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- PublicationOpen AccessAlteraciones de la función plaquetaria en la cirrosis biliar experimental: homeostasis del calcio intracelular(2015-01-09) Romecín Durán, Paola Alejandra; García-Estañ López, Joaquín; Marín Atucha, Noemí; Facultad de MedicinaIntroducción: En la cirrosis hepática se producen diversas alteraciones hemostáticas, incluyendo episodios de sangrado, aunque en un 9-20 % hay riesgo de trombosis. Algunos factores extrínsecos e intrínsecos están alterados en estos pacientes y su papel en el desarrollo de esas alteraciones no es completamente conocido. Objetivos: Investigar el papel de la homocisteína (Hcy), ácidos biliares, óxido nítrico (NO) y ácido fólico en la función plaquetaria de ratas con cirrosis experimental. Metodología: Se han usado plaquetas de ratas con ligadura del conducto biliar (LCB), en las que se determinó su capacidad de agregación, los niveles de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i) y su regulación, así como el papel de las especies-reactivas de oxígeno (ROS) y la expresión de la P-selectina. Conclusiones: Los animales LCB sin ascitis, presentan mayor agregación, movilización de [Ca2+]i, producción de ROS y expresión de P-selectina y menor entrada de calcio Capacitativa (ECC). Los animales LCB con ascitis, sin embargo, no muestran muchas de estas alteraciones. La ausencia de NO y/o la presencia de ácidos biliares hace que disminuya la ECC en LCB. El ácido fólico puede revertir la hiperagregación, sobreexpresión de P-selectina, reducir la liberación de Ca2+ de los almacenes y normalizar la producción de ROS. Palabras clave: Ligadura del conducto biliar (LCB), homocisteína (Hcy), óxido nítrico (NO), especies reactivas de oxigeno (ROS), entrada capacitativa de Ca2+ (ECC), calcio intracelular ([Ca2+]i), ácido desoxicólico (DC) y quenodesoxicólico (CDC). CHANGES OF PLATELET FUNCTION IN EXPERIMENTAL BILIARY CIRRHOSIS: INTRACELLULAR CALCIUM HOMEOSTASIS Introduction: In liver cirrhosis, several haemostatic abnormalities occur, mostly episodes of bleeding, but there is a 9-20 % risk of thrombosis. Some extrinsic and intrinsic factors are altered in these patients and their role in the development of these alterations is not completely known. Objetives: To investigate the role of homocysteine (Hcy), bile acids, nitric oxide (NO) and folic acid on platelet function of rats with experimental cirrhosis. Methodology: We have used platelets of rats with bile duct ligation (BDL), to measure aggregation, Ca2+-intracellular levels and its regulation ([Ca2+]i), reactive oxygen species-(ROS) and the expression of P-selectin. Conclusions: LCB rats without ascites show greater platelet aggregation, mobilization of [Ca2+]i, ROS production and expression of P-selectin and less capacitative calcium entry (ECC). In platelets of LCB with ascites, many of these alterations are absent. The absence of NO and/or presence of bile acids reduce ECC in platelets of LCB animals. Folic acid can reverse the hyperaggregation, overexpression of P-selectin, reduce the release of Ca2+ stores and normalize ROS production. Keywords: Bile duct ligation (BDL), homocysteine (Hcy), nitric oxide (NO), reactive oxygen species (ROS), capacitative Ca2+ entry (ECC), intracellular calcium ([Ca2+]i), deoxycholic acid (DC) and chenodeoxycholic (CDC).
- PublicationOpen AccessAlteraciones de la función plaquetaria en la cirrosis hepática(2015) Romecín, P.; Ortiz Ruiz, María Clara; Iyú Espinosa, David; García-Estañ López, Joaquín; Marín Atucha, Noemí; Fisiología
- PublicationOpen AccessCa2+-ATPasa y Muerte Celular Inducida por Ca2+ en células Cardíacas H9c2(2015-02-16) Lax Pérez, Antonio Manuel; Fernández Belda, Francisco; Soler Pardo, Fernando; Departamento de Bioquímica y Biología Molecular ALa Ca2+-ATPasa de RS puede hidrolizar ATP a través de una ruta alternativa en la que solo intervienen conformaciones de la proteína que no unen Ca2+. El mecanismo molecular de esta actividad hidrolítica implica un cambio conformacional inducido por ATP que produce aproximaciones de los dominios citosólicos. El uso de indicadores fluorescentes y compuestos que movilizan Ca2+ permite caracterizar flujos y depósitos intracelulares de Ca2+ que están implicados en la generación de señales intracelulares de Ca2+ en células H9c2. La mitocondria es capaz de interpretar señales citosólicas de Ca2+ que se generan en el retículo sarco-endoplásmico (RSE). El efecto apoptótico que se observa en presencia del inhibidor Tapsigargina (TG) es dependiente de la concentración usada. La muerte celular se produce antes cuando TG provoca apertura del poro de permeabilidad transitoria mitocondrial. El daño producido en el RSE activa la ruta apoptótica mitocondrial con participación de cas pasa 8 en un lazo que amplifica la cascada degradativa de las caspasas. Las células disponen de mecanismos alternativos de muerte celular en los que no participan caspasas.
- PublicationOpen AccessDisminución de los efectos genotóxicos, citotóxicos y radiosensibilizante de bisfosfonatos mediante antioxidantes : un modelo experimental(2014-06-04) Olivares Rueda, Amparo; Alcaraz Baños, Miguel; Facultad de MedicinaObjetivos: los objetivos esta tesis doctoral son determinar los efectos genotóxicos y citotóxicos de los bisfosfonatos en combinación con la radiación ionizante, con el fin de evaluar un posible efecto tóxico sinérgico de ambos tratamientos y determinar un posible efecto protector de algunos antioxidantes que podría permitir un aumento del efecto terapéutico y/o de las dosis administradas. Metodología: el efecto genotóxico se estudió con el test de micronúcleos en linfocitos humanos bloqueados citocinéticamente antes y después de una irradiación de 2 Gy; mientras que el efecto citotóxico se estudió con un ensayo de viabilidad celular (MTT) en las líneas celulares normales de próstata PNT2, tumorales de próstasta TRAMP-C1 y de melanoma metastásico B16F10 antes y después de la exposición a diferentes dosis de rayos X (0-20 Gy) en tratamientos combinados con bisfosfonatos (ácido zoledrónico, ibandronato y pamidronato) y con antioxidantes (apigenina, carnosol y ácido rosmarínico). Resultados y Conclusiones: los bisfosfonatos presentaron un efecto citotóxico según la dosis administrada, destacando la capacidad genotóxica y citotóxica de ácido zoledronico; y un efecto citotóxico sinérgico en el tratamiento combinado de radiación ionizante con ácido zoledronico. La administración de ciertos antioxidantes junto con los bisfosfonatos reduce la toxicidad de estos. La administración de antioxidantes disminuye el efecto lesivo inducido por la radiación ionizante, comportándose como una sustancia radioprotectora tanto del tumor como de las células normales no tumorales. Sin embargo, el carnosol y el ácido rosmarínico mostraron un efecto paradójico en las células del melanoma, ya que se comportan como radiosensibilizadores en estas células, por lo que podrían permitir una nueva estrategia que implicaría un efecto radiosensibilizador en estas células tumorales, pero al mismo tiempo con un efecto radioprotector en el tejido normal adyacente incluido en el mismo campo de irradiación. ABSTRACT Objectives: the aims this Doctoral Thesis are determine the genotoxic and cytotoxic effects of bisphosphonates both separately and in combination with ionizing radiation, in order to assess the possible existence of a synergically toxic effect resultant from both therapies and determine the potentially protective effect of antioxidants against the toxicity induced by the bisphosphonates which might enable an increase in their therapeutic effect and/or the dose administered. Methods: the genotoxic effect was studied by means of the micronucleus test in cytokinesisblocked cells of human lymphocytes irradiated before and after a 2 Gy irradiation, while the cytotoxic effect was studied by a cell viability test (MTT) in the PNT2, TRAMP-C1 and B16F10 cell line before and after exposure to different X-ray doses (0–20 Gy) in the combined treatments with bisphosphonates (zoledronic acid, ibandronate and pamidronate) and antioxidants (apigenin, carnosol and rosmarinic acid). Results & Conclusions: the bisphosphonates tested present a dose-dependent cytotoxic effect, highlighting the genotoxic and cytotoxic capacity of zoledronic acid and a synergic cytotoxic effect exists in the combined treatment of ionizing radiation plus zoledronic acid, while the administration of certain antioxidants together with bisphosphonates reduces toxicity. The administration of certain antioxidants diminishes the toxic effects induced by the ionizing radiation, behaving in a radioprotective manner in both tumour and normal, non-tumour cells. However, carnosol and rosmarinic acid display a paradoxical effect in melanoma cells since they behave in a radiosensitizing manner in melanoma cells only and thus might allow for a new strategy involving a radiosensitizing effect in the aforementioned cells, yet at the same time a protective effect in normal adjacent tissue.
- PublicationOpen AccessInfluence of soil properties on plant density and species richness of saline desert(Universidad de Murcia, 2016) Pilania, Pradeep Kumar; Panchal, Nilesh SundarjibhaiInfluencia de las propiedades del suelo en la densidad de plantas y la riqueza de especies de desierto salino El ambiente edáfico tiene una significativa influencia en la productividad. La salinidad es uno de los principales factores que afectan negativamente a la vegetación. Se estudió un ecosistema desértico de la India (Pequeño Rann de Kutch; 7020 ha) para medir la influencia de las propiedades del suelo en la vegetación. Tanto la riqueza de especies (SR) como la densidad de hierbas y arbustos/árboles (17.018 plantas m-2 y 8.617 plantas 10 m-2) fueron mayores en el punto 4, con valores altos de OC, OM, N, P, Ca y Fe (0.684, 1.179, 0.059 %, 42.338 kg ha-1, 170.732, 32.016 mg kg-1) y bajos niveles de arcilla, EC y Na (33.654%, 9.441dSm-1 y 68.699 mg kg-1). Valores altos de arcilla, Na y EC con bajo Ca y Fe resultaron en bajas densidades de SR (lugares 2 y 5). Las bajas SR y densidad se deben a bajas concentraciones de OC, OM, N, P, Fe, Ca y alta concentración de arcilla, Na y EC.