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- PublicationOpen AccessCaracterización de exosomas producidos por células oviductales in vivo e in vitro, en la especie bovina(Facultad de Veterinaria y el Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2023) Toledo Guardiola, Santa María; Matás Parra, Carmen; Rueda Gomariz, AlmudenaLas vesículas extracelulares (VEs), exosomas y micro vesículas son un tipo de estructuras heterogéneas pre-sentes en la mayoría de los fluidos orgánicos incluyendo el fluido oviductal. Las VEs contienen varios compuestos derivados de la célula original, como proteínas, lípidos, ARNm, miARN y ADN. Las VEs en el oviducto son producidas por las células epiteliales y entre sus funciones se encuentran: la interacción con los espermatozoides, mantener la viabilidad de éstos, participar en la maduración de los ovocitos y en el proceso de fecundación. Durante la fecundación in vitro y con el fin de mejorarla imitando las condiciones in vivo, numerosos investigadores han utilizado cultivos de células del epitelio oviductal bovino (CEOB) con notables mejoras. Estas células producen, entre otros componentes VEs, por ello, en este trabajo hemos planteado un estudio com-parativo de VEs presentes en el fluido oviductal (FO) bovino recogido en momentos próximos a la ovulación (in vivo) y de aquellas VEs producidas en cultivos de CEOB a los 7 días de cultivo (in vitro) comparando el tamaño, la distribución de la población y la concentración de proteína en ambos tipos. Las VEs se identificaron mediante microscopía electrónica, su tamaño mediante dispersión de luz láser y la concentración de proteínas mediante el método Bradford. Los resultados mostraron que el tamaño de las VEs fue similar entre ambos grupos experimentales. Por otro lado, sí que se observaron diferencias en cuanto a la concentración de proteínas. Las VEs obtenidas in vivocontenían mayor cantidad de proteína en su cargo que en las VEs obtenidas in vitro.En cuanto a identificación de las VEs mediante microscopía electrónica de transmisión, solo pudieron ser observadas aquellas obtenidas in vivo. Este hecho podría deberse al lugar de dónde han sido recogidas, al mét-odo de cultivo de células epiteliales oviductales bovinas o la escasez en su producción.
- PublicationOpen AccessEfecto de las secreciones de organoides de endometrio humano sobre el cultivo in vitro de embriones bovinos(Facultad de Veterinaria y el Servicio de Publicaciones de la Universidad de Murcia, 2023) Masegosa Domínguez, Alicia María; Navarro-Serna, Sergio; Pérez-García, Vicente; Coy, Pilar; Juan, Ángela; Romero Aguirregomezcorta, JonDurante los últimos 50 años, la fertilidad de las vacas lecheras de alta producción ha disminuido debido a la intensidad de la selección genética. Para superar este obstáculo, se ha recurrido a las técnicas de reproducción asistida. Sin embargo, la producción de embriones in vitro es un proceso relativamente ineficiente, con tasas máximas de blastocistos obtenidos de alrededor del 35%. Para solventar este problema, se planteó la hipótesis de añadir al medio de cultivo secreciones de organoides de endometrio, así, los embriones producidos in vitroestarían expuestos a un ambiente más fisiológico y el rendimiento de la técnica aumentaría. Para ello, se llevó a cabo la recolección de ovocitos bovinos procedentes de un matadero local, y se procedió a su maduración in vitro, fecundación in vitro y cultivo embrionario in vitro. El medio de cultivo embrionario se suplementó al 1% (v/v) con i) secreciones de organoides de endometrio humano (ya que no existe disponibilidad de secreciones bovinas), ii) medio de cultivo Boretto, y ii) gotas de matrigel con medio de cultivo Boretto, como controles de procedimiento. Además, se incluyó un grupo control sin ningún suplemento. Se evaluó el desarrollo embriona-rio a los días 2, 7 y 8 de cultivo. El porcentaje de blastocistos a día 7 y a día 8 post inseminación fue significa-tivamente mayor (P<0.05) cuando se añadió el medio de cultivo Boretto. Además, este tratamiento incrementó la cinética de desarrollo de los embriones a día 7 post inseminación, y la calidad de los blastocistos evaluada por el número total de células, con un 85.8% más que el control. Aunque las secreciones de endometrio humano no han dado el resultado esperado, sería necesario comprobar si las secreciones de organoides específicas de endometrio bovino, a distintas concentraciones, podrían incrementar el rendimiento de la producción in vitro de embriones bovinos.
- PublicationOpen AccessParámetros de bioquímica sanguínea en bovinos adultos derivados de inseminación artificial y transferencia de embriones vitrificados producidos in vitro(Asociación Interprofesional para el Desarrollo Agrario (AIDA), 2023) Lopes, Jordana Sena; Coy, Pilar; Canovas, Sebastian; Romar, Raquel; Gadea, Joaquin; Romero Aguirregomezcorta, Jon; FisiologíaINTRODUCCIÓN La transferencia de embriones bovinos producidos in vitro y vitrificados (TEV) se ha utilizado con éxito en programas de cría para mejorar la tasa de concepción y aumentar la eficiencia de la producción de carne y leche. Sin embargo, también hay evidencias científicas que sugieren que la TEV puede te ner un impacto en algunos parámetros de salud de los animales resultantes. Previamente, nuestro grupo ha descrito diferencias entre animales derivados de transferencia embrionaria y de inseminación artificial en el periodo pre-destete para algunos parámetros de bioquímica sanguínea (Lopes et al., 2022). Este trabajo tiene por objetivo estudiar si existen diferencias en los parámetros de bioquímica sanguínea en animales de edad adulta. MATERIAL Y MÉTODOS Se tomaron muestras de sangre en la vena caudal de bovinos, de edades comprendidas entre año y medio y 4 años, producidos por inseminación artificial (IA, 7 animales, 14 muestras) o por fecundación in vitro seguida de cultivo in vitro de embriones, vitrificación y transferencia (TEV), un grupo se rea lizó con cultivo embrionario clásico (TEV-C, 7 animales, 18 muestras) y otro grupo se suplementó el medio con fluido oviductal y uterino (TEV-F; 4 animales, 12 muestras) (Lopes et al., 2020). Se evaluaron los parámetros de bioquímica en plasma mediante el uso de un analizador automático (Olympus AU400, Japón) en el laboratorio Interlab-UMU de la Universidad de Murcia. Los parámetros incluidos fueron: proteínas totales (g/dL), albúmina (g/dL), globulina (g/dL), creatinina (mg/dL), urea (mg/dL), colesterol (mg/dL), triglicéridos (mg/dL), amilasa (UI/L), lipasa (UI/L), creatinina cinasa (CK, UI/L), fos fatasa alcalina (ALP; UI/L), gamma-glutamil transpeptidasa (GGT; UI/L), aspartato aminotransferasa (AST; UI/L), alanina aminotransferasa (ALT, UI/L) y bilirrubina total (mg/dL). Los datos fueron analizados mediante una prueba ANOVA de medidas repetidas con diseño anidado (animal dentro de grupo) y grupo como factor principal, una vez descartado el efecto del sexo en los resultados. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los valores de las enzimas amilasa y AST estaban significativamente elevados en los animales del grupo TEV-C (156,2 ± 7,9 y 83,5 ± 6,5 UI/L) en comparación al grupo IA (130,9 ± 12,0 y 68,5 ± 3,4 UI/L), mientras que los valores del grupo TEV-F fueron similares al grupo AI (147,2 ± 10,9 y 68,5 ± 3,7 UI/L). Estas diferencias en el perfil amilasa-AST no fueron encontradas en estos animales en su etapa juvenil (menos de un año) y ponen de manifiesto que el perfil bioquímico de los animales derivados de TEVF es más similar al de los AI que al de los derivados del cultivo embrionario clásico (TEV-C), como se ha descrito previamente tanto en bóvidos como en suidos (París-Oller et al., 2021, 2022; Lopes et al., 2020). Los valores elevados de amilasa, enzima involucrada en la digestión de carbohidratos, y de AST, relacionada con el metabolismo de aminoácidos, podrían sugerir un mayor compromiso metabólico en los animales producidos in vitro durante su vida adulta. Por otra parte, se encontraron diferencias entre los animales de los diferentes grupos para los parámetros de creatinina y triglicéridos, donde los valores para ambos grupos de TEV (1,7 ± 0,1 y 13,5 ± 1,4 mg/dL) fueron superiores a los del grupo IA (1,3 ± 0,0 y 11,3 ± 0,9 mg/dL). Estas diferencias sí habían sido encontradas en los animales en las edades previas (Lopes et al., 2022). CONCLUSIÓN La evaluación a largo plazo de parámetros bioquímicos sanguíneos puede servir para detectar efectos de los tratamientos de reproducción asistida y dirigir el estudio de las causas que los producen.
- PublicationOpen AccessProducción de embriones in vitro en el bovino: descripción de la técnica y ejemplos de su aplicación en España.(2012) Astiz Blanco, Susana; Poto Remacha, Ángel; Ruiz López, Salvador; Romero Aguirregomezcorta, Jon; Fisiología