrización de heridas en peces. En el Capítulo 4, se estudió la suplementación dietética con micropartículas de fibroína de seda para mejorar la cicatrización de heridas en la piel de la dorada. Se observó que la dieta enriquecida con SF mejoraba la proporción de cierre de las heridas y promovía la proliferación celular, la fase inflamatoria y la expresión de genes relacionados con la reparación de tejidos. Estos hallazgos sugieren que la fibroína de seda podría tener potencial terapéutico en la mejora de la cicatrización de heridas en peces.
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    Comorbilidades en pacientes psoriásicos : estudio retrospectivo y comparativo de cohortes
    (Universidad de Murcia, 2021-11-15) Fatás Lalana, Belén María; Teresa Martínez Menchón; Ana Belén Pérez Oliva; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
    La psoriasis es una enfermedad crónica e inflamatoria en piel que provoca el enrojecimiento, inflamación y descamación de ésta. Los objetivos de la presente tesis fueron el estudio de las comorbilidades asociadas a la psoriasis y la influencia de éstas en la respuesta al tratamiento con fototerapia de los pacientes, así como, el estudio del efecto de la glucemia y los fármacos antidiabéticos en la inflamación crónica en piel en modelos de pez cebra y organoides de epidermis humana. Para ello se realizó un estudio que incluyó a 300 sujetos, 200 pertenecieron al grupo de pacientes con psoriasis y 100 al grupo control. Todos los sujetos cumplieron los requisitos de ser mayores de 18 años, haber firmado el consentimiento informado y tener una analítica de menos de 12 meses desde el inicio del estudio. En el caso de los pacientes con psoriasis debieron ser diagnosticados de psoriasis en placas y generalizada y haber recibido tratamiento con fototerapia en los últimos 10 años. Asimismo, en el caso del grupo control los pacientes debían no padecer psoriasis. En todos los pacientes se estudiaron las comorbilidades presentadas mediante informes del médico de atención primaria, informes de especialistas y medicación crónica. Para el estudio de la fototerapia en pacientes con psoriasis se tuvo en cuenta el tipo de fototerapia administrada, el número de ciclos administrados, el PASI inicial y final y la mejoría de la psoriasis con el tratamiento. Además, se utilizó como modelo animal el pez cebra de la línea mutante spint1a y modelos organotípicos de epidermis humana en 3D. Los resultados mostraron una mayor incidencia de patología psiquiátrica, enfermedad hepática, enfermedad renal, hipertensión, patología cardíaca, patología vascular, diabetes, patología gastrointestinal, enfermedades autoinmunes e infecciosas, dislipemia y artritis psoriásica en pacientes con psoriasis frente al grupo control. Sin embargo, no se mostró una diferencia estadísticamente significativa de la incidencia de osteoporosis, enfermedades dermatológicas, hiperuricemia, artritis y anemia entre ambos grupos. La incidencia de las comorbilidades mostró una diferencia significativa a partir de los 40 años de edad en los pacientes con psoriasis pudiendo ser indicativo de un envejecimiento prematuro. La fototerapia resultó ser un tratamiento eficaz en la psoriasis moderada-grave logrando un blanqueamiento total en más de 3 de cada 10 pacientes, mostrando las mujeres una mejor respuesta al tratamiento frente a los hombres. La UVBBE fue el tipo de fototerapia más eficaz. La enfermedad hepática, hipertensión, patología cardíaca, patología vascular y diabetes mostraron un peor pronóstico para lograr un PASI100 en el tratamiento con fototerapia. Los pacientes que padecieron anemia o enfermedad hepático presentaron un riesgo incrementado de fracaso terapéutico. Finalmente, el pez cebra y los modelos organotípicos de psoriasis humana en 3D demostraron el influjo de la comorbilidad diabética en psoriasis. En concreto, demostraron la influencia tanto de los niveles de glucemia, como del transporte a través de su receptor GLUT1 en la inflamación en piel. Además, se observó un efecto directo antiinflamatorio de la inhibición de DPP-4 en los queratinocitos.
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    Datos preliminares sobre la epitelización con membrana amniótica en úlceras complejas de pie diabético
    (Universidad de Murcia, 2018-12-20) Rodríguez Valiente, Mónica; Alcaraz Lorente, Patricio José; Castellanos Escrig, Gregorio; García Hernández, Ana María; Escuela Internacional de Doctorado
    INTRODUCCIÓN El Pie Diabético, es una importante complicación de la Diabetes Mellitus que requiere un adecuado manejo y tratamiento, para evitar en medida de lo posible amputaciones menores o mayores de los miembros inferiores. En la Unidad de Heridas y Pie Diabético del Hospital Clínico Universitario Virgen de la Arrixaca (HCUVA) tratamos a pacientes con úlceras complejas empleando para la cicatrización-epitelización terapias avanzadas, como es el caso de la Terapia Celular con Membrana Amniótica (MA). A la MA se le atribuyen propiedades analgésicas, antimicrobianas y anti-inflamatorias, relacionadas con su capacidad para sintetizar y liberar sustancias que incluyen citoquinas y moléculas de señalización. Se trata de un tejido fácil de adaptar que no induce rechazo con unas características idóneas para tratar estas úlceras. Nuestro objetivo fue determinar la seguridad y eficacia en la cicatrización-epitelización aplicando MA en el tratamiento de úlceras complejas de Pie Diabético. MATERIAL Y METODO Se aplicó MA criopreservada a pacientes con ulceras complejas en Pie Diabetico de más de 8 semanas de evolución desde Mayo de 2014 hasta Noviembre de 2017. Se incluyeron aquellos pacientes que tras ser informados, firmaron el consentimiento informado. No se incluyeron pacientes con signos clínicos de infección ni proceso neoplásico activo. La MA se aplicó semanalmente sobre el lecho de la herida. RESULTADOS Fueron tratados 18 pacientes entre 16 y 82 años con úlceras complejas en Pie Diabético, afectos de polineuropatía, macro y microangiopatia diabética y deformaciones en los pies. El tiempo medio de tratamiento previo a la aplicación de MA en los pacientes fue de 24 meses y medio, el área media de las heridas fue de 10,56 cm2 (0,52 cm2- 42,5 cm2). En 17 de los 18 pacientes (94%) se observó una reducción del área de la úlcera con una epitelización completa, y en un paciente se redujo dicha área un 75%. En cuanto al tiempo medio de epitelización con MA fue de 145 días (46-392) con una media de 11,22 membranas aplicadas (4-40). En un paciente (paciente 14) se procedió a la exéresis de un fragmento óseo del quinto metatarsiano por osteomielitis. CONCLUSION Nuestros resultados muestran que el tratamiento con MA humana criopreservada es un tratamiento seguro y eficaz en pacientes con úlceras complejas en Pie Diabético, ya que ha logrado la cicatrización-epitelización de estas úlceras de larga evolución, en las que habían fallado otros tratamientos previos. Por lo tanto, es una herramienta útil que contribuye a la evolución hacia la resolución de estas úlceras y se puede utilizar con seguridad después de que la úlcera se ha estabilizado clínicamente y los signos de infección han sido eliminados.
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    Desarrollo postnatal del sistema inmunitario asociado al intestino en la cabra / Juan Seva Alcaraz ; Juan Seva Alcaraz ; Antonio Bernabé Salazar, José Antonio Navarro Cámara.
    (Murcia : Universidad de Murcia, Facultad de Veterinaria, Departamento de Anatomía, Anatomía Patológica Comparadas y Tecnología de Alimentos,, 1996) Seva Alcaraz, Juan
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    Estudio de la capacidad accesoria de clones de linfocitos T en el reconocimiento de un seperantígeno.
    (Murcia : Universidad, Facultad de Biología,, 1994) Martínez-Esparza Alvargonzález, María Concepción
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    Estudio de las respuestas de defensa inducidas por elicitores en cultivos de células vegetales.
    (2013-06-26) Sabater Jara, Ana Belén; Cusidó Vidal, Rosa Mª; Pedreño García, María Ángeles; Facultad de Biología
    En esta memoria, los cultivos celulares de Capsicum, Daucus carota y Taxus x media sometidos a elicitación con ciclodextrinas y jasmonato de metilo, se han empleado como sistemas de producción de metabolitos secundarios de naturaleza terpenoide, que además de ser importantes en la defensa vegetal, suponen un importante recurso natural para la obtención de fármacos, aditivos alimentarios, nutracéuticos y cosméticos. Por otro lado, la elicitación también se ha utilizado como herramienta para estudiar el proteoma extracelular en cultivos celulares de C. annuum, C. chinense y D. carota con el fin de determinar las respuestas de defensa inducidas en estas condiciones y para analizar el perfil de expresión de los genes que codifican para las enzimas implicadas en la ruta de biosíntesis de taxanos con el fin de determinar las etapas limitantes de esta ruta biosintética. Palabras clave: Aromadendrano Ciclodextrinas Cultivo celular Elicitor Fitosteroles Jasmonato de metilo Metabolitos secundarios Proteínas relacionadas con la patogénesis Secretoma Solavetivona Taxanos Terpenos Study of defense responses induced by elicitors in plant cell cultures In this work, Capsicum sp, Daucus carota and Taxus x media cell cultures under elicitation with cyclodextrins and methyl jasmonato hve been used as cell biofactories for the production of terpenoid secondary metabolites, which are important not only in plant defense, but also as important natural resource for obtaining drugs and food additives, as well as potential nutraceutical and cosmetic ingredients. On the other hand, we have also used elicitation as a tool for studying extracellular proteome in C. annuum, C. chinense and D. carota cell cultures in order to determine induced defense responses as well as the expression profile of genes encoding enzymes involved in the biosynthesis pathway of taxanes with the aim of finding the bottle-neck steps in taxane biosynthesis. Keywords: Aromadendrane Cyclodextrins Cell culture Elicitor Phytosterols Methyl jasmonate Secondary metabolites Pathogenesis-related proteins Secretome Solavetivone Taxanes Terpenes
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    Estudio del papel de la vitamina B6 en la psoriasis
    (Universidad de Murcia, 2020-01-16) Martínez Navarro, Francisco Juan; García Moreno, Diana; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
    La psoriasis es una enfermedad inflamatoria de la piel que afecta al 3% de la población humana. Aunque múltiples terapias basadas en la neutralización de citoquinas proinflamatorias han sido usadas con relativo éxito, se requieren tratamientos adicionales. En este trabajo mostramos análisis in silico de datos de expresión génica disponibles públicamente de piel lesionada y no lesionada de pacientes de psoriasis, junto con los análisis de metabolitos de vitamina B6 in el suero de pacientes de psoriasis antes y después del tratamiento PUVA, que demuestran que lmetabolismo de vitamina B6 tanto local como sistémicamente están alterados. Estudios funcionales en embriones/larvas de modelo de pez cebra muestran que diferentes vitámeros de vitamina B6 son capaces de reducir en una manera dosis dependiente la infiltración de neutrófilos en la piel, el estrés oxidativo y la actividad Nfkb en tres modelos independientes de inflamación en piel, llamados Tnfr2-, Spint1a- y Clint1a-deficientes. Además, PYGL y G6PD, dos enzimas dependientes de vitamina B6 han sido reveladas como potenciales dianas para el tratamiento de la psoriasis.
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    Estudio del papel de Nampt y Parp1 en las enfermedades inflamatorias crónicas de la piel
    (Universidad de Murcia, 2019-12-05) Martínez Morcillo, Francisco Javier; García Moreno, Diana; Mulero Méndez, Victoriano Francisco; Escuela Internacional de Doctorado
    La psoriasis y la dermatitis atópica, o ezcema, son dos enfermedades no contagiosas de inflamación crónica en piel, cuya prevalencia es 0,1-3 % y 2-20 %, respectivamente. Su etiología no ha sido determinada, predispuestos genéticamente, numerosos factores ambientales pueden desencadenar la patología, estando también involucradas causas alérgicas e inmunitarias. Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD+) es un importante transportador de hidrógenos en reacciones redox que participa en más de 500 reacciones. NAD+ regula procesos celulares vitales, como el funcionamiento y el metabolismo mitocondrial, reacciones redox, respuesta inmunitaria e inflamación y daño en ADN, entre otras. NAMPT, la enzima limitante de la ruta de salvamento de NAD+, ha sido asociada a estrés oxidativo e identificada como un biomarcador universal de inflamación crónica, incluyendo psoriasis. Experimentos con líneas transgénicas de pez cebra que permiten el seguimiento de células inmunitarias y actividad transcripcional de NFB, nos permitió demostrar que NAD+ y sus precursores regulan la liberación de H2O2 por los queratinocitos y la inflamación en piel. Consecuentemente, la inhibición farmacológica de Nampt por FK-866, que induce depleción de NAD+, contrarrestó la síntesis de H2O2 por los queratinocitos. Utilizando como modelo de psoriasis el mutante spint1a, se encontró que presentan una mayor producción de H2O2 en la piel y daño en ADN. En este modelo, FK-866 redujo la síntesis de H2O2, la inflamación en piel, la dispersión de neutrófilos, la proliferación de queratinocitos y el daño en ADN, restaurando así la integridad epitelial, lo que se revirtió por NAD+. La depleción de NAD+ debe tener un impacto en la actividad enzimática de enzimas que dependen de NAD+ como cofactor. En este trabajo, se utilizaron varios inhibidores específicos de estas enzimas, demostrando que la inhibición de Parp1 por olaparib, veliparib o talazoparib, mostraba los mismos efectos que FK-866. Tanto FK-866 como olaparib restauraron la integridad epitelial en el mutante de la subunidad β1a de la ATPasa transportadora de Na+/K+ (atp1b1a). En los mutantes spint1a, olaparib indujo daño en ADN y redujo la muerte celular y la PARilación. Llamativamente, los compuestos eliminadores de ROS también funcionaron. Este resultado junto con el mayor daño en ADN nos condujo a hipotetizar que parthanatos, una muerte celular dependiente de PARP1 tras un importante daño en ADN, ocurría en los agregados cutáneos. De acuerdo con la hipótesis, un inhibidor de la traslocación de AIFM1 de la mitocondria al núcleo, un paso fundamenta en parthanatos, mostró los mismos resultados que la inhibición de Nampt y Parp1 en los mutantes spint1a. En datos transcriptómicos de humano comparando piel sana y de pacientes psoriáticos o dermatitis atópica, encontramos un perfil de expresión alterado en genes que codifican enzimas clave en las rutas de NAD+ de salvamento, Preiss-Handler y de novo en tejidos lesionados en comparación con tejidos sin lesión o sanos. De forma similar, encontramos un perfil de expresión alterado en genes que codifican enzimas implicadas en el metabolismo de PAR y parthanatos. El perfil de expresión de genes involucrados en el metabolismo de NAD+, PAR y parthanatos correlacionan con genes marcadores inflamatorios de cada enfermedad, de acuerdo con su respuesta de linfocitos TH. Adicionalmente, análisis en HPLC-MS de suero de pacientes de psoriasis indicaron que los respondedores a fototerapia (PUVA) presentaban menores niveles de NAD+, relación NAD+/NADH y SAM antes del tratamiento que se normalizaban tras este, pudiendo ser potencialmente utilizado como biomarcadores séricos para predecir la respuesta a la fototerapia. Finalmente, confirmamos una acumulación a nivel proteico de Nampt y PAR en el núcleo de queratinocitos en lesiones psoriáticas. Colectivamente, el metabolismo de NAD+ y PAR podrían representar nuevas dianas terapéuticas para la psoriasis y probablemente otras enfermedades de inflamación crónica en piel.